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Isolierung von Ribosomen übersetzen enthaltend Peptidyl-tRNAs für funktionelle und strukturelle Analysen
JoVE Journal
Biology
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JoVE Journal Biology
Isolation of Translating Ribosomes Containing Peptidyl-tRNAs for Functional and Structural Analyses
DOI:

11:19 min

February 25, 2011

, , ,

Chapters

  • 00:05Title
  • 02:59Preparation of Cell Free Extracts Depleted of RF2
  • 04:28Preparation of a DNA Template
  • 05:18Preparation of Biotin Labeled mRNA
  • 06:19Isolation of Translating Ribosomes Containing a Peptidyl-tRNA
  • 07:56Analysis of the Isolated Ribosomes Containing the Peptidyl-tRNA
  • 09:23Representative Results
  • 10:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Ein wesentliches Hindernis für biochemische Analysen von Ribosomen, die im Entstehen begriffenen Peptidyl-tRNAs hat das Vorhandensein von anderen Ribosomen in der gleichen Proben, Ribosomen nicht in der Übersetzung der spezifischen mRNA-Sequenz, die analysiert werden beteiligt. Wir entwickelten eine einfache Methode, um zu reinigen, ausschließlich, den Ribosomen, welche die entstehenden Peptidyl-tRNA von Interesse.

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