Hepatik Arter İmar Kısmi Ortotopik Karaciğer Nakli Bir Rat Modeli Cerrahi İşlemleri

Bu prosedürün genel amacı, transplantasyon araştırmaları için tekrarlanabilir bir deneysel model olarak sıçanlarda parsiyel ortotopik karaciğer transplantasyonu gerçekleştirmektir. Bu, ilk olarak donör sıçandan alınan karaciğerin çıkarılmasıyla gerçekleştirilir. İkinci adım, %50 karaciğer rezeksiyonu da dahil olmak üzere karaciğer greftinin ex vivo hazırlanmasıdır.

Daha sonra, alıcı sıçanın doğal karaciğeri eksize edilir. Son adım, kısmi karaciğer greftinin alıcı sıçana implantasyonudur. Sonuç olarak, transplantasyon sonrası karaciğer greftindeki hepatosellüler hasarı değerlendirmek için serum alanin, aminotransferaz seviyeleri ölçülür.

Genel olarak, bu prosedüre yeni başlayan bireyler, ileri mikrocerrahi beceriler gerektiren karmaşıklık nedeniyle mücadele ediyoruz. Bu işleme başlamak için, uyuşturulmuş donör fareyi, hayvanın tamamen anestezi altına alındığını bir ayak parmağı tutamıyla onayladıktan sonra bir ısıtma yastığının üzerine yerleştirin, manyetik fiksatör retraksiyon sistemini kullanarak üst kolları sabitleyin. Kürkü farenin tüm karın bölgesinden tıraş edin ve ilgili cildi bir povidon iyot çözeltisi ile sterilize edin.

Bilateral uzantılarla orta hat kesisi ile karnı açın. Sıçanın arkasına beş mililitrelik bir şırınga yerleştirin, böylece supra hepatik vena mağarası bir sivrisinek forseps kelepçesi kullanarak Ventrally olarak yükseltilir ve işlemi başa doğru çekin ve cerrahi alanı açmak için subkostal ekartörleri uygulayın. İşlem sırasında ekartörlerin ve beş mililitrelik şırınganın sık sık manipüle edilmesi gerektiğinden, kesi çevresinde cerrahi örtüler kullanılmaz, cerrahi mikroskop altında 16 x büyütmede çalışarak, falsiform ligament ve sol üçgen ligamenti sekizli gibi diseke edin ve sol frenik veni bölün, median ve sol lateral lobları ıslak gazlı bez takası ile yukarı doğru geri çekin.

Bipolar forseps kullanarak, paraözofagus damarlarını sol lateral ve anterior koordinat lob arasında pıhtılaştırın ve bölün. Bağırsakları karın dışına sıçanın sol tarafına taşıyın ve ıslak bir gazlı bezle örtün. Swab, ıslak bir gore swab ile sağ lateral lobu yukarı doğru geri çekin.

İnfra hepatik vena mağarasını retroperitoneal dokudan izole edin ve daha sonra safra kanalına bir stent yerleştirmek için greft çıkarılmadan hemen önce bölünecek olan sağ adrenal veni bağlayın, önce safra kanalını gastroduodenal arterin dallanma seviyesinde bağlayın. Safra kanalının ön duvarında bağlanan noktaya proksimalde küçük bir kesi yapın, ardından sol elinizde düz bir mikro forseps ile insizyonun ön duvarını tutarken, kanala bir stent yerleştirmek için sağ elinizde kavisli bir mikro forseps kullanın. Altı sıfır ipek iplikle sabitleyin.

İpliğin kesilen uçlarından birini safra kanalı üzerinde dört milimetre uzunluğunda tutun, böylece iplik daha sonraki anastomoz sırasında tutulabilir. Gastroduodenal arteri bağlayarak ve bölerek, bağlayarak ve bölerek poral veni pori ve splenik venlerden kurtarın, ligate edin ve bölün. Daha sonra ortak hepatik arteri pankreas başından köküne kadar izole edin.

Pamuklu çubuklarla karaciğeri sağa döndürün ve hazırlıkların tamamlanmasının ardından karaciğerin ve yemek borusunun arkasındaki bağı inceleyin. Karaciğer eksizyonu için. Ekartörleri, ksifoid işlemi için sivrisinek forsepsini ve sıçanın arkasındaki beş mililitrelik şırıngayı çıkarın.

Bağırsakları karın boşluğuna geri koyun. Penis damarından iki mililitre normal salin solüsyonunda 500 IU heparin natriyum enjekte edin. Yaklaşık üç dakika sonra, beş mililitrelik şırıngayı, sivrisinek forsepsini ve ekartörü, ortak hepatik arteri köküne proksimal olarak sıfırlayın.

İpliğin kesik uçlarından birini ortak hepatik arter için bağlı tutun. İnfra hepatik vena mağarasını klempledikten uzun süre sonra. Bir sivrisinek forseps ile sağ böbrek damarına yakın.

Portal veni, dalak kütüğünün altına tek kullanımlık bir mikro damar kelepçesi ile kelepçeleyin. Portal venin ön duvarını kesin ve portala 18 gauge kateter yerleştirin. Damar, karaciğeri 60 mililitre soğuk histidin tritofan ketoglutarat çözeltisi ile yerinde perfüze eder.

20 santimetrelik bir hidrostatik basınçta, su, perfüzyon çözeltisinin karaciğerden durulanmasına izin vermek için diyaframı, intratorasik vena mağarasını ve intrahepatik vena mağarasının ön duvarını hemen kesti. İnfra hepatik vena mağarasını, karaciğerin hemen altındaki bir mikro damar kelepçesi ile kelepçeleyin. İnfra hepatik vena mağarasını diseksiyon yaparak karaciğeri eksize edin.

Mercan damarı, diyafram, kalan bağlar, sağ adrenal ven ve ortak hepatik arter. Tüketim karaciğerini, kırılmış buz orgu ile dolu plastik bir kutuya monte edilmiş metal bir kapta soğuk HTK çözeltisine yerleştirin. Karaciğer grefti için prosedürler, bir manşetin portal ven kelepçesine tutturulması için buz gibi soğuk HTK çözeltisi ile doldurulmuş metal kapta gerçekleştirilir, portal venöz gövdeyi bir DeBakey bulldog kelepçesi ile sıkıştırın ve kelepçeyi fincan üzerinde bir köprüleme pozisyonuna yerleştirin.

Mercan damarını manşetten geçirin ve al damarı manşetin uzantısı ile birlikte saat 12 konumunda tekrar sıkıştırın, dalak kütüğünü manşetin dışına yerleştirmek için mercan damarının duvarını manşetin üzerinden geçirin saat yedi konumunda ve hepatik artere bir stent yerleştirmek için portal damarı altı sıfır ipek iplikle sabitleyin. Diyaframın her iki kenarını forseps ile sıkıştırarak karaciğeri sabitleyin ve bağlı ipliği DeBakey bulldog kelepçesi ile düz mikro makasla tutarak ortak hepatik arteri düz bir şekilde çekin. Sol elinizle ortak hepatik arterin ön duvarında küçük bir kesi yapın.

Kesinin ön duvarını düz bir mikro forseps ile tutun ve sağ elinizle ortak hepatik artere bir stent yerleştirin. Kavisli bir mikro forseps kullanarak, stenti altı sıfır ipek iplikle sabitleyin ve ipliğin kesilmiş uçlarından birini dört milimetre uzunluğunda tutun. % 50 karaciğer rezeksiyonu için karaciğeri arteriyel kateterden beş mililitre soğuk HTK çözeltisi ile yıkayın.

İlk olarak, yerine sabitlemek için arka koordinat lobunu bir sivrisinek forseps ile sıkıştırın. Sonra dava açın. Dört sıfır ipek iplikli pedikülü ve lobu rezeke edin.

Ön korat lobu da aynı şekilde çıkarılır. Ardından, plastik kutuyu 90 derece döndürün. Diyaframın sağ kenarını ve medyan lobun sol kısmını sıkıştırın.

Medial lobun iki taraflı kısımlarının sınırının üst kenarında küçük bir kesi yapın ve ligasyondan sonra sol kısmı çıkarın. Pedikülün dört sıfır ipek iplikle bağlanmasından sonra, sol lateral lobu çıkarın, rezeke edilen karaciğer yüzeyini bipolar forseps ile dikkatlice koterize edin. Supra hepatik vena kava plastisi için karaciğer kütlesi şimdi yaklaşık% 50 oranında azaltılmıştır.

İlk olarak, diyaframın her iki kenarını bir sivrisinek forseps ile sıkıştırarak karaciğerin konumunu sabitleyin. Ardından, ilgili diyaframı çıkararak supra hepatik vena kavanın ön duvarını kesin. 2 7 0 polipropilen sütürleri daha sonraki anastomoz için kalıcı sütürler olarak her iki köşenin dışından içine takın.

Bundan sonra, supra hepatik vena kavanın arka duvarını kesin. Karaciğer greftini soğuk su banyosunda HTK çözeltisinde dört santigrat derecede saklayın. Alıcıyı, donör operasyonunda olduğu gibi ameliyata hazırlayın ve orta hat kesisi ile karnı açın.

Duodenumun ve tüm bağırsakların sağ tarafına ıslak bir kan çubuğu yerleştirin. İnfra hepatik bena mağarası etrafında cerrahi bir alan elde etmek için. Sol lateral ve medyan lobları sol subfrenik boşluğa yerleştirin ve sağ lateral lobu ıslak bir bakış çubuğu ile yukarı doğru geri çekin.

İnfra hepatik vena mağarasını retroperitoneal doku legateinden izole edin ve sağ adrenal veni ıslak gazlı bez ve pamuklu çubuklarla bölün. Karaciğeri sola döndürün ve karaciğerin arkasındaki bağı inceleyin. Dalın hemen altındaki safra kanalını kordat lobundan geçirin.

İpliğin kesik uçlarından birini dört milimetre uzunluğundaki safra kanalı için bağlı tutun ve gastroduodenal arteri ve uygun hepatik arteri, ortak hepatik arterden dallanmaya üç milimetre mesafede bölün, böylece ortak hepatik arterin ucundaki arterin geniş bir yapısını oluşturun, infra hepatik vena mağaracısını sağ böbreğin hemen üzerinde metal bir mikro damar klempi ile kelepçeleyin ven ve portal ven, bir sivrisinek forseps ile karaciğer hilumunda çatallanma seviyesinde, supra hepatik vena kava'yı diyafram ile birlikte periferik vasküler bir klemp ile klempler ve klempi bir yağ bazlı kil yığınına sabitler. Anesteziyi isof flor ile yüzde 0.4 hacme düşürün. Supra hepatik vena kava ile karaciğer arasındaki sınırda sup hepatik vena kava'yı diseksiyon yaparak alıcının doğal karaciğerini çıkarın.

Sivrisinek forsepslerinin çenesinin hemen üzerindeki portal ven ve karaciğer ile sağ renal ven arasındaki orta noktanın biraz altında infra hepatik vena kava. Karaciğer grefti ortosunu topikal olarak yerleştirin. Damarın yeniden yapılandırılması bu prosedürün en zor ve önemli kısmıdır.

Çok dikkatli ama hızlı bir şekilde yapılmalıdır: Supra hepatik vena kava sürekli dikiş ile anastomoz için. Greftin sağ köşesine ekli yedi sıfır polipropilen kullanarak kal sütürünü alıcı supra hepatik vena kava üzerine içeriden dışarıya doğru yerleştirin ve ardından aynı şekilde bir düğüm atın. İkinci kalış sütürünü sol köşeye yerleştirin.

Bu, çalışan bir sütürün başlangıç dikişi olacaktır. Anastomozu genişletmek için, her iki köşede DeBakey bulldog kelepçeleri kullanarak dikişleri kavrayın ve koruyun, yanal olarak üstün hafif çekiş ile. Daha sonra, sol köşedeki dikişi greft tarafındaki duvardan dıştan içeriye, dıştaki düğüme yakın bir şekilde delin ve satic vena mağarası Intraluminal'in arka sırasını sağ köşeye yedi ila sekiz dikişle dikin.

İlk birkaç dikişi, iç lümenler sağ köşede birbirine bakacak şekilde dikkatlice yapın. Yedi sıfır polipropileni greft tarafındaki damardan dışarıya doğru delin. Ön sırayı dıştan sağdan sola doğru yaklaşık 10 dikişle dikin.

İçini emzirilmiş zil solüsyonu ile yıkayın. Hava kabarcıklarını çıkarmak için, son dikişi kal dikişe yakın yapın ve daha sonra portal venin yeniden inşası için birbirine bağlayın, portal veni bir mikro damar kelepçesi ile kelepçeleyin ve sivrisinek forsepslerini kile sabitleyin. Daha sonra, sivrisinek forsepslerinin çenesinin hemen altındaki portal venin ön duvarı.

Alıcı portal veninin içini ve manşeti emzirilmiş zil solüsyonu ile yıkayın. Manşeti portal damara yerleştirin ve çevresel altı sıfır ipek iplikle sabitleyin. Son olarak, karaciğeri yeniden perfüze edin.

Beş mililitrelik şırıngayı sıçanın arkasından çıkarın ve bir stent tekniği ile karaciğerin yeniden yapılandırılması için flor izoksid konsantrasyonunu yüzde 0.8 hacme yükseltin. İlk olarak, uygun hepatik arterin ipliğini sivrisinek forseps ile tutun ve kile sabitleyin. Sonra alıcı ortak hepatik arteri klempleyin.

Huni şeklinde bir açıklık yapmak için ortak hepatik arterin sonundaki Y yapısının çatallanmasında küçük bir kesi yapın. Greft ortak hepatik arterine yerleştirilen stenti kavisli bir mikro forseps ile tutun. Stent'i alıcının ortak hepatik arterine kaydırın ve altı sıfır ipek iplik Kravatı, bu ipliğin bir ucu ve greft ortak hepatik arter üzerindeki dört milimetrelik ipliği bir araya getirin, böylece her iki ortak hepatik arter anastomoz bölgesinin gerginliği azalarak birbirine yaklaşır.

Bundan sonra, supra hepatik vena mağarası ile aynı şekilde sürekli bir sütür anastozu ile infra hepatik vena mağarasının anastomozu için kelepçe ampını serbest bırakın, ancak daha ince ısırıklarla daha fazla dikiş kullanın. Aralıktan sonra, safra kanalının rekonstrüksiyonu için anestezi konsantrasyonunu yüzde 1.0 hacme yükseltin. Alıcı safra kanalının ipliğini bir sivrisinek forseps ile tutun ve kile sabitleyin.

Yeniden yapılandırılan safra kanalının çok uzun olmaması için safra kanalında uygun seviyede küçük bir kesi yapın. Stenti yerleştirin ve altı sıfır ipek iplikle sabitleyin. Bu ipliği ve ipliği greft kanalına bağlayın.

Şimdi birlikte tüm yeniden yapılanma prosedürleri tamamlandı. Abdominal insizyonu sürekli dört sıfır Vicryl sütür ile katmanlar halinde kapatın. Operasyondan hemen sonra, alıcı sıçanı toplam 1.5 mililitre normal salin solüsyonu içinde deri altına sfero sodyum ve buprenorfin enjeksiyonu ile tedavi edin.

Sıçanın normal bir kafese geri dönmeden önce ılık hava ve oksijen kaynağı olan özel bir yoğun bakım ünitesi kafesinde 60 dakika iyileşmesine izin verin. Tüm alıcı sıçanlar, portal reperfüzyonundan 1, 3, 24 ve 168 saat sonra kan örneklemesi için planlanan ötenaziye kadar hayatta kaldı. Serum örnekleri, transplantasyon sonrası karaciğer greftlerindeki hepatosellüler hasarın derecesini yansıtan alanin aminotransferaz seviyeleri için analiz edildi.

Bu greftte gösterildiği gibi, bir LT seviyeleri 24 saatte zirveye ulaştı ve daha sonra 168 saatlik normal sınırlar içinde düştü. Bu videodan sonra, transplantasyon araştırması için tekrarlanabilir bir deneysel model olarak sıçanlarda kısmi konu karaciğer transplantasyonunun nasıl gerçekleştirileceğini iyi anlamış olmalısınız.