ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Автор хотел бы поблагодарить мисс Лора Мэтьюз для выполнения техники и г-н Пол Пастырь для кинематографа. Этот проект был профинансирован из Университета Южной Австралии, Лабораторная медицина программы.

Подготовка 5x веронал буферного раствора (VBS) <ol><li> Для подготовки веронал буферного раствора (VBS), три отдельных решения должны быть подготовлены. </li><li> Подготовка раствора 1, растворяя 21.25gm из NaCl и 0.94gm натрия Barbitone в 350 мл дистиллированной воды. Конечные концентрации NaCl и натрия Barbitone являются 1.02M и 13 мм соответственно. </li><li> Подготовка раствора 2, растворяя 1.44gm из Barbitone в 125 мл горячей дистиллированной воды. Конечная концентрация Barbitone является 62.5mM. </li><li> Подготовка раствора 3, растворяя 20.33gm из MgCl 2 и 4.41gm из CaCl 2 в 100 мл дистиллированной воды. Конечной концентрации MgCl 2 и CaCl 2, 2.18M и 440мм соответственно. </li><li> Смешайте растворы 1 и 2 и охладить до комнатной температуры. </li><li> После совместного решения остынет, добавить 1.25ml решения 3 и регулировать рН до 7.3-7.5 использованием 1М HCl. </li><li> Отрегулируйте конечного объема 500 мл дистиллированной воды для приготовления 5x маточного раствора. </li><li> Для подготовки 1x рабочий раствор, развести акции 1:05 дистиллированной водой. </li></ol> Сенсибилизация из эритроцитов барана с гемолизин <ol><li> Подготовка гемолизин по во-первых разбавления 1:50 с VBS </li><li> Для 4 мл ЭБ добавить 6 мл на VBS и осторожно перемешайте инверсии </li><li> Центрифуга на 600 г х 5 минут </li><li> Удалите супернатант и промыть клетки еще 2 раза </li><li> После последней промывки, центрифуги клеток в 900 г 5 минут х упаковать клетки </li><li> Удалите супернатант и ресуспендирования клеток в достаточном VBS подготовить 10% раствор, т.е. 0,5 мл упакованных клеток ресуспендируют в 5 мл буфера </li><li> По каплям добавить равный объем гемолизин (кролик против овец красный антитела клеток крови) для клеток, закрученной непрерывно </li><li> Инкубировать при температуре 30 ° С в течение 30 минут на водяной бане </li><li> Аккуратно перемешайте клетки каждые 15 минут </li><li> Sensitised ЭБ, могут храниться в течение ночи при 4 ° С </li></ol> CH 50 анализа <ol><li> Этикетка ряд труб в двух экземплярах с 1:08, 1:16, 1:32, 1:64 и 1:128. </li><li> Приготовьте серию в два раза серийных разведений контрольных и испытательных сыворотки в VBS каждый в двух экземплярах </li><li> Начало в 1:04 (100 мл сыворотки + 300 мл VBS) и передачу 200 мл образца в следующем помечены трубки. </li><li> Тщательно перемешать между разведения и передачи 200мл к следующему разбавления свежей кончика пипетки. </li><li> Повторяйте, пока все пять разведения делаются. </li><li> Отменить 200мл от окончательного 1:128 разбавления. </li><li> Добавить 200 мл приостановлено сенсибилизированных ЭБ во все пробирки. </li><li> Этикетка два отдельных труб как пустые и добавьте 200 мл сенсибилизированных ЭБ + 200 мл VBS. Эти трубки будут измерять спонтанного лизиса ЭБ в VBS. </li><li> Этикетка еще две отдельные трубы, ОБЩАЯ лизиса и добавить 200 мл сенсибилизированных ЭБ + 200 мл дистиллированной воды. </li><li> Аккуратно перемешайте все пробирки. </li><li> Инкубировать при 37 ° С в течение 30 минут в водяной бане смешивания через 15 минут. </li><li> Центрифуга образцов при 1500 г в течение 5 минут, чтобы осадок эритроцитов. </li><li> Передача 100 мл супернатант из каждой пробирки, чтобы хорошо в 96-плоским дном тарелку. </li><li> Добавить 100 мл дистиллированной воды в каждую лунку. </li><li> Измерить абсорбцию образцов при 540нм использованием пластины спектрофотометр. </li></ol> Расчеты <ol><li> Рассчитать среднюю оптическую плотность каждого образца </li><li> Вычтите BLANK абсорбции (спонтанного лизиса) из всех образцов </li><li> Рассчитать% лизис для каждого разведения по следующей формуле: <img src="/files/ftp_upload/1923/1923eq1.jpg" alt="Уравнение" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Уравнение"></li><li> Участок процент лизиса (вертикальная ось) в зависимости от разведения сывороток на горизонтальной оси. </li><li> Расчет разбавления требуется на 50% гемолизу для контроля и испытания сыворотки (рис. 2). </li></ol> Представитель Результаты: Видео включает в себя пример представителя результаты. На практике контроль сыворотки также запустить в то же время в качестве тест-сыворотки и рассматривается в том же порядке. Ниже (табл. 1) приведен пример данных из протестированных образцов сыворотки. Данные манипуляции в соответствии с уравнением, представленные в 5,3. <table border="1"><tbody><tr><td> Образец </td><td> OD 540 </td><td> Среднее </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Пустой </td><td> 0,042, 0,044 </td><td> 0,043 </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Всего лизис </td><td> 0,183, 0,183 </td><td> 0,183 </td><td></td><td></td></tr><tr><td colspan="5"></td></tr><tr><td><st><td> OD 540 </td><td> Среднее </td><td> Средние и Бланк </td><td> % Лизис </td></st></td></tr><tr><td> 1:08 </td><td> 0,200, 0,219 </td><td> 0,210 </td><td> 0,168 </td><td> 116 </td></tr><tr><td> 1:16 </td><td> 0,179, 0,173 </td><td> 0,176 </td><td> 0,134 </td><td> 93 </td></tr><tr><td> 1:32 </td><td> 0,134, 0,110 </td><td> 0,122 </td><td> 0,08 </td><td> 55 </td></tr><tr><td> 1:64 </td><td> 0,053, 0,066 </td><td> 0,059 </td><td> 0,017 </td><td> 12 </td></tr><tr><td> 1:128 </td><td> 0,044, 0,045 </td><td> 0,045 </td><td> 0,003 </td><td> 2 </td></tr></tbody></table><img src="/files/ftp_upload/1923/1923fig1.jpg" alt="Рисунок 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 1"> Рисунок 1. Активация классического пути комплемента. Классический путь активируется путем связывания иммуноглобулина M (IgM) или иммуноглобулин G (IgG) на поверхности клетки-мишени. Fc части Ab связывается с C1q, C1R будет активирована, и это в свою очередь, активирует другой молекулой C1R которые вместе активирует две молекулы C1s. C1s теперь расщепляет С4, который предоставляет сайт связывания С2, который также расщепляется. Связывание C4b и C2a приводит к образованию комплекса называют конвертазы С3. Этот комплекс теперь расщепляет C3 формирования C3a и C3b, некоторые из которых в сочетании с конвертазы C3 формирования конвертазы C5. Этот комплекс в настоящее время действует на С5, с результатом C5b привязки к C6 начало образованию комплекса мембранной атаки (MAC). C5b6 действует на C7, который в свою очередь воздействуют на С8 и в конечном счете на C9 в результате формирования окончательной MAC. (Goldsby и др., 2003). <img src="/files/ftp_upload/1923/1923fig2.jpg" alt="Рисунок 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Рисунок 2"> Рисунок 2. Построение выборки данных и расчета CH50 для контроля и испытания образцов сыворотки. (А), рассчитанный в процентах (%) лизис и управления (•) и тест () образцах сыворотки показаны в зависимости от разбавления фактор. (Б) Для расчета 50% лизиса, линия рисуется от 50% процентов значения, до пересечения с графиком линии, а затем вертикальная линия до разбавления. В этом примере 35-кратного разбавления контроля и 21,6 раза разведения теста сыворотки, необходимой для достижения 50% лизиса. Эти данные показывают, что там меньше дополнением присутствуют в сыворотке тест по сравнению с контролем, как это требуется меньше разбавление до 50% лизиса была достигнута. Контрольная проба также показывает,&gt; 100% лизиса в разведении 1:8. Скорее всего, это из-за неполного лизиса ЭБ на дистиллированную воду и более эффективное лизис компонентов комплемента.

<ol><li>Goldsby, R. A., Kindt, T. J., Osborne, B. A., Kuby, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aGoldsby%2C+RA+%22Immunology%22">Immunology</a>. , W.H. Freeman. (2003).</li>
</ol>

CH 50 анализа подлежит много помех. Некоторые ЭБ более хрупки, чем другие, в результате спонтанного гемолиза, что не имеет отношения к дополнять деятельность. Сродство антител кролика варьируется от партии к партии и от одного производителя к другому, это влияет на количество антител, которые связываются с ЭБ. Кроме того, процесс информирования ЭБ с антителами приводит к клеткам с разным количеством антител покрытие ЭБ. Сбор и хранение образцов являются важным потенциальным источником ошибок. Компонентов комп...

<table><tbody><tr><td>Эритроциты овцы</td><td>CSL</td><td>2490201</td><td>Использовать в конечной концентрации 1%</td></tr><tr><td>Сыворотка</td><td></td><td></td><td>Сыворотка крови человека</td></tr><tr><td>Неконъюгированная кроличья антисыворотка к эритроцитам овцы (гемолитическая)</td><td>AbD Serotec</td><td>C12HSB</td><td></td></tr><tr><td>96-луночный планшет с плоским дном</td><td>Sarstedt Ltd</td><td>83.1839</td><td></td></tr><tr><td>Верональный буферный физраствор</td><td></td><td></td><td>Использовать в конечной концентрации 1x</td></tr><tr><td>Водяная баня</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Планшетный ридер</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Помещение/инкубатор при 37&amp;#x00B0;C</td><td></td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

Измерение 50% Гемолитическая Дополнение (ch 50) Активность сыворотки

Measuring the 50% Haemolytic Complement (CH50) Activity of Serum

Системы комплемента представляет собой группу белков, которые при активации приводит к лизису клетки-мишени и облегчает фагоцитоз через opsonisation. Отдельные компоненты дополнения могут быть количественно однако это не дает никакой информации о деятельности путем. CH<sub&gt; 50</sub&gt; Является скрининг-тест для активации классического пути комплемента (рис. 1), и она чувствительна к сокращению, отсутствие и / или бездействия какого-либо компонента пути. CH<sub&gt; 50</sub&gt; Тесты функциональных возможностей компонентов сыворотки дополнение классический путь для лизиса эритроцитов барана (ЭБ), предварительно покрытой кролика против овец красные клетки крови антител (гемолизин). Когда антителами ЭБ инкубируют с тестовыми сыворотки, классический путь комплемента активируется и гемолиз результаты. Если компонента комплемента отсутствует, CH<sub&gt; 50</sub&gt; Уровня будет равен нулю, если один или несколько компонентов классического пути уменьшаются, CH<sub&gt; 50</sub&gt; Будет уменьшаться. Фиксированного объема оптимально сенсибилизированных ЭБ добавляется к каждому разведения сывороток. После инкубации смесь центрифугируют и степень гемолиза можно измерить с помощью измерения поглощения гемоглобина выпущены в надосадочной на 540нм. Количество дополнением деятельности определяется путем анализа потенциала различных разведений сыворотки тест лизировать покрытые антителом ЭБ. Это видео описывает экспериментальные этапы анализа уровня комплемента деятельности классического пути комплемента.

Классический путь активируется антител и достигает высшей точки в целевую лизис клетки. CH<sub&gt; 50</sub&gt; Анализ позволяет определить дополнять активность сыворотки. Это видео демонстрирует этапы определения CH<sub&gt; 50</sub&gt; Из сыворотки, расчетов и интерпретация результатов.

Измерение 50% Гемолитическая Дополнение (CH 50) Активность сыворотки

Система комплемента представляет собой группу белков, которые при активации приводят к лизису клеток-мишеней и способствуют фагоцитозу посредством опсонизации. Отдельные...

Измерение 50% гемолитической активности комплемента сыворотки (CH 50). Вам понадобятся дозаторы на 200 µL и 1000 µL, исследуемая сыворотка, хранившаяся на льду, сенсибилизированные эритроциты овцы, фосфатно-солевой буфер, дистиллированная вода, пробирки для исследуемой сыворотки, а также пробирки для определения базового лизиса и полного лизиса, вортексный смеситель и 96-луночный планшет с плоским дном. Маркируйте пробирки индивидуально: контрольную и пробирку с конечным разведением. В данном случае мы начинаем с разведения 1:8.Продолжите проводить двукратные разведения, чтобы получить разведения 1:16, 1:32, 1:64 и 1:128; остальные пробирки пометьте как «бланк» (blank) и «полный лизис» (total lysis). После того как все пробирки будут промаркированы, можно приступать к разведению исследуемой сыворотки. Начните с переноса 300 µL солевого буфера R в чистую пробирку.Теперь перенесите 100 µL сыворотки в 300 µL солевого буфера R. Это позволит получить исходный разведение в соотношении один к четырем. Убедитесь, что образец сыворотки тщательно перемешан.Теперь перенесите 200 µL фосфатно-солевого буферного раствора в предварительно маркированные пробирки. Также добавьте 200 µL фосфатно-солевого буферного раствора в две холостые пробирки для общего лизиса. В них добавьте 200 µL дистиллированной воды вместо фосфатно-солевого буферного раствора.Теперь перенесите 200 µL сыворотки, разведенной в соотношении 1:4, в пробирку с маркировкой 1:8. Ранее мы перенесли по 200 µL фосфатно-солевого буфера в серию пробирок от 1:8 до 1:128. Таким образом, будет получен разведение 1:8.Тщательно перемешайте образец, затем перенесите 200 µL в пробирку под номером один, указанную в пункте 16. Повторяйте процедуру до тех пор, пока не будет разведена вся серия пробирок. Удалите 200 µL из пробирки с разведением 1:28, чтобы конечный объем составил 200 µL.Сенсибилизированные эритроциты овцы могли осесть с течением времени. Их необходимо ресуспендировать, осторожно несколько раз перевернув пробирку. После тщательного ресуспендирования перенесите 200 µL сенсибилизированных эритроцитов овцы в каждую из подготовленных пробирок.Убедитесь, что сыворотка тщательно перемешана с эритроцитами. Сенсибилизированные эритроциты овец, добавленные в контрольную пробирку (blank), позволят определить спонтанный лизис, а кровь, добавленная в пробирку для полного лизиса, позволит определить значение 100%. Используя вортекс на низких оборотах, аккуратно перемешайте каждую из пробирок. Затем поместите пробирки в водяную баню при 37 °C и инкубируйте в течение 30 минут.По истечении 15 минут инкубации осторожно еще раз перемешайте содержимое пробирок на вортексе и инкубируйте еще 15 минут. После инкубации перенесите пробирки в центрифугу, установленную на температуру 4 °C, и центрифугируйте при 1500 G в течение пяти минут. После центрифугирования осторожно извлеките пробирки и поместите их в подходящий штатив. Здесь вы увидите осадок эритроцитов, в то время как SNA будет иметь красный цвет.Для анализа переноса гемоглобина внесите 100 µL дистиллированной воды в нужное количество лунок плоской 96-луночной планшетки. Осторожно, избегая захвата осадка, перенесите 100 µL супернатанта в соответствующую лунку 96-луночной планшетки. После того как все образцы будут внесены в планшетку, измерьте абсорбцию с помощью планшетного спектрофотометра при длине волны 540 nm.Здесь представлены необработанные данные абсорбции для двух повторностей: A1 и B1. Обратите внимание на разведение 1:8.Затем у нас есть данные для разведений 1:16, 1:32, 1:64 и 1:128. A6 и B6 представляют собой холостую пробу, в то время как A7 и B7 — полный лизис.После сбора данных необходимо рассчитать среднее значение абсорбции для каждой дубликатной пробы. Затем из всех образцов вычтите абсорбцию холостой пробы, которая представляет собой спонтанный лизис. Когда все данные будут собраны, можно рассчитать процент лизиса для каждого разведения, используя следующую формулу.После расчета всех данных постройте график зависимости процента лизиса на вертикальной оси от разведения сыворотки на горизонтальной оси. Полученный график можно использовать для определения разведения сыворотки, необходимого для лизиса 50% сенсибилизированных эритроцитов овцы. На данном графике процент лизиса отложен в зависимости от кратности разведения сыворотки.Затем можно провести линию от отметки 50%лизиса до ее пересечения с кривой. В точке пересечения с кривой проводится вертикальная линия вниз к горизонтальной оси. Это значение представляет собой кратность разведения, до которой необходимо развести сыворотку, чтобы обеспечить 50%лизис; при сравнении двух образцов сыворотки для определения различий в CH 50 в качестве показателя можно использовать разведение, при котором достигается 50%лизис.

measuring-the-50-haemolytic-complement-ch50-activity-of-serum

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Иммунология и инфекции

Для эффективного исследования функции иммунной клеточной популяции их очистки часто требуется. Дополнение истощение быстрый и недорогой метод для изоляции иммунных клеточных популяций с высокой чистоты.

Истощение конкретные клеточные популяции путем дополнения Истощение

Гемагглютинации является одной из форм агглютинации, где антитела связываются с эритроцитами. Красные кровяные клетки являются как легко доступны и результаты легко наблюдаемых использованием невооруженным глазом. Это видео демонстрирует этапы гемагглютинации анализа, интерпретация результатов и определение титра.

Определение Реакционная способность и титр сыворотки использованием гемагглютинации Пробирной

Это исследование описывает роман анализа планшет, который измеряет FV свертывания деятельности в фибрин тромба в плазме крови человека, которая не была сообщалось ранее. Метод использует кинетическую планшетного для непрерывного измерения изменения поглощения при 405 нм в течение фибрина тромба в плазме крови человека.

Измерение активности фактора V в плазме крови человека с помощью анализа микропланшетов коагуляции

Это видео демонстрирует метод оценки комплемент-опосредованной бактерицидной активности антител, присутствующих в сыворотке. Этот подход сочетает в себе изолированную сыворотку с патогенными бактериями и экзогенными белками комплемента. После инкубации бактерии выращивают на агаровой тарелке, а полученные колонии количественно оценивают для измерения бактерицидного титра сыворотки.

Сывороточный бактерицидный анализ на комплемент-опосредованную бактерицидную активность антител

Видео демонстрирует анализ ингибирования гемагглютинации для обнаружения сывороточных антител против специфических антигенов. Подтверждение ингибирования гемагглютинации в испытательной лунке и гемагглютинации в контрольной лунке достигается за счет четких визуальных паттернов. Этот анализ играет решающую роль в оценке иммунного ответа, эффективности вакцин и изучении вирусных инфекций в вирусологии и иммунологии.

Анализ ингибирования гемагглютинации для выявления сывороточных антител к целевому антигену

Это видео демонстрирует анализы микронейтрализации для измерения нейтрализующих антител с использованием клеток собачьей почки Мадина-Дарби, сверхэкспрессирующих α2,6-связанную сиаловую кислоту в сыворотке крови человека. Этот анализ часто используется для серологического исследования гриппа у...

Микронейтрализационный анализ для измерения титров нейтрализующих антител в сыворотке крови человека

Здесь мы опишем два анализы для измерения активации комплемента, вызванное антителами против красных кровяных клеток. Основным преимуществом над текущими анализов является их количественный и природа простой в интерпретации.

Методы количественного определения антител-индуцированной активации комплемента по ЭРИТРОЦИТОВ

Воздействие крови на полимерные кровяные каналы инициирует реакцию инородного тела, которая была вовлечена в клинические осложнения. Здесь описывается аппарат петли Чандлера, экспериментальный инструмент, имитирующий перфузию крови через эти каналы. Придаток рекомбинантного CD47 приводит к снижению признаков реакции инородного тела на эти кондуиты.

Использование Экс Vivo Чандлер Loop Аппарат для оценки биосовместимости модифицированных полимерных Conduits крови

Здесь представлен простой метод измерения активности хитиназы в биологических жидкостях, таких как бронхоальвеолярная лаваж или сыворотка.

Измерение активности читиназа в биологических образцах

Этот протокол описывает комплексную оценку гемосовместимости кроветковых устройств с использованием нейрососудистых имплантатов с лазерной резкой. Модель петли потока со свежей, гепаринной человеческой кровью применяется для имитации кровотока. После перфузии анализируются различные гематологические маркеры и сравниваются с значениями, полученными сразу после сбора крови для оценки гемосовместимости исследуемых устройств.

Гемосовместимость Тестирование кровоконтактных имплантатов в модели петли потока, имитирующей поток крови человека

Целью данного метода является определение плотности CR1 в эритроцитах любого предмета путем сравнения с тремя предметами, плотность которых известна плотность эритроцита CR1. Метод использует цитометрию потока после иммуностоцинирования эритроцитов испытуемых моноклональным антителом, в сочетании с усиленной системой с использованием фикоэритрина (ПЭ).

Измерение эритроцитов дополнение рецептор ато 1 Использование потока цитометрии

Узнайте методику определения CH 50 активности комплемента в сыворотке с использованием чувствительных эритроцитов овцы. Этот иммунологический анализ позволяет количественно оценить функциональность комплементной системы.

Измерение 50% Гемолитическая Дополнение (CH₅₀) Активность сыворотки

Больше видео