Name: Luso del Puzzle Box come un mezzo per valutare lefficacia di arricchimento ambientale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-12-29T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 50 s
Description: Scopri come valutare l'efficacia dell'arricchimento ambientale sulla funzione cognitiva nei topi utilizzando il metodo Puzzle Box. Questa tecnica semplice e flessibile permette di misurare le prestazioni cognitive in modo affidabile.

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Gli autori non hanno riconoscimenti.

Dichiarazione etica: Tutte le procedure sono state approvate dal comitato della University of Sydney Etica Animale ed adeguato alle Sanitario Nazionale e medicina Research Council di linee guida in Australia. Le procedure sono state effettuate su topi C57 / BL6J che sono stati allevati presso l'Università di Sydney Bosch roditore strumento. Tutti i topi sono stati alloggiati in un unico locale sufficientemente ventilato in 21 ° C di temperatura ambiente in un ciclo luce-buio 12 ore con le luci alle 0600 ore in gabbie ventilazione individuale con ad libitum l'accesso al cibo secco e acqua. Femmine tardo-gravidanza sono stati assegnati in modo casuale a condizioni di alloggio standard o arricchito l'ambiente. 1. Housing (livelli di arricchimento): <ol><li> Ottenere 4 tarda gravidanza adulti topi femmina. Casualmente assegna 2 per la condizione standard e porre ciascuno di essi in una gabbia mouse standard pulito (ingombro 391 x 199 x 160 mm), contenente un mouse igloo rosso. Per la condizione arricchito, posizionare il remavorazio 2 topi in una singola gabbia topo-sized clean (ingombro 462 x 403 x 404 mm). </li><li> Nella gabbia di arricchimento, posizionare una varietà di oggetti progettati per aumentare la stimolazione sensoriale e motoria (ad esempio ruote corsa, stimoli visivi, batuffoli di cotone profumate, velcro). </li><li> Ogni 2 o 3 giorni si muovono questi oggetti circa all'interno della gabbia; aggiornare qualsiasi che sono stati distrutti. </li><li> Dopo lo svezzamento a 21 giorni dopo la nascita, gli animali di sesso e il luogo in alloggi separati maschio-femmina in linea con le condizioni ambientali che sono state sollevate. Per la condizione arricchito in modo che ci sono tra i 3 ei 10 topi per gabbia con 2 e 5 topi per lo standard. Iniziare i test comportamentali una volta raggiunta l'età adulta animali (12-14 settimane di età). </li></ol> 2. La costruzione del puzzle Box <ol><li> Ottenere 6 parti di acrilico bianco (o altro materiale non poroso): uno 750 x 280 mm, due 280 x 250 mm, due 750 x 250 mm, ed uno 150 x 280 mm (vedi figura 1). </li><li> Ottenere un pezzo di acrilico nero 280 x 250 mm, con una apertura quadrata di 40 x 40 mm tagliato in un lato di questo pezzo (vedi Figura 1). </li><li> Assemblare il puzzle Box come segue: usare il pezzo mm 750 x 280 come il fondo della scatola, utilizzare 280 x 250 mm pezzi come le estremità della scatola, ed i pezzi da 750 x 250 mm come lati della scatola. </li><li> Misurare 150 millimetri nella casella da un'estremità, e posizionare il pezzo nero di acrilico attraverso la scatola in modo che si divide in due scomparti (uno grande, uno piccolo) con il filo apertura con il fondo della scatola. </li><li> Prendete il pezzo di mm acrilico bianco 150 x 280 e posizionarlo in cima al vano più piccolo della scatola assicurandosi che copre l'area completamente, fornendo una camera oscura "goal-box". Applicare questo pezzo di acrilico al corpo scatola principale cerniere, o lasciare libero di essere completamente rimosso durante la prova comportamentale. </li><li> Prendere 3 pezzi di acrilico (tre 4 x 120 mm) e unisciti a fare una "u-shapchannel ed ". </li></ol><img alt="Figura 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52225/52225fig1highres.jpg" width="500"> Figura 1: Schema del compito Puzzle Box. Il Puzzle Box è una scatola acrilica costituito da uno spazio aperto-campo (600 x 280 mm) e una zona riparata goal-box (150 x 280 mm), che misura 750 x 280 mm di tutti. Una apertura 40 x 40 mm all'interno della partizione (grigio) che separa le due aree permette animali di accedere alla zona obiettivo-scatola coperta dal campo aperto. Questa apertura è bloccata con ostacoli sempre più difficili da rimuovere come test progredisce. Gli animali sono sottoposti ad un protocollo di cinque giorni, che consiste di quattro condizioni ostruzione con tre prove per ogni condizione. 3. Esecuzione della Task Puzzle Box <ol><li> Pulire accuratamente la scatola di puzzle con il 70% di alcol. Ripetere questo passaggio tra ogni testati su animali. </li><li> Posizionare un pulito il mouse igloo rosso nel ar obiettivo-boxEA del Puzzle Box, e sostituire il coperchio sul gol-box. </li><li> Se vi è una condizione di ostruzione in fase di test, posizionare l'ostruzione all'interno della soglia della meta-box (vedi figura 2). </li><li> Posizionare il mouse in fase di test nella sezione in campo aperto del Puzzle Box, orientato verso la meta-box, e alla più lontana dalla meta-box. </li><li> Registrare il tempo impiegato per tutte e quattro le zampe dell'animale per entrare nella sezione obiettivo-box del Puzzle Box. </li><li> Se un animale non entra in porta-box, interrompere il processo una volta raggiunto il limite di tempo (vedi tabella 1). </li><li> Una volta che una prova è terminato, rimuovere l'animale dalla Puzzle Box e metterlo in una gabbia un'azienda distinta fino all'inizio della prova successiva. Mantenere un gap 60 a 180 sec tra processi per ciascun animale. </li><li> Per ciascun animale, effettuare tre prove al giorno per cinque giorni consecutivi di test, con quattro condizioni ostruzione e tre prove di ciascuna condizione. Il terzo triAl di una data condizione ostruzione deve sempre somministrato su un giorno successivo (vedi Tabella 1). </li></ol><img alt="Tabella 1" fo:content-width="5in" src="/files/ftp_upload/52225/52225table1.jpg" width="500"> Tabella 1: Schema del compito Puzzle Box. Il compito Puzzle Box viene eseguita per cinque giorni, e consiste di quattro condizioni ostruzione. Ci sono tre prove su ciascuno dei primi quattro giorni, e uno il quinto giorno. Ogni condizione di ostruzione ha tre prove; le prime due in un giorno, e il terzo giorno immediatamente successivo. La prima prova di una condizione di ostruzione mira a testare native capacità di risolvere problemi, il secondo processo esamina acquisizione compito e rinforzo, e la terza prova è usato come un test per la conservazione della soluzione e di richiamo. <img alt="Figura 2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52225/52225fig2highres.jpg" width="600"> Figura 2: ostruirecondizioni di ioni all'interno del compito Puzzle Box. Diagrammi di dell'arena Puzzle Box e le condizioni di ostruzione utilizzati in questo studio. (A) Condizione 0 (C0), senza ostruzioni presenti all'interno della porta tra il campo aperto e aree goal-box. (B) Condizione 1 (C1 ), con un canale presente "U" all'interno della porta tra il campo aperto e aree obiettivo-box. (C) Condizione 2 (C2), in cui il canale è riempito con lettiera pulita. (D) Condizione 3 (C3 ), con un "plug tissue" presente nella porta tra il campo aperto e aree obiettivo-box. (E) Condizione 4 (C4) con un "plug foam" presente nella porta tra il campo aperto e meta-box aree. Dimensioni dell'arena sono secondo elencato in Metodi e Figura 1. 4. Interpretazione dei dati <ol><li> Rappresentare i dati sia come tempo necessario per completare il processo (comprese le prove nulli in cui gli animali non è stata completata l'operazione entro il termine previsto) o come il numero di prove nulli. </li><li> Utilizzare una misure ripetute ANOVA per valutare l'effetto della condizione abitativa, all'andamento nel Puzzle Box, con il tipo di ostruzione / condizioni (C) e il numero di task (T) entro soggetti fattori e il livello di arricchimento (standard contro arricchito) tra i soggetti-factor . </li></ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari concorrenti.

I dati presentati dimostrano che il Puzzle Box può essere utilizzato in modo efficace per valutare l&#39;impatto di EE. Topi allevati in ambienti arricchiti sempre preso molto meno tempo per risolvere i puzzle di ostruzione all&#39;interno di questa analisi comportamentale che ha animali allevati all&#39;interno di condizioni standard di laboratorio. Inoltre, questa differenza era più importante nella prima prova per tre delle quattro condizioni testate, suggerendo EE ha una maggiore influenza sulla native capacità di r...

L&#39;arricchimento ambientale (EE) può essere definita come un ambiente che forniscono gli animali con maggiori opportunità di interazione sociale, attività motoria, e una maggiore stimolazione sensoriale del solito vissuto in un environment.EE standard di laboratorio ha dimostrato di influire in modo coerente il comportamento degli animali, determinando modifiche come la riduzione dello stress e l&#39;ansia di attività legate 8-10, il miglioramento delle prestazioni in compiti di apprendimento e memoria 8,11, insorgenza precoce di coordinazione motoria e l&#39;attività esplorativa 11, cambiamenti di cure materne 8 nonché resistenza alle sostanze stupefacenti 12- 15. Inoltre, EE è stato rivelato per migliorare gli effetti delle malattie neurodegenerative, ritardando l&#39;insorgenza e diminuire la gravità dei sintomi in modelli animali di Huntington di 1-4,16, Parkinson 17 e malattia di Alzheimer 18. Questi cambiamenti COrrelazione con le alterazioni anatomiche e molecolari EE è noto per indurre in tutto il cervello. Animali allevati in ambienti arricchiti dalle prime fasi di sviluppo mostrano una miriade di cambiamenti neurali, tra cui un aumento di peso del cervello e lo spessore corticale, dendritica ramificazione 9,2-22 e la densità sinaptica 23. EE può alterare sia il livello e la tempistica di espressione del fattore di crescita 9,24-30, che ha dimostrato di contribuire allo sviluppo accelerato sensoriale 25,26,28,29, mnemonico 30, nonché circuiti motori 31,32. Il lavoro precedente ha rivelato a risultati contraddittori momenti in cui si esamini l&#39;impatto di EE, senza tener conto dei diversi tipi di animali e ambienti utilizzati all&#39;interno dei singoli studi 9,24,27,30. Attualmente, non esiste compito comportamentale coerente e semplice che può essere utilizzato per misurare l&#39;efficacia di diversi paradigmi EE in ceppi diversi e specIES di animali. Il compito Puzzle Box è stato concepito come un semplice test per determinare problema nativa di un animale solving 7. Gli animali posti in zona aperta sono tenuti a rimuovere ostacolare materiali situati all&#39;interno di una piccola apertura per poter accedere a una coperta regione / rifugio. Ciascun soggetto è dato tre prove con lo stesso ostruzione per valutare tre diversi attributi cognitive. La prima prova si ottiene un indicazione di base di capacità di problem solving intrinseca o nativa. La seconda prova, eseguire lo stesso giorno, dà qualche indicazione della capacità dell&#39;animale di migliorare e rafforzare le strategie per rimuovere l&#39;ostruzione specifica in tal modo. La terza prova, condotta il giorno seguente, permette di comprendere meglio la capacità del soggetto di trattenere e richiamare la soluzione imparato al compito. La motivazione per risolvere questi &quot;enigmi ostruzione&quot; di animali può essere variata, potenzialmenteevocando un innato desiderio di evitare campi aperti e cercare riparo, così come un&#39;unità intrinseca di esplorare l&#39;ambiente circostante 6,7. La moltitudine di potenziali conducenti comportamentali alla base del desiderio di risolvere il puzzle Box suggerisce che diverse aree del cervello sono coinvolte nella mediazione prestazioni compito. Il lavoro precedente ha mostrato che in modelli murini di schizofrenia, corteccia prefrontale e l&#39;ippocampo sono coinvolti nell&#39;acquisizione di questo compito 5. Uno studio della lesione nei ratti ha rivelato anche un gran numero di regioni cerebrali coinvolte nella prestazione Puzzle Box, tra cui vari nuclei del talamo, l&#39;ipotalamo, il cervelletto, e le strutture limbiche. Insieme, questi risultati indicano che impegnarsi in questo problem solving compito comporta una serie di strutture neurali associate alla funzione cognitiva. Il Puzzle Box è stato utilizzato con successo per valutare la capacità di problem solving di topi, così come deficit cognitivi esposto da mmodelli di urina di schizofrenia 5-7. Prestazioni del compito ha dimostrato di essere altamente coerente, e correlare bene con risultati di altri test cognitivi comportamentali 6. L&#39;obiettivo di questo lavoro è stato quindi di adattare il compito Puzzle Box per diventare un mezzo semplice ed affidabile per determinare l&#39;efficacia di EE.

<table><tbody><tr><td>Pannello</td><td></td><td></td> acrilico nero <td>280 x 250 mm con una "porta" di 40 x 40 mm tagliata su un lato</td></tr><tr><td>Pannello</td><td></td><td></td> acrilico bianco <td>280 x 250 mm</td></tr><tr><td>Pannello</td><td></td><td></td> acrilico bianco <td>280 x 250 mm</td></tr><tr><td>Pannello</td><td></td><td></td> acrilico bianco <td>750 x 250 mm</td></tr><tr><td>Pannello</td><td></td><td></td> acrilico bianco <td>750 x 250 mm</td></tr><tr><td>Pannello</td><td></td> acrilico bianco<td></td><td>Sottopassaggio</td></tr><tr><td></td> in pannello <td></td><td></td><td></td>acrilico bianco</tr> 150 x 280 mm <tr><td>3</td><td>pezzi di plexiglass o acrilico</td> da 40 x 120 mm<td colspan="4">Nota: se non è possibile accedere al pannello acrilico, sarà sufficiente plexiglass o materiale simile non poroso.<td></td><td></td></tr><tr></td></tr><tr><td>Webcam</td><td>Logitech</td><td>C210</td><td>Fissare al tetto con nastro isolante. In alternativa, utilizzare un treppiede.</td></tr><tr><td>VirtualDub v1.10.4</td><td>VirtualDub</td><td>n/a&nbsp;</td><td>Software per la registrazione di video comportamentali. Input dalla webcam.</td></tr><tr><td>TopScan v 3.0</td><td>CleverSys Inc.</td><td>N/A&nbsp;</td><td>Software per il monitoraggio e l'analisi automatizzati della vista dall'alto del comportamento del mouse. I video catturati vengono analizzati post-hoc.</td></tr></tbody></table>

l&#39;uso del puzzle box come un mezzo per valutare l&#39;efficacia di arricchimento ambientale

The Use of the Puzzle Box as a Means of Assessing the Efficacy of Environmental Enrichment

L'arricchimento ambientale può influenzare notevolmente lo sviluppo e la funzione dei circuiti neurali. Inoltre, è stato dimostrato che l'arricchimento ritarda con successo l'insorgenza dei sintomi nei modelli della malattia di Huntington 1-4, suggerendo che i fattori ambientali possono evocare un effetto neuroprotettivo contro il danno progressivo a livello cellulare osservato nelle malattie neurodegenerative. I modi in cui un animale può essere arricchito dal punto di vista ambientale, tuttavia, possono variare notevolmente. Inoltre, non esiste un modo semplice in cui gli effetti dell'arricchimento ambientale possono essere valutati: la maggior parte dei metodi richiede paradigmi comportamentali piuttosto complicati e/o analisi anatomiche/fisiologiche post mortem. Questo protocollo descrive l'uso di un test comportamentale semplice ed economico, il Puzzle Box 5-7, come mezzo robusto per determinare l'efficacia di una maggiore stimolazione sociale, sensoriale e motoria sui topi rispetto alle coorti allevate in condizioni di laboratorio standard. Questo semplice compito di risoluzione dei problemi sfrutta il desiderio innato di un roditore di evitare recinti aperti cercando riparo. La capacità cognitiva viene valutata aggiungendo impedimenti sempre più complessi all'ingresso del rifugio. Il tempo impiegato da un determinato soggetto per rimuovere con successo gli ostacoli ed entrare nel rifugio funge da metrica principale per l'esecuzione del compito. Questo metodo potrebbe fornire un mezzo affidabile per valutare rapidamente l'efficacia di diversi protocolli di arricchimento sulla funzione cognitiva, aprendo così la strada alla determinazione sistematica del ruolo svolto da specifici fattori ambientali nel ritardare l'insorgenza di malattie neuroevolutive e neurodegenerative.

I risultati qui descritti sono un campione rappresentativo, con i dati provenienti dalle diverse coorti composte da diverse cucciolate. Tutti i test comportamentali è stato condotto tra il 0700 e 1100 ore, con ordine sperimentazione casuale di animali all'interno di una coorte. Animali sollevate in un ambiente arricchito (n = 14, 7 femmine e 7 maschi) hanno significativamente meno tempo per risolvere i compiti ostruzione all'interno della scatola Puzzle di quelle sollevate in un ambiente standard (n = 15, 7 femmina e ma...

L'arricchimento ambientale fornisce un potenziale effetto protettivo contro i disturbi neurodegenerativi. Attualmente, tuttavia, non esiste un modo semplice per determinare l'efficacia delle procedure di arricchimento. Questo protocollo descrive un semplice metodo "Puzzle Box" per valutare la funzione cognitiva di un animale, al fine di rivelare l'efficacia dell'arricchimento ambientale.

L&#39;uso del Puzzle Box come un mezzo per valutare l&#39;efficacia di arricchimento ambientale

Environmental enrichment can dramatically influence the development and function of neural circuits.  Further, enrichment has been shown to successfully ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è valutare l'efficacia dell'arricchimento ambientale sulla funzione cognitiva nei topi. Ciò si ottiene creando prima una scatola puzzle contenente due camere. I topi vengono quindi abituati all'arena di prova e possono scoprire l'ingresso della porta riparata.Successivamente, i topi vengono sfidati con una serie di ostacoli o puzzle che bloccano l'ingresso del rifugio. I risultati mostrano che l'arricchimento ambientale migliora in modo affidabile le prestazioni nella scatola del puzzle. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ad altri metodi è la sua facilità e semplicità sia nella costruzione della scatola che nell'implementazione, e il fatto che è estremamente flessibile nella progettazione di attività con diversi livelli di carico cognitivo.Quindi questo metodo può essere utilizzato per affrontare una serie di domande nel campo delle neuroscienze, in particolare quelle associate alla valutazione dell'efficacia degli interventi ambientali. Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sull'effetto dell'arricchimento ambientale sulla cognizione, può essere applicato anche ad altri sistemi come i modelli animali geneticamente modificati di malattie umane e i test preclinici di nuove terapie. Per iniziare, assegnare in modo casuale i topi gravidi alle condizioni di stabulazione standard mettendoli in una gabbia per topi standard o alla condizione arricchita mettendoli in gabbie delle dimensioni di un ratto.Posiziona una varietà di oggetti progettati per aumentare la stimolazione sensoriale e motoria nella gabbia di arricchimento ogni due o tre giorni. Sposta questi oggetti all'interno della gabbia e rinfresca quelli che sono stati distrutti durante lo svezzamento del sesso, i cuccioli, e segregali in condizioni abitative coerenti con l'ambiente da cui sono stati allevati per la condizione arricchita. Assicurati che ci siano tra tre e 10 topi per gabbia con due e cinque topi per il gruppo standard.I test comportamentali dovrebbero iniziare una volta che questi animali raggiungono l'età adulta. A 12-14 settimane, la scatola del puzzle è costruita con sei pezzi di acrilico bianco, un pezzo di acrilico nero con un'apertura quadrata tagliata sul lato viene posizionato a 150 millimetri da un'estremità per dividere la scatola in due scomparti. Un pezzo di acrilico bianco viene posizionato sopra lo scomparto più piccolo per creare una scatola scura per la porta.Il coperchio in acrilico può essere fissato al corpo della scatola principale tramite cerniere o lasciato libero per essere completamente rimosso durante i test comportamentali. Successivamente, unisci tre pezzi di acrilico per creare un canale a forma di U da utilizzare come ostruzione durante il test che segue. Per prima cosa, pulisci accuratamente la scatola del puzzle con il 70% di alcol.Ripeti questo passaggio tra i test di ciascun animale. Quindi posiziona un topolino rosso pulito, un igloo all'interno della scatola della porta e rimetti il coperchio quando sei pronto. Posiziona il mouse all'estremità più lontana della sezione del campo aperto rivolta verso la casella della porta.Avvia immediatamente un timer e registra il tempo impiegato dall'animale per entrare nell'altra camera. Arrestare il timer. Quando tutte e quattro le zampe dell'animale entrano nella sezione della scatola della porta, termina la prova.Se l'animale non entra nella casella della porta entro un limite di tempo prestabilito. Dopo la prova, rimuovere l'animale e metterlo in una gabbia di contenimento separata. Mantieni un intervallo compreso tra 60 e 182 tra le prove per ogni animale.Esegui tre prove al giorno per cinque giorni consecutivi. Durante il corso dei test, introdurre quattro condizioni di ostruzione con tre prove di ciascuna condizione. Innanzitutto, introduci il canale a forma di U costruito in precedenza e registra il tempo impiegato dall'animale per entrare nella casella della porta per creare un'altra condizione di ostruzione.Posizionare la lettiera all'interno e intorno al canale prima di testare altre ostruzioni che possono essere introdotte. Includi il posizionamento di un fazzoletto o di un tappo di schiuma all'interno della porta. La terza prova di una data condizione di ostruzione deve essere sempre somministrata il giorno successivo Al termine della prova, calcolare il tempo impiegato per completare ciascuna prova, comprese le prove nulle in cui gli animali non hanno completato l'attività entro il tempo specificato.Infine, utilizzare misure ripetute su NOVA per valutare l'effetto delle condizioni dell'alloggio sulle prestazioni all'interno della scatola del puzzle. Questi dati rappresentano le prestazioni dei compiti della scatola del puzzle di animali adulti allevati dalla nascita in ambienti arricchiti o standard. Gli animali allevati in un ambiente arricchito hanno risolto i compiti di ostruzione all'interno della scatola del puzzle molto più velocemente di quelli allevati in un ambiente standard, con differenze di picco che si verificano tra il secondo e il quarto giorno di test.Quando si tenta questa procedura, è importante ricordarsi di maneggiare gli animali in modo appropriato per evitare comportamenti indotti dallo stress imprevisti. Quindi, dopo questa procedura, altri metodi come l'immunoistochimica, gli interventi chirurgici mirati o l'elettrofisiologia in vivo potrebbero essere utilizzati per svelare i meccanismi alla base degli effetti comportamentali osservati. Quindi, dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come ottenere una valutazione preliminare efficiente e affidabile della funzione cognitiva nel modello AMA.

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