October 9th, 2017
פרוטוקול של יישום neuroprotective לחץ אטמוספירי במינון נמוך טיפול פלזמה על גלוקוז הנוצרות על-ידי מניעת פציעות SH-SY5Y.
המטרה הכוללת של שיטת טיפול זו היא לספק פרוטוקול טיפול מפורט במבחנה ליישומים נוירו-פרוטקטיביים של סילוני פלזמה בלחץ אטמוספרי של הליום על פגיעה הנגרמת על ידי חסך גלוקוז בתאי SH-SY5Y. שיטה זו יכולה לעזור לשאלות המפתח בתחום יישומי הפלזמה כגון רפואת פלזמה. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא שהיא פועלת כטיפול בפלזמה נמוכה יחסית לשיטות קודמות לטיפולים עקביים.
וכל אחד מאיתנו יכול למנוע פציעות מוגזמות הנגרמות על ידי פלזמה. ההשלכות של טכניקה זו משתרעות על טיפול במקרי מוח איסכמיים מכיוון שאספקת גלוקוז לא מספקת היא מאפיין שכיח של מחלה זו. למרות ששיטה זו יכולה לספק תובנה לגבי יישומים רפואיים חדשים של פלזמה, ניתן להשתמש בה גם במערכות אחרות כגון מערכת הלב וכלי הדם.
בדרך כלל אנשים חדשים בשיטה זו עשויים להיאבק מכיוון שיש להתאים מחדש את פרמטרי הטיפול למכשירי פלזמה שונים. ראשית חבר מגבר מתח גבוה למחולל אותות פונקציה המשמש כספק כוח לאספקת אות AC. כדי להקליט את צורות הגל של המתח המופעל לאלקטרודה במתח גבוה, חבר קצה אחד של בדיקת המתח הגבוה לאוסילוסקופ דיגיטלי וחבר את הקצה השני לאספקת החשמל.
העבירו ללא הרף הליום מעל צינור הקוורץ של מכשיר סילון הפלזמה בלחץ אטמוספרי ושלטו בקצב זרימת הגז בקצב יציב של 1.4 ליטר סטנדרטי לדקה. לאחר מכן, הפעל את האוסילוסקופ, מחולל האותות ומגבר המתח הגבוה. סובב את כפתור כוונון התדר לחמישה קילו-הרץ.
לאחר מכן הגדל בהדרגה את המתח לערך שיא לשיא של שישה קילו-וולט. לאחר גידול קו תאים אנושי שמקורו בנוירובלסטומה SH-SY5Y, שאפו בזהירות את אמצעי התא כאשר התאים מגיעים למפגש של 85%. הוסף לתאים מיליליטר אחד של 0.25% טריפסין המכיל 0.1% EDTA.
לאחר דגירה של 15 שניות בטמפרטורת החדר יש לשאוב בזהירות את הטריפסין ולהוסיף שני מיליליטר RPMI 1640 המכיל 15% FBS לנטרול. פיפטה בעדינות למעלה ולמטה ושוטפים את החלק התחתון של כל באר עד לניתוק מוחלט של השכבה החד-שכבתית SH-SY5Y. לאחר מכן, ספרו את התאים בעזרת המוציטומטר והתאימו את ריכוז התאים על ידי הוספת מדיום RPMI 1640 המכיל 15% FBS.
לאחר מכן העבירו מאה מיקרוליטר של תרחיף תאים לכל באר של צלחת 96 בארות. התאם את המרחק בין הזרבובית של צינור הקוורץ לפלטפורמה שבה תוצב צלחת 96 הבאר לשלושה סנטימטרים כדי להבטיח שהקרן תוכל לגעת במשטח מדיום התרבות. לפני הטיפול, שנה את מדיום התרבית בכל באר ל-RPMI 1640 ללא מדיום גלוקוז.
כעת, הנח את הצלחת מתחת לזרבובית סילון הפלזמה בלחץ האטמוספרי. לאחר מכן, טפל בתאים בבארות נפרדות למשך אפס, אחת, שתיים, ארבע, שמונה ו-12 שניות. לאחר הטיפול יש לדגור על התאים למשך שעה בחממת תאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס.
לאחר הדגירה, הוסף עשרה מיקרוליטרים של ערכת ספירת תאים שמונה תמיסה לכל באר. לאחר מכן דגרו על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך ארבע שעות. לבסוף, מדוד את הספיגה ב-450 ננומטר עם קורא מיקרו-פלטות.
מחסור בגלוקוז הפחית את הכדאיות של תאי SH-SY5Y ל-44.1 פלוס מינוס 2.6 אחוזים בהשוואה לקבוצת הביקורת. הטיפול בסילון פלזמה בלחץ אטמוספרי הגדיל משמעותית את כדאיות התאים באופן תלוי מינון במינון אופטימלי של שמונה שניות לבאר. וכדאיות התא הגיעה ל-62.27 פלוס מינוס 3.1% לזרימת הגז לא הייתה השפעה על הפגיעה בתאים הנגרמת על ידי מחסור בגלוקוז.
לאחר שליטה בטכניקה זו ניתן לבצע תוך 30 שעות אם היא מבוצעת כראוי. בעת ניסיון הליך זה, חשוב לזכור לעיין בכל גיליונות נתוני בטיחות החומרים לפני השימוש. לאחר פיתוחה, טכנולוגיה זו פורשת דרך לחוקרים בתחום רפואת הפלזמה לחקור יישומים חדשים על סוגים אחרים של פגיעות מוח וליצור מודלים חדשים יותר של פגיעות.
לאחר צפייה בסרטון זה, אתה אמור להבין היטב כיצד להשתמש בסילון פלזמה בלחץ אטמוספרי ליישומים מעשיים חדשים. אל תשכח שעבודה עם כרך גבוהtagמגבר הספק עלולה להיות מסוכנת ביותר ותמיד יש לנקוט באמצעי זהירות כגון אי נגיעה בקווי המתח הגבוה בעת ביצוע הליך זה.
View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos
מאמר זה מציג פרוטוקול ליישום נוירופרוטקטיבי של טיפול בפלזמה בלחץ אטמוספרי במינונים נמוכים על פציעות הנגרמות על ידי חוסר גלוקוז בתאי SH-SY5Y. השיטה שואפת להתייחס לשאלות מרכזיות ברפואה בפלזמה ומציעה אפשרות טיפול בעלות נמוכה יחסית.