Encyclopedia of Experiments: Biology
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Transcript
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- 开始程序,将麻醉的成年鱼放在一叠吸水纸上,现在使用无菌剃须刀刀片切割尾鳍,并迅速将鱼转移到含有淡水的鱼缸中进行回收。 将尾夹转移到包含裂解缓冲器的干净管中。裂解缓冲液包含非离子洗涤剂,可溶解血浆膜和细胞核膜。 缓冲器还含有一种叫做蛋白酶K的酶,这种酶分解蛋白质,使DNA释放到裂解物中。 它还降解核糖核酸,保护DNA免受核糖脂消化。
现在,将带尾夹的管子留在孵化器中过夜,以连续旋转在55 摄氏度下完全分解组织。接下来,在 95 摄氏度下加热管子 15 分钟,使蛋白酶 K.将管子离心机分给未消化的材料,并将含有DNA的超自然物质转移到另一个管子上。加入酒精,使DNA沉淀,然后再次离心,在颗粒中收集DNA。 在下列协议中,我们将从成年斑马鱼的尾夹和整个胚胎中分离出DNA。
-在DNA制备的当天,在裂解缓冲器中加入新鲜蛋白酶K,浓度为每毫升1毫克。组织可以使用鳍夹或胚胎鱼从成年鱼类中采集。
首先,用三合一溶液麻醉鱼。等到刺移动缓慢。然后,将鱼放在一叠纸巾上,用无菌剃须刀刀片切掉一小块长约2至3毫米的尾鳍。迅速将鱼放入贴有淡水的标记水箱中,以便恢复。
用无菌移液器尖端拾取鳍夹,将其转移到装满一百微升DNA裂解缓冲器的管子里。一定要给动物的罐子和管子贴上标签。在摄氏55度下,将所有采集到的组织孵化至少4小时,并通宵进行。
孵化后,通过在95摄氏度的温度下加热管子15分钟来灭活蛋白酶K,这些样品应立即用于PCR,但也可以储存在零下20摄氏度的温度下长达3个月。