A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Title
- 01:07Cell Harvest and Lysis
- 01:55Ni-affinity Purification of Hsp104
- 03:16FPLC Purification of Hsp104
- 05:14Representative Results for Hsp104 Purification and Assessment of Disaggregation Activity
- 07:04Conclusion
Här beskriver vi ett protokoll för rening av mycket aktiva Hsp104, en hexameric AAA + protein från jäst, vilket par ATP hydrolys till protein uppdelning. Detta system utnyttjar en His6-märkta bygga för affinitet rening från<em> E. coli</em> Följt av anjon-utbyte kromatografi, His6-tagg borttagning med TEV proteas, och storlek-utanförskap kromatografi.
Tags
PurificationHsp104Protein DisaggregaseHexameric AAA+ ProteinATP HydrolysisProtein DisaggregationRenaturationDisordered AggregatesHeat ShockCross-beta Amyloid FibrilsPrionsPhenotypic VariationPreamyloid OligomersE. Coli Orthologue ClpBHsp104 OrthologuesAnimal CellsTherapeutic AgentNeurodegenerative DiseasesMisfolding Of ProteinsToxic Preamyloid OligomersAmyloid Fibrils
