Normal Farelerde Amiloid-β Peptitler intraserebroventriküler enjeksiyon Akut Alzheimer gibi Bilişsel Açıkları tetikleyebilecek

Bu cerrahi prosedürün genel amacı, stereotaktik aletler olmadan Amiloid beta'nın intraserebroventriküler enjeksiyonunu gerçekleştirmek ve normal farelerde Alzheimer benzeri davranış anormalliklerini akut olarak indüklemektir. Bu yöntem, Alzheimer Hastalığı için ilaç keşfi gibi nörobiyoloji alanındaki temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel faydası, stereotaktik aletlerin yardımı olmadan farelerin intraserebroventrikül bölgesine doğrudan A beta enjeksiyonunu gerçekleştirebilmemiz ve yaşlanma sürecini beklemeden farelerde Alzheimer benzeri davranış anormalliklerini taklit etmemizi sağlamasıdır.

Bu tekniğin etkileri, Alzheimer Hastalığının tedavisine veya teşhisine kadar uzanır, çünkü Amiloid beta'nın aşağı akış patolojisini incelemek için kullanılabilir ve ilaç adayları için taranabilir. Genel olarak, bu yönteme yeni olan kişi mücadele edecektir, çünkü hayvan kafatasında bregma'nın kesin yerini bulmak zor olabilir. Bu işleme başlamak için, DMSO ile bir milimolar A-beta yapın.

Ardından, PBS'de on kat seyreltin. Daha sonra, ICV enjeksiyonu için bir araç olarak% 10 DMSO içeren PBS çözeltisini hazırlayın. Bundan sonra, derinlik kontrollü enjeksiyon için iğne uzunluğunu ayarlamak için mikroşırıngayı Parafilm şeritleri kullanarak 26 gauge paslanmaz çelik bir iğne ile sarın.

Şırıngayı birden çok kez yoğun bir şekilde sarın, böylece iğne yerleştirme sırasında Parafilm sıkıştırılmaz ve iğne uzunluğu sabit kalır. Ardından, iğne ucu ile Parafilm arasında iğne uzunluğunu 3,8 milimetreye ayarlamak için Parafilm şeritlerinin katmanlarını kesin. Daha sonra, şırıngayı iki kez% 70 etanol ile yıkayın.

Daha sonra, şırıngayı damıtılmış suyla durulayın. Çeker ocakta en az 30 dakika tamamen kurutun ve enjeksiyondan önce temiz şırıngayı 20 dakika daha UV ışığı altında bırakın. Bu adımda, yedi haftalık anestezi uygulanmış bir fareyi ılık bir matın üzerine yerleştirin.

Daha sonra, işlem sırasında kornea kuruluğunu önlemek için her iki göze steril PBS damlaları veya merhem uygulayın. Daha sonra, ayak parmağı sıkışma ekstansör çekilme refleksini değerlendirerek yeterli anesteziyi onaylayın. Ardından, şırınganın dikey enjeksiyonu için referanslar sağlamak üzere yüzeylere çizilen çok sayıda dikey çizgiye sahip iki ayna hazırlayın.

Aynalardan birini farenin gövdesinin hemen yanına, diğerini de başın önüne yerleştirin. M1'i farenin iki gözü arasındaki hayali orta çizgiye paralel tutun ve M2'yi M1'e dik olarak düzenleyin, böylece iki düzlem 90 derecelik bir açı oluşturur. Ardından, farenin alnına% 70 etanol püskürtün ve kuru pamuklu çubuklarla ovalayın.

Bregmayı bulmak için, başparmak ve işaret parmaklarını doğrudan gözlerin üzerine yerleştirin ve alnını her iki gözün çıkıntı yapacağı ölçüde hafifçe bastırın. Aynı zamanda, altındaki kafatası hareketini en aza indirmek için alnın derisini geriye doğru sürükleyin. Enjeksiyon bölgesini kafatasının altında 2,4 milimetre derinlikte bir terzi bandı ile bulun.

Şırıngayı 10 mikrolitre A-beta çözeltisi veya araç ile doldurun. Şırıngayı, enjeksiyon bölgesinin düzlemine dik olacak şekilde yerleştirin. Ardından, şırınganın her iki aynada da yansıyan görüntülerini aynalarda çizilen çizgilerle hizalayın.

Parafilm sargısı cilde temas edene kadar iğneyi sokmaya başlayın. Şırıngayı bir elinizle tutun ve diğer elinizle beş mikrolitre A-beta çözeltisi veya araç enjekte edin, duraklamadan beş saniye boyunca yavaşça ve şırınganın boyunca dik kaldığından emin olun. Enjeksiyonu tamamladıktan sonra, şırıngayı çıkarmadan önce üç ila beş saniye bekleyin.

Başparmak ve işaret parmaklarını tekrar başınızın üzerine yerleştirin ve kafatasının gereksiz hareketlerden korunması için aşağı doğru tutun. Ardından şırıngayı eğmeden çıkarın. Ardından, fareyi kurtarma için ılık bir pedin üzerine yerleştirin.

Hedef ICV bölgesine A-beta enjekte edilip edilmediğini doğrulamak için, ventriküllerden birine ulaşıp ulaşmadığını görmek için beyin dokusundaki iğne girişinin izini kontrol edin. Enjeksiyon başarısız olursa, o deneğin verilerini deney sonuçlarının analizinden hariç tutun. Bu deneyde, A beta monomerleri, oligomerler ve fibrillerin bir karışımını üretmek için 42 amino asitten oluşan tam uzunlukta A-beta peptidi kullanıldı.

HFIP ile indüklenen monomerizasyon adımı ile nispi homojen monomerler elde edildi. Yedi günlük inkübasyondan sonra, A-beta'nın oligomerik formları arasında trimerlerin ve tetramerlerin baskın tür olduğu çeşitli boyutlarda A-beta agregatları geliştirildi. Bu çalışmada, Y-labirent testinde A-beta enjekte edilen farelerde uzaysal çalışma belleği değerlendirildi, burada kol seçimlerinin sırası ve toplam kol girişlerinin sayısı kaydedilirken, her farenin labirenti serbestçe keşfetmesine izin verildi.

A-beta enjekte edilen fare grubu, bilişsel eksikliklerin gelişimini gösteren önemli ölçüde daha düşük değişim oranları gösterdi. Bir kez ustalaştıktan sonra, bu teknik, uygun şekilde yapılırsa, anestezik prosedürler de dahil olmak üzere 20 dakika içinde yapılabilir. Bu prosedürleri denerken, iğneyi enjeksiyon düzlemine dik yapmayı unutmamak önemlidir.

Geliştirilmesinden sonra, bu teknik, Alzheimer Hastalığının ilaç keşfi alanındaki araştırmacıların, bu kolay erişilebilir Alzheimer kemirgen modellerinde ilaç adaylarının in vivo taramasını keşfetmelerinin yolunu açtı. Bu videoyu izledikten sonra, stereotaktik aletler olmadan intraserebroventriküler enjeksiyonun nasıl yapıldığını iyi anlamış olmalısınız.