Name: 출생 후의 두뇌에의 연결을 마이 그 레이션의 고해상도 시간 경과 이미징을위한 Organotypic 슬라이스 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-12-11T16:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 41 s
Description: 학습하세요 출생 후 뇌의 신경아세포 이동을 고해상도 시간 경과 이미징으로 분석하는 오가노타이픽 슬라이스 분석법을 마우스 뇌 조직 교차 이식을 통해 신경아세포 이동을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

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우리는 비디오 프로토콜을 해설을위한 댄 맥월터 감사합니다. 이 작품은 NIH 그랜트 5R01NS062182, 노화 연구에 대한 미국 연방에서 부여하고 HTG에게 수여 기관 자금에 의해 지원됩니다.

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<li>Polleux, F. &amp, Ghosh, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+slice+overlay+assay%3A+a+versatile+tool+to+study+the+influence+of+extracellular+signals+on+neuronal%5BTitle%5D)+AND+%22Sci.+STKE%22%5BJournal%5D)">The slice overlay assay: a versatile tool to study the influence of extracellular signals on neuronal.</a> Sci. STKE. , L9-L9 (2002).</li>
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<li>Suzuki, S. O. &amp, Goldman, J. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+cell+populations+in+the+early+postnatal+subventricular+zone+take+distinct+migratory+pathways%3A+a+dynamic+study+of+glial+and+neuronal+progenitor+migration%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Multiple cell populations in the early postnatal subventricular zone take distinct migratory pathways: a dynamic study of glial and neuronal progenitor migration.</a> J. Neurosci. 23, 4240-4250 (2003).</li>
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<li>Jacquet, B. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+neuronal+proliferation%2C+migration+and+differentiation+in+the+postnatal+brain+using+equine+infectious+anemia+virus-based+lentiviral+vectors%5BTitle%5D)+AND+%22Gene+Ther%22%5BJournal%5D)">Analysis of neuronal proliferation, migration and differentiation in the postnatal brain using equine infectious anemia virus-based lentiviral vectors.</a> Gene Ther. 16, 1021-1033 (2009).</li>
</ol>

동물 실험은 노스캐롤라이나 주립 대학 및 동물용 의약품 자사의 대학에 의해 명시된 지침과 규정에 따라 수행되었다. 관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

RMS에의 연결을 마이 그 레이션은 후각 구근 1 출생 후의 neurogenesis의 필수 구성 요소입니다. RMS를 통해 마이 그 레이션은 뇌의 표면에 접선 비행기에서 발생합니다. Tangentially 마이 그 레이션 neuroblasts은 반경들의 시조 소스의 위치뿐만 아니라 최종 제품의 연결 1, 2, 3 분기하는 운명에 따라 세포를 마이 그 레이션와는 있습니다. 출생 후의 RMS에 tangentially 마이 그 레이션하는 세포의 비교적 순수한 인구는 해부학적인 몸의 구조 정의 지역 접선 마이 그 레이션의 메커니즘을 연구를위한 최적의 플랫폼을합니다. 의 연결을 마이 그 레이션의 세포 및 분자 메커니즘을 파악하는 것은 많은 neurodevelopmental 질환 (예를 들어, 참조. 4) 이해 중요합니다. 이 지식은 더욱 뇌 종양의 형성과 확산 (예 참조. 5) 기초 메커니즘의 식별을 용이하게하고, 미래의 연결 교환 전략에 부상이나 neuro...

출생 후의 두뇌에의 연결을 마이 그 레이션의 고해상도 시간 경과 이미징을위한 organotypic 슬라이스 분석

An Organotypic Slice Assay for High-Resolution Time-Lapse Imaging of Neuronal Migration in the Postnatal Brain

전구 세포, neuroblasts의 마이 그 레이션뿐만 아니라, 기존의 신경 회로에 분화하고 새로운 뉴런의 통합의 확산 : 출생 후의 두뇌에 Neurogenesis 세 생물 학적 사건의 유지에 따라 달라집니다. 후각 구근의 출생 후의 neurogenesis 들어,이 이벤트의 세 가지 해부학적인 몸의 구조 별개의 도메인 내에서 차별과 같습니다 확산은 크게 neuroblasts이 주동이의 철새 스트림 (RMS)를 통해 통과 마이 그 레이션, 측면 심실의 subependymal 구역 (SEZ)에 발생, 새로운 뉴런이 차별과 후각 구근 (OB) 내에 통합할 수 있습니다. 세 도메인은 독특한 생물 학적 사건의 각 조절, 세포 분자 및 생리 메커니즘을 연구하기 위해 이상적인 플랫폼 역할을합니다. 본 논문은 세포 조건이 밀접하게 neuroblasts 마이 그 레이션에 대한 생체내 환경에서을 모방하는 출생 후의 뇌 조직에 최적화된 organotypic 슬라이스 분석을 설명합니다. 우리는 우리의 분석은 RMS 이내 neuroblasts의 균일한 지향하고, 빠른 움직임을 위해 제공하는 것으로 나타났습니다. 이 분석은 다른 유전 배경에 생쥐에서 간 이식의 방법을 활용하여의 연결을 마이 그 레이션의 세포 자치가 아닌 자율 규제의 연구에 대해 매우 적합합니다.

이 프로토콜은 주동이의 철새 스트림에서 출생 후의 두뇌와 neuroblast 마이 그 레이션의 고해상도 시간 저속 영상에 최적화된 organotypic 슬라이스 분석을 설명합니다.

출생 후의 두뇌에의 연결을 마이 그 레이션의 고해상도 시간 경과 이미징을위한 Organotypic 슬라이스 분석

출생 후 뇌의 신경발생은 세 가지 생물학적 사건, 즉 전구세포의 증식, 신경모세포의 이동, 그리고...의 유지를 통해 이루어집니다.

저는 Troy Gasai입니다. 지난 몇 년 동안 저희 연구실에서 완성한 장기 유사 조직 절편 분석법(organotypic slice assay)에 대해 말씀드리겠습니다. 저희 연구실의 Ben jacket이 이 분석법의 수행 방법을 시연해 드릴 것입니다.생후 뇌의 기관형 슬라이스 분석법은 다양한 인자들과 이러한 인자들이 생후 뇌 및 TRO 이동 경로 내 신경세포 이동에 미치는 역할을 테스트하는 강력한 방법입니다. 안녕하세요, 저는 노스캐롤라이나 주립대학교 수의과대학 Dr. Troy Gge 연구실의 박사후 연구원 Ben Jakay입니다. 오늘은 생후 뇌에서 이동하는 신경모세포를 시각화하기 위해 기관형 마우스 뇌 슬라이스 간의 조직 교차 이식 방법을 어떻게 수행하는지 보여드리겠습니다.이 영상에서 설명하는 모든 기술은 멸균된 도구를 사용하여 가급적 층류 후드(laminar flow hood)와 같은 멸균 환경에서 수행되어야 합니다. 23 gauge 바늘이 장착된 일회용 주사기를 사용하여 디쉬의 바닥 유리 중앙에 슬라이스 배지 150 µL 한 방울을 떨어뜨립니다. 유체 교환 A를 위해 한쪽 면은 접착하지 않은 상태로 두고, 원형 유리 바닥 커버슬립 바깥쪽에 접착제를 여러 군데 찍어 고정합니다. 그 다음, 마이크로 포셉을 사용하여 핵공 막을 배지 위에 조심스럽게 올리며, 이때 막 아래에 공기 방울이 갇히지 않도록 주의합니다.그 다음 곡선 핀셋을 사용하여 접착제 지점을 평평하게 펴고 막을 제자리에 고정합니다. 막 위에 1 mL의 슬라이스 배지를 첨가하고, 마지막으로 사용할 때까지 디쉬를 인큐베이터에 보관합니다. P1에서 P10 사이의 어린 생후 쥐로 슬라이스를 준비했을 때 가장 좋은 결과를 얻을 수 있으며, 먼저 미세 핀셋으로 코끝을 잡아 머리를 고정합니다.목에서 주둥이까지 피부를 세로 방향으로 절제합니다. 두개골이 드러나도록 두피를 벗겨낸 후, sternum magna에서 시작하여 중앙에 한 번, 양측에 각각 한 번씩 총 두 번의 외측 절개를 가하여 두개골을 전방 및 세로 방향으로 절단합니다. 이때 하부의 피질 조직과의 접촉을 최소화하도록 주의해야 합니다.조직의 안정성을 높이기 위해 두개골 덮개를 뇌에서 제거합니다. 진동 절편 제작 중에 뇌의 가장 외측 및 미측 부위를 면도날로 제거합니다. 두 반구를 두개골에서 조심스럽게 퍼내어 내측면이 아래로 향하도록 매몰 몰드에 배치합니다.그 후, 37°C로 유지되는 조직 준비 버퍼

an-organotypic-slice-assay-for-high-resolution-time-lapse-imaging

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

우리는 주변 신경 가지의 재배와 시간 경과 영상을위한 중간 회임 마우스 배아의 organotypic 조각을 준비하는 방법을 제시한다.

의 Organotypic 슬라이스 문화 GFP - 표현 주변 신경 가지의 실시간 이미징을위한 마우스 배아를

E12.5 murine 배아 midbrain에서 organotypic 조각을 생성하는 방법을 설명합니다. organotypic 슬라이스 문화가 dopaminergic 신경이나 다른 복부 midbrain의 뉴런의 행동을 관찰하는 데 사용할 수 있습니다.

배아 복부 Midbrain의 Organotypic 슬라이스 문화 : Dopaminergic의 연결을 개발 연구하는 시스템 체외에서</em

실시간 이미징 배아 조직은 오랜 기간 동안 도전합니다. 여기에서 우리는 높은 공간과 시간적 해상도를 가진 오랜 기간 동안 여자가 척수의 세포와 하위 세포 변화를 감시하기위한 분석을 제시. 이 기술은 신경계와 개발 배아의 다른 지역에 맞게 조정 할 수 있습니다.

개발 Neuroepithelium의 세포 문제의 고해상도 라이브 영상

우리는 마우스 forebrain의 neuronal 이주의 실시간 videoimaging을위한 프로토콜을 설명합니다. 급속도로 이루어질 - 표시 또는 이식 neuronal 전구체의 마이그레이션은 고정 및 마이그레이션 단계의 기간 및 속도 등의 세포 이주의 다른 단계를 공부하고 비교적 빠른 수집 간격과 폭 넓은 분야 형광 이미징을 사용하여 급성 라이브 슬라이스에 기록 된 이주.

성인 마우스 Forebrain의 급성 슬라이스에 Neuroblast 마이그레이션의 시간 경과 영상

Source:&lt;span style='background-color:#f9f9f9;color:#1155cc;'&gt;Wiegreffe, C., et. al.,  배아 마우스 뇌의 유기형 슬라이스 배양에서 이동하는 뉴런의 타임랩스 공초점 이미징 자궁에서 Electroporation. J. Vis. 특급. (2017) 이 비디오는 심실하 영역에서 피질 뉴런 방사상 이동을 관찰하기 위한 타임랩스 컨포칼 현미경을 보여줍니다. 형질도입된 마우스 배아 뇌 절편에서 방사형 신경교골(radial glial scaffolds)을 통해 피질 플레이트(cortical plate)로.

transducted mouse embryonic brain slices에서 피질 뉴런 요골 이동의 타임랩스 이미징

Neuroblast 이주는 출생 후 신경에 근본적인 이벤트입니다. 우리는 급성 뇌 조각의 시간 경과 영상을 사용하여 생체 내 출생의 일렉트로 그들의 이주 이후의 시각화하여 neuroblasts를 효율적으로 표시하기위한 프로토콜을 설명합니다. 우리는 비디오 추적하여 neuroblast 역학의 정량 분석​​에 대한 설명을 포함한다.

마우스 급성 뇌 조각의 Neuroblast 마이그레이션의 생체 내 출생 일렉트로 및 시간 경과 영상

이 프로토콜은 방사형으로 이동하는 피질 뉴런의 직접 관찰에 대한 지침을 제공합니다. utero electroporation, organotypic 슬라이스 문화, 그리고 시간 경과 공 촛점 이미징은 결합 뉴런에 관심 유전자의 overexpression 또는 downregulation의 효과를 직접적이고 동적으로 연구하고 개발하는 동안 그들의 차별을 분석합니다.

배아 마우스 두뇌의 organotypic 슬라이스 문화에서 마이 그 레이션 뉴런의 저속 공 촛점 이미징<em&gt; Utero에서</em&gt; 일렉트로 포 레이션

여기, 우리 confocal 현미경 검사 법 및 라이브 이미징 기술을 위해 적당 한 마우스 배아에서 electroporated 뇌 organotypic 슬라이스 문화를 생성 하는 저렴 하 고 안정적인 방법을 제공 합니다.

전 Utero Electroporation 및 마이그레이션 GABAergic 수의 라이브 이미징 배아 마우스 두뇌의 Organotypic 조각 문화

이 프로토콜은 현장 축삭 성장 및 성장 원뿔 역학 을 연구하는 간단하고 강력한 방법을 보여줍니다. 생체외 생리학적으로 관련된 급성 뇌 조각을 준비하는 방법을 설명하고 사용자 친화적인 분석 파이프라인을 제공합니다.

시투에서 Axon Growth and Growth Cone Dynamics in Acute Ex Vivo Embryonic Brain Slice Cultures 시각화

대뇌 피질이 발달하는 동안 뉴런과 신경교세포는 심실 내벽의 심실 영역에서 시작하여 뇌 표면으로 이동합니다. 이 과정에는 많은 유전자가 관여합니다. 이 프로토콜은 이동하는 뉴런과 신경교세포 전구세포의 타임랩스 이미징 기술을 소개합니다.

배아 마우스 뇌 절편에서 이동하는 뉴런 및 신경교세포 전구세포의 타임랩스 이미징

학습하세요 출생 후 뇌의 신경아세포 이동을 고해상도 시간 경과 이미징으로 분석하는 오가노타이픽 슬라이스 분석법을 마우스 뇌 조직 교차 이식을 통해 신경아세포 이동을 실시간으로 관찰할 수 있습니다.

출생 후의 두뇌에의 연결을 마이 그 레이션의 고해상도 시간 경과 이미징을위한 Organotypic 슬라이스 분석

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