Dissociação mecânica: um método para obter células viáveis de um tecido

Primeiro, pese um fragmento de tecido e meça seu comprimento, largura e altura. Coloque o tecido em uma placa de cultura com meio de cultura e corte-o em pedaços pequenos usando um bisturi. Transfira tudo para um tubo C para homogeneização usando uma pipeta Pasteur.

Coloque o tubo em um dissociador mecânico e execute os ciclos conforme necessário. O aparelho usa forças mecânicas para extrair células individuais viáveis da amostra de tecido, mantendo a integridade celular, incluindo as proteínas de superfície. Decantar o homogeneizado através de um filtro de células fixado num tubo de centrifugação.

Homogeneizar novamente o tecido restante e coar o homogeneizado através do filtro de células para dentro do tubo. Centrifugar o homogenato e remover o sobrenadante. Agora, ressuspenda o pellet celular no meio de cultura e transfira uma pequena quantidade da suspensão celular para um tubo contendo a coloração azul de tripano.

Após a coloração, transfira as células para uma lâmina de hemocitômetro. Conte as células viáveis transparentes. As células mortas absorvem a mancha, pois sua membrana celular não está intacta. No protocolo a seguir, realizaremos dissociação não enzimática de tecido