Неинвазивный метод для В месте Определение Спаривание успеха в женских американских Омары ( Homarus атепсапиз)

Американский лобстер является знаковым блюдом на всем своем географическом ареале от Атлантической Канады до Новой Англии. Он является объектом одного из крупнейших промыслов одного вида на востоке Соединенных Штатов во многих районах. Продолжающийся успех этого промысла объясняется различными мерами управления, включая биологический контроль, направленный на сохранение выводкового стада.

Эти правила включают в себя минимальные и максимальные ограничения по размеру, защиту самок, несущих икру, и запрет на вылов самок с V-образной выемкой, которые считаются проверенными производителями. Будущее промысла омаров отчасти зависит от здорового притока новых рекрутов, которые зависят от успеха системы спаривания омаров. Тем не менее, интенсивная эксплуатация этого промысла, как и других видов промысла ракообразных во всем мире, может повлиять на репродуктивную динамику этого вида.

Таким образом, целью данной работы была разработка простого, неинвазивного метода для определения успешности спаривания половозрелых самок омаров. Пол омара лучше всего определить по их брюшной поверхности, видимой слева, как самку, характеризующуюся в первую очередь первой парой стручков PLE, которые плоские и перистые. Самки также имеют семенное вместилище овальной формы, в котором они хранят метафору спама, переданную самцом.

Самец показан справа, его можно опознать по первой паре плео-стручков, несколько конических и затвердевших. Эти стручки гоно помогают переносить сперматофор к сперматофору самки. Цветоложе семинолов.

Также показаны гоно поры самца, из которых выдавливается эта метафора SPO. Во время процесса ухаживания самцы и самки омаров демонстрируют сложное поведение, включая химически опосредованное общение и совместное использование логова. Совместное поведение в берлоге происходит как до, так и после линьки самки и может быть интерпретировано как охрана самцом, спаривание обычно происходит в течение часа после линьки самки и длится только очень короткое время.

Самец переворачивает только что линявшую самку на спину, чтобы перенести метафору S SPM на ее семенное вместилище. Самка омара способна хранить сперму от брачного события в течение двух лет или более, после чего она выдавливает свою кладку яйца. Яйца прикрепляются к стручкам самки на нижней стороне брюшка.

Развитие яиц обычно занимает от 9 до 11 месяцев и сильно зависит от температуры морской воды. Яйца вылупляются как планктонные личинки весной и летом и проходят через несколько личиночных стадий, прежде чем оседать на дно в качестве молодых особей. Метод, который мы описываем здесь, обеспечивает получение образцов спермы от большого количества самок омаров на борту коммерческих лодок для ловли омаров или других исследовательских платформ в море.

Игла с тупым концом вводится в женское семенное вместилище и удаляется часть сперматофора с соответствующими сперматозоидами. Затем образец спермы может быть сохранен и исследован позже в лаборатории. Из-за строения гнезда семинолов мы не обнаружили смертности, связанной с этим методом.

К расходным материалам, необходимым для отбора проб в полевых условиях, относятся охладитель со льдом, чтобы пробы оставались холодными. Два миллилитровых флакона для проб. Мы использовали пластиковые трубки эйнора, тупую иглу 18-го калибра, прикрепленную к трехкубовому шприцу, и холодную чистую морскую воду.

Стерильность идеальна, но не обязательна. Кроме того, вам понадобятся штангенциркули для записи морфометрических характеристик омара, таких как длина запястья, ширина живота и размеры когтей, если это необходимо. Предварительно распечатанные технические листы используются для записи этих показателей вместе с идентификационным номером образца пробирок.

Пробоотборник также должен записывать такие детали, как дата, место отбора проб и метод захвата коммерческой ловушки. Например, измерьте каждого омара с точностью до миллиметра с помощью штангенциркуля. Длину каруса следует взять дорсально от задней стенки глазницы до конца каруса. Иногда дополнительные измерения, такие как ширина живота, могут быть полезны для оценки индекса зрелости.

Позже, используя пару суппортов, измерьте стандартную длину каруса. Затем поверните животного брюшной стороной вверх, чтобы измерить ширину живота. Чтобы собрать образец спермы из семенного сосуда, держите самку омара брюшной стороной вверх животом к себе.

Введите иглу шприца в семенную емкость. Если сперматофор присутствует, то сперматозоидная пробка будет очень твердой. Вам нужно будет тщательно проникнуть, опорожнить шприц в заранее маркированную пробирку, наполнить шприц небольшим количеством чистой морской воды и ввести в семенную емкость.

Это поможет отделить сперматозоиды от твердой пробки. Затем снова поднимите поршень и поместите этот дополнительный образец в ту же пробирку для образца. Угол наклона и глубина иглы имеют решающее значение для получения однородных образцов.

На этом изображении семенной сосуд был рассечен и разделен по вертикали. Сперматозоидная пробка занимает верхнюю часть сосуда, в то время как сперматозоиды расположены внизу, в самой глубокой точке сосуда. Вместилище имеет глубину примерно сантиметр, в зависимости от размера самки, и игла должна будет проникнуть в затвердевшую пробку для сбора образца спермы.

Будьте осторожны, чтобы не протолкнуть через скорлупу вещество на дне емкости. Теперь мы покажем процесс выборки медленнее. В лабораторных условиях.

Мы рекомендуем всем, кто хочет использовать эту технику, сначала попрактиковаться в лаборатории, прежде чем пытаться собирать образцы в полевых условиях. Опять же, держите омара брюшной стороной вверх и брюшком к себе. Используйте иглу с тупым концом, начиная с угла 45 градусов с кончиком к брюшной полости, чтобы проникнуть в семенное вместилище и проверить наличие сперматозоидной пробки.

Если есть пробка, то именно здесь будет ощущаться сопротивление при постоянном давлении. Слегка поверните иглу, чтобы облегчить это проникновение. Протолкните сперматозоидную пробку, вставив иглу примерно на один сантиметр, как указано по черной контрольной отметке на показанной игле.

Вылейте шприц в пробирку с образцом. Затем наполните шприц очень небольшим количеством холодной пресной морской воды, чтобы вымыть семенную емкость, и снова вылейте содержимое в пробирку с образцом между омарами. Обязательно тщательно промойте шприц, чтобы избежать загрязнения.

Протрите иглу, затем наполните и опорожните шприц несколько раз, чтобы убедиться, что весь материал образца был смыт. Перед отбором проб еще одного омара мы рекомендуем заменить шприц и иглу после нескольких использований для обработки и идентификации спермы. Вам понадобится пипетка объемом 200 микролитров, одноразовые наконечники для пипетки, предметные стекла для микроскопа и покровные листы.

Возьмите пробирку с образцом спермы и удалите примерно 200 микролитров жидкого материала. Нанесите его пипеткой на предметное стекло с соответствующей маркировкой и покровным стеколом с помощью стандартного составного микроскопа с увеличением 100 раз, определите количество присутствующих сперматозоидов. Сперматозоиды на предметном стекле микроскопа могут быть ориентированы в различных положениях, включая вертикальные и боковые проекции.

Как видно на этих примерах изображений, мы рекомендуем использовать качественные описания, такие как «много», «мало» или «ничего», чтобы описать количество присутствующих сперматозоидов. Мы успешно применяем этот метод во многих местах на море и при отборе проб омаров в портах. Показанные здесь результаты получены от морских омаров, пойманных на банке Джорджа, которые нам удалось взять на коммерческом предприятии.

В общей сложности 84% этих самок имели сперму в семенных сосудах. Удивительно, но те, которые этого не сделали, оказались в середине размерного диапазона, а не в меньших, потенциально незрелых размерах. Этот метод не предназначен для количественной оценки фактического количества сперматозоидов в метафоре сперматозоидов.

Скорее, он обеспечивает неинвазивный метод, который можно использовать в море, чтобы определить, успешно ли приспособилась самка омара. Чем больше мы знаем о репродуктивном успехе омаров, тем лучше мы можем понять последствия эксплуатации этого вида и, таким образом, надлежащим образом управлять этим ценным морским ресурсом.