Name: Symmetric Bihemispheric Postmortem Cérebro de corte para o Estudo de Saúde e Condições Patológicas cerebral em humanos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 29 s
Description: Aprenda a técnica de secção simétrica bihemisférica do cérebro post-mortem para investigar distribuição hemisférica de patologias cerebrais em humanos. Este método organiza dados neuropatológicos qualitativos e quantitativos.

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Agradecemos aos milhares de doadores de cérebro, pacientes, famílias e neurocientistas em todo o mundo que, durante os últimos dois séculos e por meio de seus generosos dons e esforços intelectuais, ajudaram a descobrir como o cérebro humano funciona, a entender doenças cerebrais devastadoras e a desenvolver seus tratamentos. Agradecemos particularmente à Sra. Cecilia V. Feltis por editar e revisar este manuscrito.

Procedimentos envolvendo tecidos humanos pós-morte foram revistos pelo conselho de revisão institucional e isentos ao abrigo do 45 CFR (Code of Federal Regulations). NOTA: O protocolo descreve um procedimento de corte cérebro bihemispheric simétrica para a avaliação postmortem cérebro finalizado para estudos neuropatológicos em seres humanos. As descrições detalhadas dos aparelhos, instrumentos, materiais e suprimentos necessários para executar o corte cérebro humano serão excluídos. Os materiais e suprimentos para dissecções cérebro são selecionados a critério do único investigador e são baseadas em ferramentas de autópsia permitidos ou autorizados em cada instituição de pesquisa. O conjunto mínimo de ferramentas e materiais necessários para este procedimento está descrito na Tabela de Materiais / Equipamentos. Procedimentos de corte específicos e precauções para suspeitos de doenças cerebrais transmissíveis, tais como CJD humana, estão fora dos objectivos deste manuscrito e estão disponíveis a partir de outras fontes 7. 1. Symmetric BiCorte cerebral hemisférica Nota: Assegurar que o cérebro recebeu a fixação do tecido necessária (utilizando, por exemplo, neutro tamponado a 10% de formalina) (isto é, pH), e tecido conservação durante um período de duas a três semanas, dependendo do periagonal, metabólico ( isto é, temperatura) condições. No entanto, para os estudos de correlação de imagem de patologia, um período mais longo de fixação (&gt; 5,4 semanas) tem sido sugerido 8. <ol><li> Colocar o cérebro sobre uma superfície plana voltada para o investigador, com os postes frontais voltadas no sentido oposto em relação ao investigador. </li><li> Colocar o cérebro de tal modo a permitir uma visualização clara e completa de todos os giros cortical e sulcos do cérebro inteiro (Figura 1a). </li><li> Primeiro olhar para anomalias das meninges, as assimetrias hemisféricas macroscópicos (possíveis indicadores de focal, lobar ou fenômenos hemisféricas generalizadas de atrofia), lesões macroscópicas tissutal (ie, tumors ou hérnia), malformações congênitas, anomalias dos vasos, e quaisquer outras anormalidades possíveis ou apresentações incomuns da superfície cerebral. NOTA: Para obter descrições detalhadas sobre como avaliar um cérebro humano, referem-se comercialmente disponíveis livros neuropatologia e manuais de autópsia 9,10. </li></ol> 2. Protocolo Sequence <ol><li> Enfrentar pólos frontais longe do investigador, com os aspectos superficiais do hemisférios (telencéfalo) voltado para o investigador. Tome-se como muitas fotos digitais como necessário em cada caso particular para documentar possíveis macro-anomalias e ter em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômica e pós-corte. Ter um assistente de pesquisa tirar fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para captar toda a superfície cortical (Figura 1a - c). </li><li> Mark pré e giros corticais pós-central usando tinta ou agulhas coloridas antes de cortar o cérebro (Figura 1b </strong&gt;). NOTA: Este procedimento facilita um reconhecimento mais imediato do motor e córtex somatossensorial primário após o corte. </li><li> Rodar o cérebro por 180 graus, mantendo-o virado para a mesma direcção (ou seja, os postes frontais voltadas para fora a partir do investigador). Verifique cuidadosamente a base do cérebro. Preste atenção especial às condições dos sistemas vasculares cerebrais (ou seja, artérias basilar e vertebrais e do polígono de Willis) e os nervos cranianos em seus níveis saída / entrada do tronco cerebral. Gerir os bulbos olfatórios e tratados com cuidado especial para evitar laceração tissutal, devido à sua extrema fragilidade. <ol><li> Tome-se como muitas fotos digitais como necessário em cada caso particular para documentar possíveis macro-anomalias e ter em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômica e pós-corte. Tem um assistente de pesquisa tirar fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para capturar a totalidade das superfícies corticais e do tronco cerebral. </li&gt; </ol></li><li> Voltado para a base do cérebro e, usando um bisturi, cortar o tronco cerebral transversalmente ao nível da parte superior da ponte (o mais perto possível para a base do cérebro). Verifique cuidadosamente a SN (ou seja, por palidez) 11 e outras estruturas vizinhas 12. Tome nota, possivelmente usando um dispositivo gravador de áudio, de qualquer aparência incomum do cérebro em comparação com um cérebro normal 13. </li><li> Novamente rodar o cérebro por 180 graus e, usando uma faca afiada, separar os dois hemisférios, cortando o corpo caloso centralmente através da fenda longitudinal medial e seguindo uma direcção fronto-occipital. Inspecione cada lado de cada hemisfério para possíveis anomalias (por exemplo, ampliações ventriculares, malformações, amaciadores de tecidos, tumores, etc.) 13. Veja a Figura 2-A. <ol><li> Tome-se como muitas fotos digitais como necessário em cada caso particular para documentar possíveis macro-anomalias epara contabilizar possíveis considerações clínico-neuroanatômica e pós-corte. Tem um assistente de pesquisa tirar fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para captar toda a superfície cortical. Tome nota de qualquer característica incomum do cérebro em comparação com um cérebro normal. </li></ol></li><li> Colocar os dois hemisférios plana, encontrando-se os seus aspectos medial, com os lobos frontais de costas para o investigador, como mostrado na Figura 2b. Coloque-os de tal forma que os seus centros de tocar (também em caso de assimetria hemisférica marcada). </li><li> Usando uma faca afiada, corte manualmente através de ambos os hemisférios cerebrais, começando nos pólos frontais e movendo-se em direcção aos pólos occipitais através de todo o comprimento dos hemisférios. Obter duas séries de 1 cm de espessura blocos de tecido cerebral (cerca de 18 placas para cada hemisfério). </li><li> Colocar as placas cerebrais numa sequência organizada anatomicamente (direcção fronto-occipital) sobre uma superfície plana separada. Use um surfa brancoCE com uma régua impressa sobre ele para melhor contraste ao fotografar. Mostrar a duas séries de placas cerebrais de uma forma anatomicamente simétrica (direção fronto-occipital), certificando-se de que as suas superfícies coronais são visíveis para inspeção visual direto e fotografia digital (Figura 3a). Use superfícies de corte com grades milimétricos impressas em ambos os lados para localizar estruturas cerebrais, tamanhos e possíveis alterações de forma mais precisa. <ol><li> Tome-se como muitas fotos digitais como necessário em cada caso particular para documentar possíveis macro-anomalias e ter em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômica e pós-corte. Tem um assistente de pesquisa tirar fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para captar toda a superfície cortical. Tomar notas (possivelmente através de um dispositivo gravador de áudio), de qualquer aspecto anormal do cérebro, em comparação com um cérebro normal. </li></ol></li><li> Usando um bisturi afiado, dissecar manualmente blocos retangulares menores detecido cerebral para cada região cerebral estabelecido. Siga o programa de recolha região cerebral proposta descrita na Tabela 1. <ol><li> Coloque cada bloco de tecido em histocassettes marcadas separadamente. NOTA: Cada bloco de tecido cerebral tem de ser cortado para se ajustar, tanto quanto possível, o volume máximo histocassette padrão (30 x 20 x 4 mm3). </li><li> Rotular os histocassettes usando um código de identificação de para cada caso e usando identificadores neuroanatómicos específicos (não use letras aleatórias ou números para diferentes cérebros, mas sim, usar sempre o mesmo regionais nomes anatômicos ou números correspondentes, como mostra a Tabela 1). Crie códigos de-identificação, por exemplo, através da geração de números aleatórios ou semi-aleatórios para cada caso (ou seja, BRC 130, onde B fica para o Cérebro, R permanece por Resource, C permanece por Center e 130 é uma adesão progressiva ou AD160001, onde AD significa &quot;estudo da doença de Alzheimer&quot;, 16 é oano, quando a autópsia foi realizada (2016) e 0001 um número espécime adesão progressiva). NOTA: Este passo é muito útil para futuros pesquisadores; manter uma lenda, e especificar o hemisfério (L = hemisfério esquerdo, R = hemisfério direito). Use duas cores diferentes de histocassettes, estabelecendo uma cor específica para cada hemisfério. </li><li> Tome-se como muitas fotos digitais como necessário em cada caso particular para documentar possíveis macroanomalies e ter em conta possíveis considerações clínico-neuroanatômica e pós-corte. Tem um assistente de pesquisa tirar fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para captar toda a superfície cortical. Tome nota de qualquer característica incomum do cérebro em comparação com um cérebro normal. </li></ol></li><li> Tire fotos digitais (como muitos como necessário ou desejado) de todo o cérebro de corte e as histocassettes associados. </li><li> Punch (por exemplo, por Accu-punch) pequenos pedaços de tecido para a extração de DNA e análises genéticas. Usarum perfurador de 2 - 5 mm de diâmetro. NOTA: Para o seu elevado teor de material genómico, o cerebelo, é a escolha preferida; no entanto, qualquer outra região está bem. </li><li> Reimergir todos histocassettes contendo blocos de tecido cerebral no mesmo tipo de solução fixadora (por exemplo, 10% de formalina neutra tamponada) tal como anteriormente usado até que o próximo passo de processamento de tecidos. </li><li> Siga os procedimentos padrão para fixado em formol processamento de tecidos humanos 14. </li></ol> 3. Uma abordagem especial: alternada Congelados e fixa corte Symmetric Bihemispheric NOTA: O protocolo de corte cérebro bihemispheric simétrica descrito na seção 2 oferece a possibilidade de cortar lajes de tecidos de não fixadas, cérebros frescos (quando disponível) da mesma maneira sistemática e simétrica. <ol><li> Coloque todo o cérebro fresco de cabeça para baixo (de preferência sobre uma superfície de plástico tigela-como semi-esférica) para 8-10 min de -80 ° C freezer para endurecer o tecido cerebral without provocando danos bioquímicos e facilitar o corte manual. </li><li> Usando uma faca afiada, corte ambos os hemisférios em um suplente e forma consecutiva, seguindo o protocolo de corte cérebro descrito na Seção 2, mas congelar e corrigir todas as outras placas (de ambos os hemisférios e ao longo de uma direção anatômica fronto-occipital). <ol><li> Neste ponto, não tentar cortar cada região cerebral, tal como descrito na Tabela 1. Corte regiões específicas do cérebro frescos somente se necessário para RNA imediato ou extração de proteínas (ou seja, para estudos genômicos ou proteômica) 15. </li></ol></li><li> Após o corte, congelar imediatamente, etiqueta e número cada tecido fresco. Tire fotos digitais de toda a série de placas; embalar cada placa em um único saco de plástico; recolher as lajes num recipiente separado, uma cérebro-only; e armazenar o recipiente num congelador a -80 ° C dedicado. NOTA: O congelador deve ser dedicado apenas a tecido cerebral humano. Só mais tarde vai cantarle regiões do cérebro congelado ser cortado, conforme necessário para cada experiência específica. </li><li> Mergulhe cada outra laje de tecido escolhido para a fixação (formol neutro tamponado a 10% ou outro fixador) em sacos separados contendo um volume suficiente de fixador (3/1 volume de proporção / tecido bloco fixador). Rotular cada saco por consecutivamente numerando-os a seguir uma sequência fronto-occipital. Selar cada saco, tirar fotos digitais e armazená-los em um recipiente de plástico. </li><li> Abrir os sacos contendo o agente de fixao depois de 2 semanas de fixação do tecido e cortar cada região cerebral, tal como descrito na Tabela 1. </li></ol> 4. Histostain e imuno-histoquímica NOTA: O conjunto de regiões cerebrais corte com base no esquema proposto (Tabela 1) são suficientes para satisfazer os critérios patológicos a maioria, se não todos, baseados em consenso, actualmente fixado para 16 AD, PD 17, Demência de Corpos de Lewy (DCL) 18, A demência frontotemporal (DFT / DNM) <sup&gt; 19, Progressive suprabulbares Cerebral (PSP) 20, Atrofia de Múltiplos Sistemas (MSA) 21, crônica traumática Encefalopatia (CTE) 22, etc. <ol><li> Para cada região do cérebro e para ambos os hemisférios, execute o seguinte conjunto mínimo de histostains: Hematoxilina e Eosina (H &amp; E), violeta cresil (CV; se os estudos morfométricas quantitativas estão previstas, por exemplo), e coloração de prata (se análises &quot;exploratórias&quot; são necessário). </li><li> Para cada região do cérebro e para ambos os hemisférios, execute o seguinte conjunto mínimo de protocolos de imunohistoquímica: p amilóide (β A), fosforilada-Tau (pTau), fosforilada α-sinucleína (pα-sin), e fosforilada-TDP43 (pTDP43) , tal como descrito 14. NOTA: O número total de cortes de tecidos, a fim de avaliar cada cérebro após este protocolo é de 46 (se todas as regiões cerebrais de ambos os hemisférios estão disponíveis). </li></ol>

Os autores não têm nada para revelar.

Este método de corte cerebral pode ser adaptada às necessidades específicas de cada laboratório neuropatologia (por exemplo, por redução do número de regiões cerebrais para avaliar, para cada hemisfério), mantendo o procedimento de corte simétricas bihemispheric como uma das suas características principais. Este protocolo proposto pode ser utilizado para procedimentos de rotina (centros neuropatológicos orientados para a pesquisa) ou apenas quando necessárias (estudos orientados clinicamente específicos). Ele pode ser u...

Neuropathologists ter o privilégio científica, honra intelectual, e a obrigação de diagnóstico para avaliar os cérebros humanos. Por muitas décadas, descrições clínicas detalhadas de doenças cerebrais e grandes esforços para individualizar suas possíveis correlações neuro-histológicos em cérebros post-mortem humanos têm sido realizadas. Historicamente, esses esforços representou a modalidade mais produtiva através da qual as ciências médicas, e neurologia em particular, avançou na era moderna. Graças a neuropathologists anteriores eminentes e sua dedicação, determinação, bolsa de estudos, e espantosa capacidade de discriminar entre tecidos cerebrais normais e anormais (muitas vezes utilizando ferramentas muito rudimentares), agora podemos investigar e doenças-alvo, tais como a doença de Alzheimer-Perusini (injustamente chamados apenas a doença de Alzheimer doença; DPA / AD) 1, doença de Parkinson (DP) de 2, doença de Creutzfeldt-Jakob (DCJ) 3, doença de Lou Gehrig-/ Esclerose lateral SCLEROSIs (ALS) 4, e de Guam, doença 5 para mencionar alguns. Técnicas avançadas de neuroimagem, como a alta definição tomografia computadorizada (ou seja, tomografia computadorizada espiral multisection; angio-TC), ressonância magnética funcional e morfológica (ou seja, fMRI, difusão-MRI, tractography-MRI, etc.), Positron Emission Tomography (PET), imagiologia à base de ultra-som, e outros, certamente modificado a nossa abordagem geral sobre como diagnosticar e curar pacientes neurológicos e psiquiátricos. No entanto, apesar de as técnicas de neuroimagiologia é capaz de visualizar o cérebro de uma pessoa quando vivo, elas não oferecem a oportunidade, no momento em que ocorre, para analisar directamente as estruturas celulares e subcelulares altamente complexas de células, tais como os neurónios; ou para visualizar, marca, e quantificar tipos específicos de lesões intracelulares; ou para indicar com precisão sua localização neuroanatômica ou sub-regional na circuital e sub-níveis anatômicos circuital. Por exemplo, técnicas de neuroimagiologia não pode identificar ou localizar o corpo de Lewy (LB) em neurónios pigmentados da substância negra (SN), uma característica patológica comum associado com PD, ou emaranhados neurofibrilares (NFT) no córtex entorrinal, uma característica clássica da doença de Alzheimer e outras patologias cerebrais. investigações neuropatológicos combinadas com microscopia digital avançada ainda são insubstituíveis para as correlações clinicopatológicas detalhados e, portanto, para diagnóstico definitivo. Devido às propriedades peculiares anátomo-funcional do cérebro humano, e especialmente a sua localização anatómica (isto é, dentro do crânio, um sistema de protecção natural que não permite o exame directo do seu conteúdo), a introdução in vivo de técnicas de neuroimagiologia os clínicos e investigadores extraordinariamente ajudou a encontrar respostas iniciais a alguns dos mistérios deste tecido complexo. No entanto, não há nenhuma clínica ou neuroimagimetodologia ng que pode substituir a oportunidade única de analisar diretamente o tecido cerebral durante uma autópsia. Somente a coleção organizada, preservação e categorização dos cérebros humanos pode permitir que investigações diretas e sistemáticas de células neuronais e não neuronais, os seus constituintes subcelulares, intracelular e lesões patológicas extracelulares, e qualquer tipo de anormalidade dentro do cérebro para confirmar, modificar ou redefinir diagnósticos clínicos e descobrir novas correlações clínico-patológicas. Uma das limitações aparentes diz respeito à avaliação do cérebro na autópsia tem sido o facto de que este processo é uma metodologia em corte transversal. Haverá sempre um atraso entre um processo contínuo neuropatológico (clinicamente manifesta ou não) e a chance, se houver, para defini-lo no nível neuro-histológicos. Isto é principalmente devido à incapacidade do cérebro humano para se regenerar. No momento não é possível obter tecido cerebral in vivo sem criar pedanos rmanent. Por conseguinte, não é possível avaliar longitudinalmente e neuropatologicamente o mesmo cérebro / pessoa. No entanto, procedimentos bancários cérebro padronizados e uma maior sensibilização para a doação do cérebro entre o público geral poderia contribuir grandemente para a resolução de problemas de tempo de cérebro-autópsia, aumentando de forma consistente o número de casos de recolher e analisar. Desta forma, os números mais adequados de cérebro postmortem poderia ser obtida para definir padrões constantes de origem patológica e progressão para cada tipo específico de lesão cerebral associada com cada doença cérebro humano. Isto exigiria doação e recolha de tantos quanto possível cérebros de pacientes afectados por qualquer desordem neuropsiquiátrica, bem como a partir de indivíduos saudáveis ​​de controlo em todas as idades. Um método possível poderia estar a recolher tantos cérebros post-mortem possível de centros médicos gerais e especializados como uma rotina padrão. A necessidade de doações cerebrais foi expressa recentementepor aqueles que estudam a demência e envelhecimento normal 6. A mesma necessidade deve ser expresso pelo campo neuropsiquiátricos como um todo. Para o acima referido e por outras razões, uma actualização dos procedimentos de corte do cérebro em curso é necessário. Além disso, o cérebro procedimentos de corte deve ser universalmente padronizado entre os diferentes centros de pesquisa neuropatologia em todo o mundo, tendo também em conta a possibilidade de empregar técnicas biotecnológicas atuais e futuras para melhor investigar e, esperançosamente, para compreender de forma definitiva, as causas e mecanismos das doenças do cérebro em humanos. Aqui, principalmente para fins de investigação, é descrita uma metodologia para simétrica cerebral postmortem de corte em seres humanos. Este procedimento propõe recolher regiões mais cerebral do que normalmente é feito e de ambos os hemisférios cerebrais e cerebelo. Um procedimento de corte cerebral bi-hemisférica simétrica vai caber muito melhor com nosso conhecimento atual do ser humanoneuroanatomia, neuroquímica e neurofisiologia. Este método também permite a possibilidade de analisar neuropathologically as características únicas do cérebro humano, tais como a especialização hemisférica e lateralização que estão associados com funções cognitivas e não-cognitivas superiores tipicamente ou exclusivamente presente em nossa espécie. Se existem relações patogênicos específicos entre hemisférica especialização / lateralização e tipos específicos de lesões cerebrais, ou se um evento patogênico neuropsiquiátrica peculiar é, inicialmente, predominantemente, ou exclusivamente associada a um hemisfério específico e função não é conhecido atualmente. Ao descrever este procedimento de corte cérebro simétrico, pretendemos propor um método atualizada de dissecção cérebro humano que poderia ajudar a entender melhor as condições normais e patológicos em um tecido altamente especializado, o cérebro. Este método também leva em consideração os aspectos hemisféricos morfo-funcionais que só existem em seres humanos.

<table><tbody><tr><td>Cópia do consentimento informado assinado permitindo autópsia e doação de cérebro para uso em pesquisa.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>História clínica detalhada do sujeito, que deve incluir uma descrição detalhada de quaisquer sintomas e sinais neurológicos e psiquiátricos.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gravações de vídeo médicas ou não médicas, quando disponíveis (especialmente úteis no campo dos distúrbios do movimento). Parente mais próximo s consentimento necessário.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Neuroimagem, neurofisiologia, neuropsiquiátrica e escalas de avaliação ou clínico-métricas.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dados genéticos e de história familiar. Revisão de relatórios genéticos, se doenças neurogenéticas foram diagnosticadas.</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Recipiente de histologia</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64233-24</td><td></td></tr><tr><td>de histologia</td><td>VWR</td><td>18000-142 (laranja)</td><td></td></tr><tr><td>de histologia</td><td>VWR</td><td>18000-132 (navy)</td><td></td></tr><tr><td>Cabos de faca e lâminas descartáveis</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>62560-04</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas longas</td><td>MICROSCOPIA ELETRÓNICA SCIENCES</td><td>62561-20</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de Faca Descartáveis</td><td>MICROSCOPIA ELETRÔNICA SCIENCES</td><td>72040-08</td><td></td></tr><tr><td>Lâminas de bisturi</td><td>MICROSCOPIA ELETRÔNICA SCIENCES</td><td>72049-22</td><td></td></tr><tr><td>Accu-Punch 2 mm</td><td>MICROSCOPIA ELETRÔNICA SCIENCES</td><td>69038-02;</td><td></td></tr><tr><td>Recipientes de Poliestireno - Estéril</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>64240-12</td><td></td></tr><tr><td>Placa de Dissecção</td><td>ELECTRON MICROSCOPY SCIENCES</td><td>63307-30</td><td></td></tr><tr><td>Solução de formalina, tamponada neutra, 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128 SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin Solution, Gill No. 2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>GHS280&nbsp; SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y solução, aquosa</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT1102128&nbsp; SIGMA</td><td></td></tr><tr><td>anti-beta-amilóide</td><td>Covance, Princeton, NJ</td><td>SIG-39220</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-tau</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>MN1020</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-alfa-sinucleína</td><td>Abcam</td><td>ab27766</td><td>1:500</td></tr><tr><td>anti-fosfo-TDP43</td><td>Cosmo Bio Co.</td><td>TIP-PTD-P02</td><td>1:2000</td></tr><tr><td>Câmera Digital</td><td>Qualquer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Máquina de Selagem por Impulso de Cabeça</td><td>Grainger</td><td>5ZZ35</td><td></td></tr></tbody></table>

symmetric bihemispheric postmortem cérebro de corte para o estudo de saúde e condições patológicas cerebral em humanos

Symmetric Bihemispheric Postmortem Brain Cutting to Study Healthy and Pathological Brain Conditions in Humans

Neuropathologists, às vezes, se sentem intimidados pela quantidade de conhecimento necessário para gerar diagnósticos definitivos para os fenômenos neuropsiquiátricos complexas descritas nesses pacientes para os quais foi pedida uma autópsia cerebral. Embora os avanços das ciências biomédicas e de neuroimagem revolucionaram o campo neuropsiquiátrica, também têm gerado a idéia enganosa de que autópsias cerebrais têm apenas um valor de confirmação. Esta falsa idéia criada uma redução drástica das taxas de autópsia e, consequentemente, uma possibilidade reduzida de realizar investigações neuropatológicos mais detalhadas e extensas, que são necessários para compreender vários aspectos normais e patológicos ainda desconhecidas do cérebro humano. O método inferencial tradicional de correlação entre fenômenos neuropsiquiátricos observados e correspondente localização / caracterização de suas possíveis correlações neuro-histológicos continua a ter um valor inegável. No contexto da neuropsychidoenças atric, o método clínico-patológico tradicional ainda é a melhor metodologia possível (e muitas vezes o único disponível) para vincular recursos neuropsiquiátricos únicas para os seus substratos neuropatológicos correspondentes, uma vez que se baseia especificamente sobre a avaliação física direta de tecidos cerebrais. A avaliação dos cérebros post-mortem é baseado no cérebro procedimentos que variam entre os diferentes centros de neuropatologia corte. estacas do cérebro são realizadas de forma relativamente extensa e sistemática com base nas diversas contingências clínicos e acadêmicos presentes em cada instituição. A metodologia de corte cerebral bi-hemisférica anatomicamente mais inclusiva e simétrica deve pelo menos ser usada para fins de investigação na neuropatologia humana para investigar de forma coerente, em profundidade, as condições normais e patológicas com as peculiaridades do cérebro humano (ou seja, a especialização hemisférica e lateralização para específica funções). Um tal processo proporcionaria uma Colle mais abrangentecção de cérebros neurologicamente bem caracterizados disponíveis para técnicas biotecnológicas e de neuroimagem atuais e futuras. Nós descrevemos um procedimento de corte cerebral bi-hemisférica simétrica para a investigação das diferenças hemisféricas de patologias do cérebro humano e para uso com corrente, bem como técnicas biomolecular / neuroimagem futuras.

Protocolo Comprimento O tempo gasto para um único procedimento de corte simétrica bihemispheric fixo cérebro é estimado em 1 h (excluindo o tempo gasto a criação de mesa de dissecação, ferramentas e cortar superfícies; rotulagem;. Etc). O tempo requerido para um único bi-alternada simétrica hemisférica cerebral congelado e fixado procedimento de corte é estimada em 2 h. Pode demorar pelo menos entre 4-6 semanas para obte...

procedimentos de corte do cérebro organizados são necessários para correlacionar fenômenos neuropsiquiátricos específicos com diagnósticos neuropatológicos definitivas. estacas cerebrais são realizados de forma diferente com base em diversas contingências clínico-acadêmico. Este protocolo descreve um procedimento de corte cérebro bihemispheric simétrica para investigar diferenças hemisféricas de patologias do cérebro humano e maximizar as técnicas biomolecular / neuroimagem atuais e futuras.

Symmetric Bihemispheric Postmortem Cérebro de corte para o Estudo de Saúde e Condições Patológicas cerebral em humanos

Neuropathologists, at times, feel intimidated by the amount of knowledge needed to generate definitive diagnoses for complex neuropsychiatric phenomena ...

O objetivo geral deste procedimento é coletar e analisar sistematicamente uma série constante de regiões cerebrais dissecadas simetricamente a partir de ambos os hemisférios do cérebro humano, com o fim de avaliar a gravidade, a estadiamento clínico-patológico e a distribuição hemisférica de diversas doenças cerebrais. Este método pode ajudar a responder questões fundamentais na área de neuropatologia, fornecendo uma coleta sistematicamente organizada de dados neuropatológicos qualitativos e quantitativos para correlações detalhadas entre aspectos clínico-patológicos e de imagem-patologia. A principal vantagem desta técnica consiste em gerar dados relevantes relacionados aos processos patológicos em si, bem como ao aspecto histofuncional especializado de cada hemisfério cerebral.Após fixar o tecido cerebral humano pós-mortem de acordo com o protocolo descrito, posicione o cérebro sobre uma superfície plana com os polos frontais voltados para longe do pesquisador. Oriente o cérebro de modo a permitir a visualização completa e clara de todos os giros e sulcos corticais de todo o cérebro. Examine o tecido em busca de anomalias meníngeas, assimetrias hemisféricas macroscópicas, aderências macroscópicas do tecido, malformações congênitas, anormalidades vasculares ou quaisquer outras anormalidades ou apresentações incomuns da superfície cerebral.Com os polos frontais orientados para longe do pesquisador e as faces superficiais dos hemisférios voltadas para o pesquisador, tire quantas imagens digitais forem necessárias para documentar possíveis anomalias macroscópicas e considerar possíveis aspectos clínicos, neurológicos, anatômicos e pós-corte. Tire imagens digitais perpendicularmente ao cérebro para capturar toda a superfície cortical. Em seguida, utilizando tinta ou agulhas coloridas, marque os giros corticais pré e pós-central.Em seguida, mantendo os polos frontais ainda voltados para longe, gire o cérebro 180 graus e, então, inspecione cuidadosamente a base do cérebro, prestando especial atenção aos sistemas cerebrovasculares e aos nervos cranianos nos níveis de saída e entrada do tronco encefálico. Manipule os bulbos e tratos olfatórios com especial cuidado para evitar lacerações teciduais devido à sua extrema fragilidade. Tire fotografias digitais perpendicularmente ao cérebro para capturar por completo as superfícies corticais e do tronco encefálico.Virando a base do cérebro e utilizando um bisturi, corte transversalmente o tronco encefálico na porção superior da ponte, o mais próximo possível da base do cérebro. Examine cuidadosamente a substância negra em busca de palidez e inspecione outras estruturas vizinhas. Utilizando um dispositivo de gravação de áudio, anote qualquer aparência anormal do cérebro em comparação com um cérebro normal.Aqui, o bulbo e o trato olfativo dos hemisférios esquerdo e depois direito estão sendo dissecados. Vire o cérebro novamente e, usando uma faca afiada, siga uma direção fronto-occipital para separar os dois hemisférios, cortando o corpo caloso centralmente através da fissura longitudinal medial. Inspecione cada lado de cada hemisfério em busca de possíveis anomalias.Depois de tirar quantas imagens forem necessárias, inclusive perpendicularmente ao cérebro para capturar toda a superfície cortical, posicione os dois hemisférios com suas faces mediais apoiadas planamente, com os lobos frontais voltados para longe do pesquisador e com seus centros em contato. Usando uma faca afiada, corte manualmente através de ambos os hemisférios cerebrais, começando nos polos frontais e avançando em direção aos polos occipitais ao longo de todo o comprimento dos hemisférios, obtendo duas séries de fatias de tecido cerebral com um centímetro de espessura. Posicione as fatias cerebrais em sequência anatomicamente organizada e simétrica sobre uma superfície plana branca que contenha uma régua impressa, para fins de fotografia.Certifique-se de que as superfícies coronais do bloco estejam visíveis para inspeção visual direta e fotografia digital. Utilize superfícies de corte com grades milimétricas impressas em ambos os lados para localizar estruturas cerebrais, tamanhos e possíveis anormalidades de maneira mais precisa. Com as superfícies coronais visíveis, tire fotografias digitais perpendicularmente para capturar toda a superfície cortical.Anote qualquer aspecto incomum do cérebro em comparação com um cérebro normal. Em seguida, usando um bisturi afiado, dissecar manualmente pequenos blocos retangulares de tecido cerebral para cada região cerebral estabelecida. Siga o esquema proposto de coleta de regiões cerebrais descrito nesta tabela.Crie os códigos identificadores para rotular as caixas de histologia gerando números aleatórios ou parcialmente aleatórios para cada caso, em que AD representa o Estudo da Doença de Alzheimer, 16 representa o ano em que a autópsia foi realizada e 0001 é um número de espécime de acesso progressivo. Coloque cada bloco de tecido em caixas de histologia separadas. Tire tantas fotos digitais quanto descrito anteriormente do cérebro cortado inteiro e das caixas de histologia associadas.Após obter um conjunto completo de imagens, retire fragmentos de tecido de dois a cinco milímetros para extração de DNA e análise genética. Por fim, imerja todas as cápsulas histológicas contendo blocos de tecido cerebral no mesmo tipo de solução fixadora previamente utilizada e processe o tecido de acordo com o protocolo descrito no texto. Esta tabela descreve alguns dados preliminares semi-quantitativos obtidos mediante um procedimento de corte cerebral biemisférico simétrico realizado em uma série de cérebros humanos coletados no banco de cérebros.Dados preliminares mostram que a maioria dos cérebros controle de indivíduos mais velhos apresentava na verdade placas neuríticas de beta-A e emaranhados neurofibrilares de tau positivos, e que os níveis de placas neuríticas de beta-A insolúveis eram mais elevados no córtex entorrinal esquerdo e no hipocampo em comparação com as mesmas regiões cerebrais do lado direito. Uma vez dominada, esta técnica pode ser concluída em uma hora para cérebros fixados e em duas horas para cérebros frescos, se realizada corretamente. Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de seguir o esquema de corte proposto e coletar cada região cerebral de ambos os hemisférios com base em um conhecimento preciso da anatomia humana.Após seguir este procedimento, outros métodos, como extração de DNA, RNA ou proteínas, podem ser realizados para responder perguntas adicionais, como quais são os níveis de ativação de um gene específico em uma região cerebral específica em um hemisfério específico em uma doença cerebral específica. Com cada difusão, esta técnica abrirá caminho para pesquisadores na área de neuropatologia, patologia clínica e correlação de patologia por imagem explorarem os aspectos patológicos relacionados aos hemisférios em diversas doenças neuropsiquiátricas. Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como coletar regiões anatômicas específicas de ambos os hemisférios do cérebro humano para avaliar a gravidade da doença, a fase patológica da doença e a distribuição hemisférica de diferentes processos neuropatológicos.Não se esqueça de que trabalhar com o cérebro humano significa lidar com a história de uma pessoa, com circuitos neuroanatômicos complexos e possivelmente com diferentes doenças, e que lâminas, escalpelos e formalina devem ser manipulados com extrema precaução.

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Este vídeo demonstra uma técnica para preparar culturas de fatias flutuantes a partir do cérebro humano adulto. Fatias finas são geradas a partir de uma seção do cérebro usando um vibratome. Essas fatias são então suspensas em um meio de cultura suplementado com fatores de crescimento para manter a viabilidade do tecido.

Preparando culturas de fatias flutuantes a partir de um cérebro humano adulto

O vídeo demonstra um procedimento passo a passo para dissecar simetricamente um cérebro humano post-mortem fixo, preparando blocos de tecido menores para análise posterior.

Seccionamento bi-hemisférico simétrico do cérebro humano post-mortem

Culturas neuronais embrionárias primárias dissociadas do hipocampo são úteis para investigar os mecanismos de sinalização envolvidos na morte dos neurônios. A sexagem dos embriões antes do isolamento e dissociação do hipocampo permite a preparação de culturas masculinas e femininas separadas, o que permite ao pesquisador identificar e investigar a sinalização celular específica do sexo.

Culturas neuronais estratificadas por sexo para estudar vias de morte celular isquêmica

Usando exames de ressonância magnética (humana), software de imagem 3D e análise imuno-histológica, documentamos alterações nos ventrículos laterais do cérebro. O mapeamento longitudinal 3D das alterações do volume do ventrículo lateral e a caracterização das alterações celulares periventriculares que ocorrem no cérebro humano devido ao envelhecimento ou doença são então modelados em camundongos.

Modelagem 3D do lateral ventrículos e histológica Caracterização do Tecido Periventricular em humanos e mouse

Aqui apresentamos um protocolo para determinar o número mínimo de imagens que precisavam ser registradas e calculadas para resolver estruturas subcorticais e testar se as camadas individuais do LGN poderiam ser resolvidas na ausência de ruído fisiológico.

De alta resolução de ressonância magnética estrutural do Subcórtex Humano<I&gt; In Vivo</I&gt; E Postmortem

Nós descrevemos o uso do laser microdissection de captura para obter amostras de populações de células distintas de regiões diferentes do cérebro para análise genética e microRNA. Esta técnica permite o estudo dos efeitos diferenciais de traumatismo crânio-encefálico em regiões específicas do cérebro de ratos.

Estereotáxica guiada por Atlas Laser Microdissection de captura de regiões do cérebro afetadas por lesão traumática

Este documento demonstra o uso efetivo de um método de dissecação de fibra para revelar os panfletos superficial matéria branca e estruturas periventriculares do cérebro humano, no espaço tridimensional, para ajudar à compreensão do aluno de morfologia ventricular.

Explorando o espaço profundo - descobrindo a anatomia das estruturas periventriculares para revelar os ventrículos laterais do cérebro humano

Este artigo descreve uma metodologia detalhada para obter secções tangenciais achatadas de mamíferos córtices e Visualizar módulos corticais usando histochemical e métodos de imuno-histoquímica.

Visualização de módulos corticais em córtices mamíferos achatadas

A esclerose múltipla é uma doença desmielinante inflamatória sem cura. A análise do tecido cerebral fornece indícios importantes para a compreensão da patogênese da doença. Aqui nós discutimos a metodologia e a análise a jusante do tecido do cérebro do MS coletado através de um programa rápido original da autópsia na operação na clínica de Cleveland.

Programa de autópsia abrangente para indivíduos com esclerose múltipla

Este protocolo descreve um método para rastrear trajetórias individuais de envelhecimento cerebral através de um programa de doação cerebral e caracterização adequada de cérebros. Doadores cerebrais estão envolvidos em um estudo longitudinal de longo prazo, incluindo avaliações multidimensionais em série. O protocolo contém uma descrição detalhada do processamento cerebral e uma metodologia de diagnóstico precisa.

Protocolo do Banco Cerebral Abbiategrasso para coleta, processamento e caracterização de cérebros envelhecidos

Apresentamos um protocolo prático, passo a passo, rápido para remoção do cérebro do rato e dissecção de regiões discretas de tecido cerebral fresco. A obtenção de regiões cerebrais para análise molecular tornou-se rotina em muitos laboratórios de neurociência. Essas regiões cerebrais são imediatamente congeladas para obter dados transcriômicos de alta qualidade para análise de nível de sistema.

Microdisseção do Cérebro de Camundongos em Regiões Funcional e Anatomicamente Diferentes

Aprenda a técnica de secção simétrica bihemisférica do cérebro post-mortem para investigar distribuição hemisférica de patologias cerebrais em humanos. Este método organiza dados neuropatológicos qualitativos e quantitativos.

Symmetric Bihemispheric Postmortem Cérebro de corte para o Estudo de Saúde e Condições Patológicas cerebral em humanos

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