זיהוי של 3-Nitrotyrosine סביבות אטמוספרי דרך ביצועים גבוהים מערכת גלאי אלקטרוכימי-כרומטוגרפיה נוזלית

שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלת מפתח במחקר סביבתי על ניטורפירין ו 3-ניטרוטרירוסין. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא כי היא שיטה ייחודית רגישה מאוד לגילוי 3-nitrotyrosine על מסנני מדגם אוויר. כדי לאסוף חלקיקים מושעים הכולל או חומר חלקיקי של פחות משבעה מיקרון בגודל, תחילה לשקול קלסר 3 מסנן קוורץ ולאבטח אותו על סמפלר אוויר בנפח גבוה. לכסות את המסנן עם בורר גודל חלקיקים כדי לאסוף PM7 או להשאיר את המסנן חשוף כדי לאסוף חלקיקים מושעים הכולל. הפעל את סמפלר האוויר ב 1000 ליטר לדקה ברציפות במשך שבעה ימים. טען את המסננים מראש ליחידת סיווג גודל והתקן את יחידת סיווג הגודל ומסנן גיבוי על סמפלר האוויר בנפח נמוך. הפעל את סמפלר האוויר ב 116 המלטה לדקה ברציפות במשך שבעה ימים כדי לאסוף PM2.5 על מסנן הגיבוי. בסיום הדגימה, רשום את נפח הזרימה הכולל. לשקול את המסנן ולחשב את המשקל של החלקיקים שנאספו. לאטום את המסנן בשקית ניילון ולאחסן אותו ב 30 מעלות צלזיוס.הבא להכין 500 microliters של קוקטייל פרוטאז 6X לא ספציפי חיץ אצטט ולמקם אותו קרום דלסיס עם ניתוק משקל מולקולרי של 5000 דלתונים. לטבול את הממברנה המלאה ב 1 L של חיץ אצטט ומערבבים אותו ב 4 מעלות צלזיוס במשך 24 עד 36 שעות, החלפת החיץ כל 12 שעות כדי להסיר indogenous 3-Nitrotyrosine ו Nitrite.Then למדוד את ריכוז החלבון בתווית פרוטאז דיאליזה עם אסאי חלבון חומצה ביצינצ'ונית. לאחר מכן להסיר מסנן מהמקפיא ולאפשר לו להתחמם לטמפרטורת החדר תוך עדיין אטום בשקית. לאחר מכן אגרוף עד חמישה 6 מילימטרים רחב עיגולים מן החומר החלקיקים מכוסה באזור של המסנן, ולמקום את העיגולים בצינור מיקרו צנטריפוגה 1.5 מיליליטר. הכן 300 מיקרוליטרים של מאגר אצטט המכיל 50