从尾夹中提取DNA：斑马鱼基因型平中使用的方法

- 将麻醉的成年鱼放在一叠吸水纸上，开始手术。现在用无菌剃须刀片切开尾鳍，然后迅速将鱼转移到装有淡水的水箱中进行回收。将尾夹转移到含有裂解缓冲液的干净试管中。裂解缓冲液含有非离子去污剂，可溶解细胞的质膜和核膜。该缓冲液还含有一种称为蛋白酶 K 的酶，该酶可分解蛋白质并使 DNA 能够释放到裂解物中。它还可以降解核酸酶，保护 DNA 免受核酸酶消化。

现在，将带有尾夹的试管在培养箱中放置过夜，以在 55 摄氏度下连续旋转完全分解组织。接下来，将试管在 95 摄氏度下加热 15 分钟以灭活蛋白酶 K。离心试管以沉淀未消化的材料，并将含有 DNA 的上清液转移到另一个试管中。加入酒精以沉淀 DNA，然后再次离心以将 DNA 收集成沉淀。在以下方案中，我们将从成年斑马鱼的尾夹和整个胚胎中分离 DNA。

- 在 DNA 制备当天，将新鲜蛋白酶 K 以 1 毫克/毫升的浓度添加到裂解缓冲液中。可以使用鳍夹从成年鱼或胚胎鱼中收集组织。

首先，在三卡因溶液中麻醉鱼。等到鳃运动减慢。然后，将鱼放在一叠纸巾上，用无菌剃须刀片切下一小块约 2 至 3 毫米长的尾鳍。迅速将鱼放入有淡水的贴有标签的水箱中进行回收。

用无菌移液器吸头拿起鳍夹，并将其转移到装有 100 微升 DNA 裂解缓冲液的试管中。请务必为动物的水箱和试管贴上标签。将所有收集的组织在 55 摄氏度下孵育至少 4 小时，直至过夜。

孵育后，通过在 95 摄氏度下加热试管 15 分钟来灭活蛋白酶 K。这些样品应立即用于 PCR，但也可在零下 20 摄氏度下储存长达三个月。