Introdução à Microscopia de Fluorescência

A microscopia de fluorescência é uma ferramenta analítica muito poderosa que combina as propriedades de ampliação da microscopia leve com visualização da fluorescência. Fluorescência é um fenômeno que envolve absorção e emissão de uma pequena gama de comprimentos de onda de luz por uma molécula fluorescente conhecida como fluoróforo. A microscopia de fluorescência é realizada em conjunto com o microscópio básico de luz pela adição de uma poderosa fonte de luz, filtros especializados e um meio de rotular fluorescentemente uma amostra. Este vídeo descreve os princípios básicos por trás da microscopia de fluorescência, incluindo o mecanismo da fluorescência, a mudança do Stoke e o fotobleaching. Também dá exemplos das inúmeras maneiras de rotular uma amostra fluorescente, incluindo o uso de anticorpos e proteínas fluorescentes marcadas, corantes fluorescentes de ácido nucleico com, e a adição de proteínas naturalmente fluorescentes a um espécime. Os principais componentes do microscópio de fluorescência, incluindo uma fonte de luz de xenônio ou mercúrio, filtros de luz, o espelhodicróico e o uso do obturador para iluminar a amostra são descritos. Finalmente, exemplos de algumas das muitas aplicações para microscopia de fluorescência são mostrados.