Journal
/
Bioengineering
/
Ett protokoll för Multiple Gene Knockout i Mouse Små Intestinala Organoider Använda en CRISPR-concatemer
JoVE Journal
Bioengineering
This content is Free Access.
JoVE Journal Bioengineering
A Protocol for Multiple Gene Knockout in Mouse Small Intestinal Organoids Using a CRISPR-concatemer
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Ett protokoll för Multiple Gene Knockout i Mouse Små Intestinala Organoider Använda en CRISPR-concatemer

DOI:
10.3791/55916-v

•

11:53 min

•

July 12, 2017

•

, , , , ,
1Wellcome Trust – Medical Research Council Stem Cell Institute,University of Cambridge, 2Department of Genetics,University of Cambridge, 3Department of Pathology,Yonsei University College of Medicine

Chapters

  • 00:05Title
  • 00:50Cloning of gRNAs into the CRISPER-concatemer Vector
  • 03:40Assessing Success of Cloning by Restriction Digest
  • 05:28Preparing Intestinal Organoids for Electroporation
  • 08:08Electroporation
  • 10:36Results: Successful Generation of CRISPER-concatemers and Electroporation of Intestinal Organoids
  • 11:24Conlcusion

Summary

Automatic Translation

Automatic Translation

Detta protokoll beskriver stegen för kloning av flera enkla styr-RNA i en guide RNA-concatemervektor, som är särskilt användbar för att skapa multi-gen-knockouts med CRISPR / Cas9-teknik. Genereringen av dubbla knockouts i tarmorganoider visas som en möjlig tillämpning av denna metod.

Tags

Keywords: CRISPR-concatemerMultiple Gene KnockoutMouse Small Intestinal OrganoidsCRISPRGuide RNAsElectroporationSimultaneous KnockoutLoss Of Function StudiesParallel CompensationCloningBbs1 Shuffling ReactionThree GRNA ConcatemerFour GRNA Concatemer

Article

Embed

ADD TO PLAYLIST

Usage Statistics

Related Videos

check_url/55916?article_type=v

Tillverkning av elektrokemiska-DNA biosensorer för att Reagentless Upptäckt av nukleinsyror, proteiner och små molekyler
check_url/55916?article_type=v

Att skapa två-dimensionell Mönstrad substrat för Protein och Cell inneslutning
check_url/55916?article_type=v

En mikroflödessystem enheten för att studera flera olika stammar
check_url/55916?article_type=v

En decellularization Metod för produktion av en naturlig Acellular Intestinal Matrix
check_url/55916?article_type=v

Realtidsövervakning av intracellulär Bile Acid Dynamics hjälp av en genetiskt kodad FRET-baserade Bile Acid Sensor
check_url/55916?article_type=v

Ett protokoll för Decellularizing mus Cochleae för innerörat Tissue Engineering
check_url/55916?article_type=v

Visuell identifiering av flera Nucleic syror i en kapillär matris
check_url/55916?article_type=v

Ompressning gentranskription genom att omdirigera cellulära maskineriet med kemiska epigenetiska modifierare
check_url/55916?article_type=v

Genomföra flera Imaging lägen med en fluorescens Mikroskop
check_url/55916?article_type=v

Gen uttryck analys av Endothelial celler utsätts för Shear Stress med hjälp av flera parallella-plattan flöde Chambers

Read Article