조직학, 조직 형태 측정 및 분석을위한 Fluorochrome Undecalcified 본 준비

그리고 탈석회화된 뼈 조직학은 뼈의 광물화된 구성 요소와 세포 구성 요소를 모두 보여주는 뼈의 미시구조를 보여주며, 뼈 전환 또는 뼈 형성 및 흡수에 대한 중요한 정보를 제공합니다. 이는 다양한 임상 및 연구 응용 분야에서 매우 중요합니다. 아름다운 이미지를 제공하고 플루로 평가 및 히스토 검안과 같은 기술을 허용합니다.

석회화된 뼈 조직학에서 수행하는 것은 기술적으로 까다로우며, 특히 큰 크기의 표본의 경우 더욱 그렇습니다. 이 비디오는 뼈의 석회화된 부분을 얻을 때 이를 극복하는 기술적 어려움과 방법을 보여줍니다. 이 섹션에 대한 히스토 형태 측정 평가에는 포함되지 않습니다.

이를 위해 다음과 같은 중요한 출판물을 참조하시기 바랍니다. 이 동영상은 표본 준비 및 고정 처리, 이식, 지면 및 절단 모두, 슬라이드 준비 및 조직 채취 후 염색을 다룹니다. 표본.

이 경우, 양의 경추는 10% 인산염 완충 제형과 용액이 들어 있는 밀봉된 불투명한 용기에 넣습니다. 형광 색소 분석을 수행해야 하는 경우 빛에 대한 노출을 최소화해야 합니다. 형광 색소는 빛에 민감하기 때문에 표본을 실험실로 가져가 크기에 맞게 다듬어 고정을 개선하고 블록에 맞는지 확인합니다.

슬라이드의 조직 방향을 이 시점에서 알아야 블록이 올바른 평면에서 준비될 수 있습니다. 안전은 매우 중요하며 칼날에 손이 닿지 않도록 기구를 사용해야 합니다. 이제 관심 영역이 크기에 맞게 조정되었습니다.

그런 다음 더 작은 띠톱으로 최종 트리밍을 수행하여 조직 손실을 줄입니다. 블록이 크기에 맞게 절단되면 고정을 완료하기 위해 새로운 공식이 들어 있는 밀봉된 불투명 용기에 넣습니다. 용기의 부피는 표본 크기의 약 10배여야 합니다.

적절한 고정을 달성하기 위해, 표본은 크기에 따라 1 주에서 2 주 동안 공식과 용액에 남아 있어야하며, 그 후 70 % 에탄올로 옮겨 블록의 크기가 크고 뼈의 낮은 투과성으로 인해 용제의 확산이 느려지기 때문에 천천히 가공이 수행됩니다. 그런 다음 탈수는 에탄올의 농도가 상승하는 것을 사용하여 수행 된 다음 부탄올에서 제거됩니다. 표본은 빛으로부터 차폐되고 지속적인 교반 하에 유지됩니다.

각 솔루션에서 약 1주일을 사용하는 것이 좋습니다. 따라서 가공에는 약 4주에서 6주가 소요됩니다. 이것은 섹션의 최종 품질을 손상시킬 수 있으므로 서두르지 마십시오.

석회화된 뼈에 사용할 수 있는 다양한 임베딩 옵션이 있습니다. 수지 또는 메타크릴레이트의 선택은 테스트할 대상에 따라 다릅니다. 예를 들어, 모든 수지에서 면역조직화학이 가능한 것은 아닙니다.

에폭시 수지는 경화를 위해 자외선이 필요하므로 형광 색소 분석을 방해할 수 있습니다. 신중한 선택을 하기 전에 제조업체 사양을 참조하는 것이 좋습니다. TEVI 7, 100을 사용하면 광학 현미경 및 형광 크롬 분석을 위한 멋진 절단 및 연마 단면이 가능하고 비용 효율적이기 때문입니다.

embedding에서 중요한 고려 사항은 뼈의 밀도와 embedding medium의 밀도가 밀접하게 일치해야 한다는 것입니다. 이것은 나중에 블록을 절단 할 때, 특히 마이크로 텀 절편의 경우 매우 중요하며, 혼합물은 제조업체의 지침에 따라 준비되고 격렬하게 흔들립니다. 프로토콜을 최적화하기 위해 퓨즈 베어 샘플을 포함하는 것이 좋습니다.

파라핀과 달리 이것은 되돌릴 수 없는 단계입니다. 블록은 절단면이 금형 안으로 내려 배치됩니다. 금형은 블록보다 커서 지지력과 힘을 제공합니다.

메타크릴레이트가 뼈로 최대한 침투할 수 있도록 필로폰 아크릴레이트 침투는 천천히 수행해야 합니다. 다시 말하지만, 빛의 노출을 최소화해야 합니다. 일주일 후 침투 용액, 침투 용액이 변경되고 경화 용액이 추가됩니다.

그런 다음 백킹 플레이트가 형성됩니다. 이를 위해 tevit 30 40을 사용합니다. 그런 다음 금형을 벗겨내고 블록이 준비되었습니다.

지상 절편은 두께가 20-50미크론 사이인 더 큰 단면을 생성합니다. 두꺼운 단면이 더 밝은 형광을 생성하므로 플루로 분석에 유용합니다.지면 단면을 생성하려면 다이아몬드 블레이드가 있는 마이크로톰이 필요합니다. 우리는 0.6mm 곡선 다이아몬드 블레이드를 사용합니다.

윤활유는 필수적입니다. 우리는 석유 기반 윤활유를 선호하지만 실리콘 기반 윤활유도 잘 작동합니다. 그런 다음 블록이 클램프에 배치됩니다.

그것은 매크로 용어로 고정되고 블록은 블레이드를 향해 전진합니다. 첫 번째 단면은 절단 면을 노출시키고 단면의 방향을 지정합니다. 버려야 합니다.

연삭은 느린 과정이므로 서두르지 마십시오. 섹션이 접지될 때 적절한 윤활이 보장되어야 합니다. 그런 다음 슬라이드에 배치됩니다.

필요에 따라 청소하고 광택을 낼 수 있습니다. 이 부분은 말리는 경향이 있으므로 그 위에 샌드위치 봉지의 일부를 놓고 평평하게 유지하는 것이 좋습니다. 또 다른 미끄럼틀이 제자리에 끼워졌다.

그런 다음 섭씨 60도에서 80도 사이의 인큐베이터에 1시간 동안 넣습니다. 이것은 메타크릴레이트를 부드럽게 하고 섹션이 슬라이드에 평평하게 부착되는 데 도움이 됩니다. 여기에서 우리는 한 달 간격으로 주입되는 세 가지 다른 형광 크롬 크롬의 복합 형광 이미지를 볼 수 있습니다.

이를 통해 뚜렷한 시점에 광물화 현장을 식별할 수 있습니다. 이러한 라벨의 복용량과 준비는 텍스트에서 찾을 수 있습니다. 미시적 용어는 광학 현미경 검사에 가장 적합한 얇은 단면을 제공합니다.

기술적으로 어려운 과정입니다. 이러한 단단한 블록을 절단하는 데 제공하는 추가 강도를 위해 썰매 마이크로톤을 사용하는 것이 좋습니다. 텅스텐 카바이드 블레이드를 포함한 다양한 블레이드를 사용할 수 있습니다.

그러나 필요에 따라 쉽고 자주 연마할 수 있는 스테인리스 스틸 블레이드를 권장합니다. 블레이드는 블록과 45도 각도를 이루도록 방향을 설정해야 합니다. 메타크릴레이트 밀도는 실내 주변 습도를 포함한 여러 요인에 영향을 받습니다.

따라서 블록은 건조된 표면에 보관해야 합니다. 연화는 필요한 경우 젖은 종이를 블록에 적용하여 달성할 수 있으며, 고품질 섹션을 얻기 위해 올바른 절단 조건을 얻기 위해 여러 섹션이 필요할 수 있습니다. 다시 말하지만, 샌드위치 백과 추가 슬라이드는 인큐베이터에 넣기 전에 섹션을 평평하게 하기 위해 고정됩니다.

염색은 왁싱이 분명히 필요하지 않다는 점을 제외하고는 표준 파라핀 내장 조직학과 유사합니다. 뼈에 사용되는 일반적인 염색에는 사프란 카운터 염색이 있는 VSA, 사프란, 연한 녹색 및 트리온으로 황금색의 질량이 포함됩니다. 이에 대한 프로토콜은 텍스트에 언급되어 있습니다.

시약은 사용 전에 선택되고 여과됩니다. 황금의. 얼룩은 히스토 검안에 자주 사용됩니다. 먼저 테스트 슬라이드의 염색을 최적화하는 것이 좋습니다.

각 단계가 끝나면 올바른 채색을 보장하기 위해 현미경으로 슬라이드를 볼 수 있습니다. 이를 통해 각 성분 염색에 대해 정확한 시간을 달성할 수 있습니다. 염색 표준물질이 최적화되면 실험의 모든 슬라이드를 열 형상에 영향을 미치는 염색 변동성을 방지하기 위해 동일한 프로토콜로 랙에서 동시에 염색합니다.

그런 다음 슬라이드는 표준 방식으로 미끄러진 것을 덮습니다. 실험에 행운을 빕니다.