정맥 당부 하 검사와 비인간 영장류의 대사 상태의 특성

이 정맥 내 포도당 내성 검사(IVGTT)의 전반적인 목표는 원숭이의 대사 질환이 건강한 상태에서 대사 불능, 고혈당 상태로 진행되는 과정을 특성화하는 것입니다. 이 방법은 당뇨병에서 인슐린 저항성 치료의 치료 효능에 대한 식이 또는 약리학적 조사를 위해 대사 상태에 따라 계층화된 피험자 코호트를 설정하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술의 주요 장점은 시간과 비용이 많이 드는 다른 기술에 비해 수행하기 쉽다는 것입니다.

시술을 시작하기 14-18시간 전에 원숭이의 우리에서 음식을 꺼내 식후 혈당 수치의 변동을 피하십시오. 다음 날 아침, 진정제를 투여한 동물의 무게를 잰다. 그런 다음 영장류를 가열된 시술 테이블 위에 옆으로 누운 자세로 놓습니다.

15-20분마다 맥박 산소 측정기를 사용하여 심박수와 말초 모세혈관 산소 포화도를 측정합니다. 스톱워치를 사용하여 호흡수를 측정하고 온도계를 사용하여 직사각형 온도를 측정합니다. 잇몸과 입술 주위의 점막이 촉촉하고 분홍색인지 모든 클리닉 매개변수 검사에서도 확인하십시오.

동물의 기본 건강을 확인한 후 이발을 사용하여 카테터를 삽입할 부위의 털을 다듬은 다음 클로르헥시딘과 70% 알코올을 번갈아 가며 스크럽하여 두 부위를 살균합니다. 부위가 준비되면 첫 번째 카테터를 삽입하고 3방향 스톱콕으로 루어를 헤파린 식염수 플러시에 부착합니다. 이곳은 채혈 부위입니다.

마개를 테이프로 붙여서 다리에 고정합니다. 카테터의 배치는 개통성과 정확한 연속 채혈에 매우 중요합니다. 따라서 heparinized flush in-lock 시스템을 쉽게 고정하고 조작하기 위해 복재 정맥의 내측 및 더 가까운 부위를 고려하는 것이 중요합니다.

그런 다음 두 번째 카테터를 삽입하고 포도당 주입을 위한 포트를 부착한 다음 포도당 주입까지 캐뉼라 특허를 유지하기 위해 1밀리리터의 헤파린 식염수를 투여합니다. 포트를 암에 테이프로 붙여서 고정합니다. 두 카테터가 모두 제자리에 있으면 기준선 샘플을 얻고 휴대용 혈당계를 사용하여 공복 혈당 수치를 측정합니다.

표준 화학 분석을 위한 혈청 샘플과 동물의 전반적인 건강을 평가하기 위한 완전한 혈구 수를 위한 전혈 샘플을 확보합니다. 전혈 샘플을 뒤집습니다. 각 채혈 후 EDTA 튜브의 샘플을 프로테아제 억제제와 혼합합니다.

기준선 샘플을 얻은 후 포도당 주입 포트를 통해 30초 동안 50% 포도당 용량을 주입합니다. 그런 다음 5ml의 헤파린 식염수로 플러시하여 포도당이 포트에 남지 않도록 합니다. 주입이 끝나면 주입으로 인한 잔류 포도당이 후속 혈액 샘플을 오염시킬 수 있으므로 장갑을 교체하십시오.

첫 번째 주입 후 샘플 시점은 포도당 주입 종료 후 3분 후이며, 그 다음에는 T 5, 7, 10, 15 및 20분의 샘플이 이어지며 마지막 샘플은 T 30분에서 얻어집니다. 채취 후 10분 이내에 포도당 및 인슐린 분석을 위해 샘플을 원심분리한 다음, 샘플의 다운스트림 분석까지 혈장을 냉동 및 섭씨 영하 80도에서 보관하기 위해 극저온으로 분취합니다. T three 샘플 채취에서 휴대용 혈당계를 사용하여 포도당 주입 확인을 위해 혈당 수치를 확인합니다.

마지막 샘플이 채취되면 캐뉼라를 제거하고 카테터를 삽입한 부위에 압력을 가하여 지혈을 확인하고 완전히 회복될 때까지 동물을 모니터링합니다. 여기에서는 30분 IVGTT 동안 성숙하고 건강한 당뇨병성 cynomolgus 원숭이의 전형적인 포도당 및 인슐린 곡선을 보여줍니다. 건강한 원숭이의 공복 기준 포도당 값은 데시리터당 50-60mg으로 낮을 수 있으며, T 3분 시점에서 초기 혈장 포도당 스파이크가 관찰됩니다.

이는 당뇨병이 있는 동물에서 나타나는 일반적인 혈장 포도당 스파이크보다 극적으로 낮습니다. 시술이 진행되는 동안 건강한 동물의 포도당 수치는 종종 기준선 값으로 돌아가지만 대사 장애 및 당뇨병성 동물의 수치는 그렇지 않습니다. 건강한 동물의 인슐린 곡선은 두 개의 피크를 보이는데, 이는 포도당 수송 및 흡수에 대한 인슐린의 말초 효과에 의해 정상보다 더 큰 부분에서 매개되는 혈당의 초기 급격한 감소에 해당합니다.

인슐린 반응의 첫 번째 단계에서도 이러한 말초 효과의 크기는 포도당 저하에 대한 간의 기여도와 같지 않으며, 포도당 저하에 대한 간의 기여도는 작지만 더 지속적인 두 번째 인슐린 피크 동안 내인성 포도당 생성의 억제를 통해 혈당 수치에 가장 큰 영향을 미칩니다. 일단 동물이 과도하게 당뇨병에 걸리게 되면, 포도당 덩어리에 대한 반응으로 인슐린 생산이 급격히 떨어집니다. 혈당 수치는 절차가 진행되는 동안 높은 상태로 유지됩니다.

포도당과 마찬가지로, 청소가 일어나는 것은 이제 거의 전적으로 인슐린에 의존하지 않는 메커니즘에 의해 매개됩니다. 이 절차에 따라 등급별 포도당 주입 또는 고인슐린 혈당 클램프와 같은 다른 방법을 수행하여 인슐린 감수성에 대한 추가 질문에 답할 수 있습니다. 원숭이 혈액에 노출된 주사 바늘로 작업하는 것은 B 헤르페스 바이러스에 노출될 가능성이 있기 때문에 매우 위험할 수 있다는 것을 잊지 마십시오.

이 절차를 수행하는 동안 적절한 개인 보호 장비를 착용하고 날카로운 물건을 다룰 때 각별한 주의를 기울이는 것과 같은 예방 조치를 항상 준수해야 합니다.