Name: Drosophila popstadium Buik Immunohistochemie (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-02T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Leer immunohistochemie van het abdominale epitheel van Drosophila-poppen voor ontwikkelingsbiologisch onderzoek. Deze methode maakt visualisatie van eiwitexpressie en genetische analyses van epitheelmorfogenese mogelijk.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Dit werk werd ondersteund door een subsidie ​​van de National Science Foundation.

1. Dag 1 Voordat u begint: Een gezonde bevolking van vliegen moet worden gehandhaafd met behulp van standaard protocollen kweken: verwijder volwassenen uit flessen of flacons na 3-4 dagen van ei-lay en laat ontwikkeling tot bij een constante temperatuur te gaan tot zwerven 3 e instar larven te starten verpopping. Het larvale / popstadium overgang wordt gekenmerkt door de vorming van de prepupae (als 0 uur na puparium vorming-APF). Immobiele poppen onderscheiden zich van oudere poppen door hun witte kleur en van larven die nog niet verpopping begonnen door hun langwerpige, afgeronde vorm en uitpuilen van de voorste siphonen. Je hebt nodig: <ul><li> Een kwast voor het verzamelen van poppen </li><li> Een vochtige kamer voor het kweken van poppen: een petrischaal bekleed met papieren handdoek nat en bedekt met filtreerpapier gemarkeerd voor de verschillende tijdstippen van inzameling, genotype of het geslacht van de poppen </li><li> 1X fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) voor het wassen poppen </li></ul> Verzamelen, kweken en staging poppen <ol><li> Met behulp van een vochtig penseel verwijder voorzichtig 0hr APF poppen van cultuur flessen / flacons en plaats ze in het deksel van de vochtige kamer. </li><li> Met behulp van de penseel en 1X PBS voorzichtig wassen de poppen aan vuil te verwijderen uit de pop geval </li><li> Indien nodig sorteert de poppen naar geslacht. De gonaden primordia van de poppen gebruikt kan worden om de seksen te sorteren. De mannelijke gonaden primordia zijn een laterale paar doorzichtige schijven eenvoudig gezien door het popstadium opperhuid ongeveer 2 / 3 over de lengte van het lichaam 5. De vrouwelijke gonaden primordia zijn kleiner en niet zo gemakkelijk te herkennen. </li><li> Plaats de poppen in de juiste label positie in de vochtige kamer en ga terug naar constante temperatuur. Cultuur aan de juiste ontwikkeling tijdstip. </li></ol> 2. Dag 2: Dissection, fixatie en primaire antilichaam incubatie Voordat u begint: Je hebt nodig: <ul><li> Dissection stereomicroscoop </li><li> Chirurgische tang </li><li> Chirurgische scalpel met nummer 11 bladen </li><li> Twee van negen goed glas depressie schalen (Corning product # 7220-85) <ul><li> Vul putten van een schotel met 1X PBS: Dit is de spoeling gerecht voor het reinigen ontleed poppen </li><li> Vul de putten van de tweede schotel met fixatie buffer </li></ul></li><li> Vochtige kamer voor antilichaam incubatie. We maken gebruik van plastic afsluitbaar sandwich boxen bekleed met nat keukenpapier. </li><li> Fixatie buffer: 1x PBS, 4% paraformaldehyde, 0,2% deoxycholinezuur (voor permeabilisatie) </li><li> Dissection platform: Clear microscoopglaasje met een stukje dubbelzijdig plakband gehandeld op grond van een kant </li><li> 1X PBS </li><li> P100 of P200 pipet </li></ul> Ontleding <ol><li> Met behulp van een tang voorzichtig verwijderen poppen een voor een tijd en plaats ze op de dissectie platform met de voorste einde van de poppen waarmee de breedste breedte van de tape. Als poppen zijn te natte, eerst dep ze droog met een papieren handdoek. </li><li> Voordat de poppen volledig gehandeld op grond van de tape, gebruik dan een penseel om ze positie. </li><li> Laat de poppen aan de lucht drogen en zich te houden aan de tape (5-10 minuten) </li><li> Met de chirurgische scalpel bilateraal ontleden elk poppen. Dit kan het beste bereikt met een enkele snelle snede van de voorste naar de achterste einde van de poppen. Als dit goed wordt gedaan, zal de cut halveren zowel de voorste en achterste siphonen paren. Ontleden niet meer dan 10 poppen in een tijd als wassen en schoonmaken van de monsters snel is nodig om te voorkomen proteolytische schade aan het weefsel. </li><li> Met behulp van een penseel, overdracht van een kleine hoeveelheid 1X PBS aan elk ontleed poppen om hen los te maken van de tape. </li></ol> Reiniging, fixatie en primaire antilichaam incubatie <ol start="6"><li> Met een paar chirurgische tang te vatten een individuele pop half naar voren en onmiddellijk onder te dompelen in een put van de spoelen schotel. De dissectie platform moet worden vervangen door de spoelen schotel op de microscoop podium. De poppen geval moet worden overgelaten aan het monster tot de verwerking is voltooid en monsters zijn klaar voor montage. </li><li> Hoewel nog steeds grijpen de pop half gebruik maken van een pipet om zachtjes weg te wassen de interne weefsel van de buik. Te veel druk tijdens het wassen kan leiden tot verlies van epitheliale cellen. </li><li> Onmiddellijk overdracht van de schone pop half tot fixatie buffer op kamertemperatuur en evenzo proces de resterende pop helften. Met de praktijk, dissectie en het wassen van 20 pop helften moeten nemen minder dan 5 minuten. </li><li> Laat poppen in fixatie buffer incuberen bij kamertemperatuur gedurende 1 (een) uur. </li><li> Spoel vaste poppen 3x vijf minuten in 1X PBS </li><li> Monsters kunnen direct worden verwerkt voor immunohistochemie of kunnen worden opgeslagen in 100% ethanol bij -20 ° C voor maximaal 3 maanden zonder verlies van cellen of epitoop reactiviteit. </li><li> Voor het opslaan van monsters, evenwicht monsters door een verdunningreeks van PBS: EtOH (3:1, 1:1, 1:3) bij kamertemperatuur gedurende 20 minuten in elke verdunning voorafgaand aan de overdracht tot 100% EtOH. </li><li> De monsters moeten opnieuw in evenwicht worden in PBS door middel van de reverse-serie voor de verwerking voor immunohistochemie. </li><li> Block monsters in 1x PBS (aangevuld met 2% bovine serum albumine) voor 1 (een) uur voor de toevoeging van primaire antilichaam. </li><li> Incubeer met primaire antilichaam verdund tot de juiste concentratie in 1X PBS gedurende de nacht bij 4 ° C zonder schommelen. </li></ol> 3. Dag 3: tweede antilichaam incubatie, montage en imaging Voordat u begint: Je hebt nodig: <ul><li> Twee chirurgische pincet </li><li> Montage media (glycerol, Vectashield [Vector Labs], of Slowfade Gold [Invitrogen]) </li><li> Depressie goed objectglaasjes (0,8 mm) </li><li> Dekglaasjes (24 x 40 mm) </li></ul> Secundair antilichaam incubatie en montage: <ol><li> Was de monsters 3x 10 minuten met elk 1x PBS </li><li> Block monsters in 1x PBS (aangevuld met 2% bovine serum albumine) voor 1 (een) uur voor de toevoeging van secundaire antilichaam. </li><li> Incubeer met secundair antilichaam verdund tot de juiste concentratie in 1X PBS bij kamertemperatuur in het donker zonder schokken voor 3 (drie) uur. </li><li> Was de monsters 3x 10 minuten met elk 1x PBS </li><li> In voorkomend geval, tegenkleuring poppen (Voorbeeld we kernen vlek met DAPI [4 ',6-diamidino-2-phenylindole] verdund in PBS gedurende 10 minuten). </li><li> Equilibreren monsters (minimaal 30 minuten) in geschikte media voor de montage. </li><li> Bereid een sample dia. De morfologie van de poppen voorkomt vlakke montage. Monsters zijn gemonteerd in de put van een depressie slide (drop dia) voor de beeldvorming. Plaats 75-100ul van montage media in de depressie goed. Meerdere monsters kunnen worden gemonteerd op een enkele dia. </li><li> De pop geval moet worden verwijderd van de monsters voor de montage. Pak een individueel pop geval naar voren dat zeker niet aan de interne popstadium membraan begrijpen. </li><li> Met een tweede tang voorzichtig te begrijpen van de interne popstadium membraan door het hoofd en verwijder deze uit het popstadium geval. </li><li> Onmiddellijk het monster goed over te dragen aan de depressie en verder te verwerken aanvullende monsters. </li><li> Met behulp van een sonde of een pincet positie van de monsters gelijkmatig in de depressie goed aan bij de laterale oppervlak naar boven. Af en toe luchtbellen kunnen verwijderd worden met een sonde. </li><li> Laat het dekglaasje op de monsters die zorgen dat er geen luchtbellen te introduceren </li></ol> 4. Representatieve resultaten: Monsters bereid met behulp van dit protocol behouden de bruto morfologie van de volwassen buik. Afbeelding stacks kunnen worden geprojecteerd op een twee-dimensionaal beeld of 3-D rendering kunnen worden toegepast op buik topologie te onderzoeken genereren. <img src="/files/ftp_upload/3139/3139fig1.jpg" alt="Figuur 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figuur 1"> Figuur 1. Segmentatie genproducten in Drosophila poppen Wingless eiwit-en Engrailed expressie (En-GAL4: UAS-GFP). Werden gevisualiseerd op 26 uur na puparium vorming (APF) met muis anti-Wg (4D4: Iowa Hybridoma Bank) en anti-GFP. 10x vergroting, voorste is links en dorsale om is. Nucleii werden tegengekleurd met DAPI. Stapels van ongeveer 50 beelden (ΔZ tussen plakken is 2.5μm) werden geprojecteerd.

<ol><li>Kopp, A., Duncan, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anteroposterior+patterning+in+adult+abdominal+segments+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Dev.+Biol%22%5BJournal%5D)">Anteroposterior patterning in adult abdominal segments of Drosophila.</a> Dev. Biol. 242, 15-30 (2002).</li>
<li>Ninov, N., Chiarelli, D. A., Martin-Blanco, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extrinsic+and+intrinsic+mechanisms+directing+epithelial+cell+sheet+replacement+during+Drosophila+metamorphosis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Extrinsic and intrinsic mechanisms directing epithelial cell sheet replacement during Drosophila metamorphosis.</a> Development. 134, 367-379 (2007).</li>
<li>Bischoff, M., Cseresnyes, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+rearrangements%2C+cell+divisions+and+cell+death+in+a+migrating+epithelial+sheet+in+the+abdomen+of+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Cell rearrangements, cell divisions and cell death in a migrating epithelial sheet in the abdomen of Drosophila.</a> Development. 136, 2403-2411 (2009).</li>
<li>Matsuda, R. in Morphology and evolution of the insect abdomen. , Pergamon Press. Oxford. (1976).</li>
<li>Kerkis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Growth+of+the+Gonads+in+Drosophila+Melanogaster%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">The Growth of the Gonads in Drosophila Melanogaster.</a> Genetics. 16, 212-224 (1931).</li>
</ol>

Geen belangenconflicten verklaard.

De technieken die in deze video kan worden gebruikt om Drosophila poppen te bereiden uit een verscheidenheid van ontwikkelingsstoornissen tijdstippen. Poppen worden verwerkt in de periode van 24 uur tot 32 uur APF APF zijn het meest gevoelig voor cel verlies van het epitheel. Het gebruik van reinigingsmiddelen (zoals Triton X-100 en Tween-20) tijdens lange incubatie stappen verhoogt de kans op cel verlies en wordt daarom niet aanbevolen. In plaats daarvan wordt deoxycholinezuur gebruikt als reinigingsmiddel tijdens de eerste fixatie stap. Alle volgende stappen worden uitgevoerd in 1X PBS zonder afwasmiddel. Bovendien, rockende monsters gedurende langere incubatie stappen verhoogt celverlies en moet worden vermeden. Monsters kunnen worden afgebeeld met behulp van confocale microscopie technieken. Echter, Drosophila poppen verwerkt zoals beschreven kan ook worden afgebeeld met behulp van een gestructureerd verlichting microscopie-systeem waardoor de beeldkwaliteit die vergelijkbaar zijn met confocale technieken.

<ul><li> Dissection stereomicroscoop </li><li> Chirurgische tang </li><li> Chirurgische scalpel met nummer 11 bladen </li><li> Nine-goed glas depressie schalen (Corning product # 7220-85) </li><li> Vochtige kamer voor het kweken van poppen </li><li> 1X fosfaat gebufferde zoutoplossing (PBS) </li><li> # 11 chirurgische scalpel </li><li> dubbelzijdige tape </li><li> Fixatie buffer: 1x PBS, 4% paraformaldehyde, 0,2% deoxycholinezuur (voor permeabilisatie) </li><li> P100 of P200 pipet </li><li> Depressie goed objectglaasjes (0,8 mm) </li></ul>

drosophila popstadium buik immunohistochemie

Drosophila Pupal Abdomen Immunohistochemistry

De Drosophila popstadium buik is een gevestigde modelsysteem voor de studie van epitheliale morfogenese en de ontwikkeling van seksueel dimorfe morfologieën 1-3. Tijdens het popstadium, die ongeveer 96 uur overspanningen (bij 25 ° C), prolifererende populaties van imaginaire cellen vervangen de larvale epidermis om de volwassen buik segmenten te genereren. Deze verbeelding cellen, geboren tijdens de embryogenese, bestaan ​​als laterale paren van histoblast nesten in elk abdominale segment van de larven. Vier paren van histoblast nesten aanleiding geven tot de volwassen dorsale cuticula (voorste en achterste dorsale nesten), de ventrale cuticula (ventrale nesten) en de siphonen die bij elk segment (luchtgat nesten) 4. Bij puparation, deze diploïde cellen (te onderscheiden door grootte van de grotere polyploïde larvale epidermale cellen-LEC&#39;s) beginnen met een stereotype proces van proliferatie, migratie en vervanging van de LEC&#39;s. Verschillende moleculaire en genetische tools kunnen worden gebruikt om de bijdragen van genetische pathways die betrokken zijn bij morfogenese van de volwassen buik te onderzoeken. Ultimate volwassen fenotypes zijn meestal geanalyseerd na dissectie van de volwassen buik nagelriemen. Echter, onderzoek naar de onderliggende moleculaire processen vereist immunohistochemische analyses van het popstadium epitheel, die unieke uitdagingen te presenteren. Tijdelijk dynamische morfogenese en de interacties van twee afzonderlijke epitheliale populaties (larven en verbeelding), het genereren van een kwetsbare weefsel gevoelig voor overmatig cel verlies tijdens dissectie en verdere verwerking. We hebben methoden ontwikkeld om van ontleden, fixatie, montage en beeldvorming van de Drosophila popstadium abdominem epitheel voor immunohistochemische studies die een constante hoge kwaliteit monsters geschikt zijn voor confocale of standaard fluorescentie microscopie te genereren.

Antilichaam kleuring van de<em&gt; Drosophila</em&gt; Poppen kunnen verbeteren genetische analyse van de volwassen buik ontwikkeling genetica. We presenteren onze protocol voor dissectie, fixatie en antilichaam kleuring van geënsceneerde<em&gt; Drosophila</em&gt; Popstadium buik.

Drosophila popstadium Buik Immunohistochemie

Het pupale abdomen van Drosophila is een gevestigd modelsysteem voor de studie van epitheliale morfogenese en de ontwikkeling van seksueel dimorfe ...

Het algemene doel van deze procedure is het prepareren van het abdominale epitheel van Drosophila puy voor immunohistochemie. Dit wordt bereikt door eerst bilateraal de Drosophila puy in het stadium van dissectie te ontleden en de interne organen te verwijderen, zodat alleen het abdominale epitheel, bestaande uit prolifererende imaginale schijven, osteoblasten en larvale epidermale cellen, aan het pupale membraan bevestigd blijft.Het weefsel wordt vervolgens gefixeerd, geïncubeerd met antilichamen, verwijderd uit de buitenste pupilcapsule en gevisualiseerd via immunofluorescentiemicroscopie om de grove morfologie van het abdominale epitheel en de expressie van de eiwitten van belang aan te tonen. Hallo, ik ben John Yoder. Mijn laboratorium bevindt zich aan de University of Alabama in het Department of Biological Sciences.Hallo, ik ben we won. Ik ben een peer student in het Yoda lab. Vandaag gaan we onze methode laten zien voor de dissectie van de drosophila-pop en immunohistochemie van het abdomen van de drosophila-pop.Deze methode kan worden gebruikt om processen van epitheliale morfogenese en weefselreorganisatie te onderzoeken. We gebruiken deze techniek specifiek om de ontwikkeling van de seksueel dimorfe morfologie van het abdomen van de volwassen drosophila te onderzoeken. Identificeer recent gemobiliseerde pupae met cuticula's die nog niet zijn begonnen te looien uit een populatieflacon bij 25 °C zonder volwassenen; deze worden beschouwd als nul uur post-puparium (PF). Verwijder deze pupae voorzichtig met een natte penseel en plaats ze op het deksel van een bevochtigde kamer. Was indien nodig met de penseel en PBS voorzichtig het vuil van de pupariumcasussen.Sorteer de pupae op geslacht bij nul uur. De mannelijke goad-primordia zijn gemakkelijk zichtbaar door de pupale cuticula. Ongeveer tweederde van het lichaam naar beneden zijn de vrouwelijke goad-primordia kleiner en minder gemakkelijk te identificeren.Plaats nu de pub op het bevochtigde filterpapier in de bevochtigingskamer. Plaats het deksel terug en breng ze terug naar een omgeving met een constante temperatuur. Wanneer de dieren het gewenste ontwikkelingsstadium hebben bereikt, kan worden overgegaan tot de dissectie.Houd er rekening mee dat pupillen die 24 tot 32 uur na de bevruchting (A PF) zijn verwerkt, het meest gevoelig zijn voor verlies van epitheelcellen tijdens de verdere verwerking. Bereid de dissectie voor door een stuk dubbelzijdige tape langs één zijde van een transparant objectglas aan te brengen. Gebruik vervolgens een pincet om elke pupil voorzichtig tussen de voorste sferen vast te pakken en plaats deze met de dorsale zijde naar boven op de tape.Lijn op deze manier maximaal 10 PPE uit om te voorkomen dat het werkproces te traag verloopt. Binnen vijf tot 10 minuten zullen de PPE volledig zijn uitgehard; gebruik vóór die tijd een kwast om ze gelijkmatig te spreiden en parallel te positioneren. Te lang drogen in deze fase zal de kwaliteit verminderen.Werk daarom snel. Gebruik nu een chirurgisch scalpel om elke pop A bilateraal te dissecteren. Maak één snelle snede van het anterieure naar het posterieure uiteinde van de pop.Indien correct uitgevoerd, zal de snede zowel de anterieure als posterieure sferische paren doorsnijden, waardoor symmetrische linker- en rechterhelften ontstaan om de pop los te maken van de tape. Gebruik een penseel om met behulp van chirurgische pincetten een kleine hoeveelheid PBS aan elke gedisseceerde pop toe te voegen. Pak één pophelft vast bij het anterieure uiteinde en dompel deze onder in een met PBS gevuld spoelbakje op de tafel van de dissectiemicroscoop; terwijl u de pop vasthoudt, gebruikt u een pipet om het interne weefsel voorzichtig weg te wassen door PBS in de buikholte te pompen.Voorkom dat er te veel druk wordt uitgeoefend, anders gaan er cellen van het epitheel verloren. Dompel het schone weefsel onmiddellijk onder in 400 µL fixatiebuffer op kamertemperatuur en reinig alle pupahalveeen. Met wat oefening in het dissekeren en wassen zou het verwerken van 20 PU-halven minder dan vijf minuten in beslag moeten nemen.Laat de puy een uur incuberen in de fixatiebuffer bij kamertemperatuur en spoel ze vervolgens drie keer met 400 µL PBS gedurende vijf minuten per wasbeurt. Om de monsters te bewaren, spoelt u ze eerst twee keer met 100% methanol en brengt u ze daarna over naar 100% ethanol voor opslag. Deze monsters kunnen tot drie maanden worden bewaard in 100% ethanol bij -20 °C zonder verlies van cellen of epitopenreactiviteit.Om bewaarde monsters te verwerken, moeten deze eerst in PBS via een ethanolserie worden gehydrateerd. Ga verder met de immunohistochemie door de monsters een uur lang bij kamertemperatuur en zonder schudden te blokkeren in PBS met 2% BSA. Het schudden van de monsters verhoogt het celverlies vanuit het abdominale epitheel aanzienlijk.Vervang vervolgens de blokkeeroplossing door het primaire antilichaam, verdund tot de juiste concentratie in PBS. Incubeer de monsters een nacht bij vier graden Celsius zonder schudden en in een gesloten bevochtigde kamer om verdamping op de volgende dag te voorkomen. Was de monsters drie keer in PBS zonder schudden en gedurende 10 minuten per wasbeurt.Blok vervolgens de monsters gedurende een uur zonder schudden in PBS met 2%BSA. Vervang de blokkeringsoplossing door secundaire antilichamen op kamertemperatuur in PBS. Incubeer de monsters daarna gedurende drie uur in het donker en zonder schudden.Volg de incubatie met het secundaire antilichaam met drie wasstappen in PBS van elk 10 minuten, indien van toepassing. Voer een tegenkleuring van de puncta uit; nuclei kunnen bijvoorbeeld worden gekleurd door een incubatie van 10 minuten in DPI verdund met PBS. Laat de monsters vervolgens minimaal 30 minuten equilibration ondergaan in het montage-medium.Om de monsters te monteren, pakt u elke pupilhoes anterieur vast met een pincet, terwijl u de interne pupilmembraan vermijdt met een tweede pincet. Pak de interne pupilmembraan voorzichtig bij de kop vast. Trek het monster vervolgens voorzichtig uit de pupilhoes.Breng het unca-monster over naar een concave objectglas met 75 tot 100 µL montage medium. Meerdere monsters kunnen op één enkel objectglas worden geplaatst. Gebruik nu een sonde en een pincet om de monsters gelijkmatig in de inkeping te positioneren.Draai ze zodat hun zijvlakken naar boven wijzen en verwijder eventuele luchtbellen met een sonde. Plaats tot slot voorzichtig het dekglas op de monsters zonder luchtbellen te introduceren voor deze preparatie. Gestructureerde illuminatiemicroscopie zal vergelijkbaar zijn met confocale technieken.Dit is een projectie van 50 confocale beelden met 2,5 microns tussen de coupes. Het weefsel bevindt zich op 26 uur a PF, en de kleuring toont het expressiepatroon van het wingless-eiwit en grail-gestuurd GFP en de kernen. De anteriorzijde bevindt zich links en dorsale kenmerken bevinden zich aan de bovenzijde van het scherm.Deze film demonstreert hoe de grove morfologie van monsters door de procedure wordt behouden, waardoor een driedimensionale reconstructie van beeldstacks mogelijk is. Meerdere tientallen pupilmonsters kunnen worden gefixeerd en in fixatiebuffer worden geplaatst in minder dan 30 minuten.Bovendien zijn monsters die met dit protocol zijn voorbereid geschikt voor hybridisatie, waardoor dit een waardevol protocol is voor genexpressiestudies.

drosophila-pupal-abdomen-immunohistochemistry

Research

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dit protocol wordt beschreven hoe u immunohistochemie uit te voeren op ontleed Drosophila larve.

Drosophila larven NMJ Immunohistochemie

Dissectie en Immunohistochemie van larven, popstadium en Volwassen<em&gt; Drosophila</em&gt; Netvliezen

De volwassen structuren van Drosophila zijn afgeleid van zak-achtige structuren die imaginale schijven worden genoemd. Analyse van deze schijven biedt inzicht in vele ontwikkelingsprocessen, waaronder weefselbepaling, oprichting van compartimentgrenzen, celproliferatie, celbestemmingsspecificatie en cellulaire planaire polariteit. Dit protocol wordt gebruikt om imaginale schijven voor te bereiden op licht-/fluorescentiemicroscopie.

Dissectie en Immunokleuring van Imaginal schijven uit Drosophila melanogaster

Het doel van deze techniek is om onderzoekers in staat te stellen dissectie, immunokleuring en montage van poppenoogschijfjes uit Drosophila melanogaster van elke leeftijd uit te voeren.

Dissectie en Plaatsing van<em&gt; Drosophila</em&gt; Pupal Eye Discs

Een protocol van gehele immuunkleuring op bladluisembryo's wordt gepresenteerd, waarin kritieke omstandigheden voor het verminderen van achtergrondkleuring en het verhogen van weefseldoorlaatbaarheid worden behandeld. Deze omstandigheden zijn specifiek ontwikkeld voor effectieve detectie van eiwitexpressie in de embryonale weefsels van bladluizen.

Identificatie van de kritische Voorwaarden voor Immunokleuring in de erwtenbladluis Embryo&#39;s: Toenemende Tissue permeabiliteit en Afnemende Achtergrond kleuring

De mogelijkheid om nauwkeurig detecteren afschriften of eiwitten in Drosophila weefsels is essentieel voor de studie van hun overvloed en localisatie gerelateerde aan het ontwikkelingsproces. Hier is de beschrijving van een eenvoudige procedure om te ontleden pop vleugels. Deze vleugels kunnen worden gebruikt als de monsters in verschillende technieken (PCR assay, immunohistochemistry, enz.).

Een snelle en doeltreffende methode om te ontleden pop vleugels van Drosophila geschikt voor Immunodetections of PCR-testen

De Drosophila eierstok is een uitstekende modelsysteem voor het bestuderen van de stamcel niche ontwikkeling. Hoewel de methoden voor het ontleden van larvale en volwassen eierstokken zijn gepubliceerd, vereisen pop eierstok dissecties verschillende technieken die niet zijn gepubliceerd in detail. Hier duidelijk naar voren komt een protocol voor ontleden, kleuring en montage van de pop eierstokken.

Dissectie en kleuring van Drosophila pop eierstokken

Dit document stelt een chirurgische methode voor het ontleden van Drosophila pop netvlies samen met de protocollen voor de verwerking van weefsels voor RNA-extractie, immunohistochemistry en westelijke analyse.

Dissectie van de Drosophila pop netvlies voor Immunohistochemistry, westelijke analyse en RNA isolatie

Het huidige protocol beschrijft de voorbereiding en visualisatie van vast weefsel van het Drosophila popnotum. Het kan worden gebruikt voor intact of gewond weefsel en de oorspronkelijke architectuur van het weefsel blijft behouden. De procedures voor het ontleden, fixeren en kleuren worden allemaal beschreven in dit artikel.

Het ontleden, fixeren en visualiseren van de Drosophila Pupal Notum

Drosophila is een krachtig model om fundamentele mechanismen van myogenese te begrijpen. Dit protocol voor de dissectie en voorbereiding van thorax hemi-secties maakt microscopie-analyse mogelijk van indirecte vliegspier van zowel pop- als volwassen stadia. Dit protocol maakt confocale beeldvorming mogelijk van cellulaire morfologie, eiwitlokalisatie, spierstructuur en meerdere andere aspecten van myogenese.

Dissectie van Drosophila melanogaster indirecte vluchtspieren voor microscopiebenaderingen

Leer immunohistochemie van het abdominale epitheel van Drosophila-poppen voor ontwikkelingsbiologisch onderzoek. Deze methode maakt visualisatie van eiwitexpressie en genetische analyses van epitheelmorfogenese mogelijk.

Drosophila popstadium Buik Immunohistochemie

Meer video's verkennen