A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
1Department of Pharmacology & Chemical Biology,University of Pittsburgh School of Medicine, 2Hillman Cancer Center,University of Pittsburgh Cancer Institute, 3Department of Experimental Therapy,The Netherlands Cancer Institute, 4Department of Human Genetics,University of Pittsburgh School of Public Health
Chapters
- 00:05Title
- 02:53Molecular Beacon Design
- 04:31Nuclear Lysate Preparation
- 08:31Molecular Beacon Assay
- 11:51Representative Analysis of Tumor Cell Lysates
- 13:54Conclusion
Vi beskriver en metod för kvantitativ realtids-mätning av DNA glykosylas och AP verksamheten endonukleas i cellnukleära lysat. Analysen ger hastigheter av DNA-reparation aktivitet som lämpar sig för kinetisk analys och är anpassningsbar för kvantifiering av DNA-reparation aktivitet i vävnad och lysat tumör eller med renade proteiner.
Tags
Quantitative AnalysisReal-time MeasurementBase Excision RepairDNA GlycosylaseAP EndonucleaseMolecular BeaconsSubstrateDeoxyoligonucleotideCarboxyfluorescein (6-FAM)DabcylStem-loop StructureNucleotidesBase PairsFörster Resonance Energy Transfer (FRET)FluorescenceDNA RepairFluorescence ValuesReal-time AssessmentPCR Instruments
