Tecniche riproduttive per il monitoraggio e il controllo ovarico negli anfibi

Questa tecnica di ovariectomia utilizza una procedura chirurgica recuperabile per ottenere ovociti anfibi per la nostra ricerca medica o un'altra applicazione per superare la condizione patologica delle uova trattenute. Non richiede l'eutanasia per ottenere ovociti anfibi a scopo di ricerca. Infatti, dopo un'ovariectomia parziale, il soggetto anfibio può essere riproduttivamente attivo dopo il recupero.

Dopo aver confermato una mancanza di risposta al pizzico dell'arto pelvico, posizionare un anuran femminile anestetizzato in una posizione reclinata dorsale e utilizzare una garza umida e sterile per pulire il campo chirurgico con soluzione di povidone-iodio per 10-15 secondi. Posizionare un drappo di plastica trasparente e sterile sull'area chirurgica e ridurre l'evaporazione mantenendo la pelle circostante umida, prima di utilizzare una lama bisturi numero 15 o 11 per fare un'incisione cutanea perimediana di 3 millimetri nel coelom medio tra le spalle e la cloaca. Utilizzare applicatori con punta di cotone per applicare pressione localizzata su qualsiasi piccolo recipiente intorno all'incisione, se necessario, ed elevare la membrana addominale per una successiva incisione della membrana.

Utilizzare i retrattori delle palpebre per ritrarre le incisioni ceolomiche e asportare una parte della massa delle uova senza legare alcun flusso sanguigno. Per un'ovariectomia completa, cauterizzare i vasi sanguigni circostanti e utilizzare una sutura mono-filamento per chiudere l'incisione della ceoliotomia con un modello di sutura everting interrotto. Diverse specie di anfibi, come questi Necturus e la rana di vetro, mostrano vari gradi di trasparenza della pelle, influenzando la capacità di visualizzare il loro stato riproduttivo transdermicamente.

In alcune specie, possono essere rilevate differenze morfologiche tra femmine gravide, rispetto agli animali recentemente ovopositati. In questo esempio, una muscosa rana femmina che ha recentemente ovoposited può essere distinta da una femmina gravida per la flaccidità della sua pelle e il suo aspetto più sottile. Le fasi comportamentali dell'ovideposizione in Rana muscosa includono il corteggiamento, in cui un maschio insegue attivamente una femmina e un amplexus, durante i quali il maschio rana muscosa monta e stringe saldamente sulla schiena della femmina.

Durante l'amplexus, il maschio stringe la femmina in modo morbido. La muscosa rana femminile si muove e mostra comportamenti intermittenti del cavalletto, alla fine appoggiandosi a superfici su cui le uova possono essere attaccate, mentre il maschio pompa vigorosamente il suo addome. Subito dopo l'ovideposizione, le ovaie femminili tornano a una categoria di primo stadio.

Durante questo periodo, i follicoli sono difficili da visualizzare quando si eseguono ultrasuoni. Lo stadio due è rappresentato dalla comparsa di punti ecogenici dispersi durante l'ovaio. Lo stadio tre è determinato dalla presenza di punti ecogenici più grandi e rotondi con centri scuri, indicativi di follicoli maturi e tuorli.

In questa valutazione rappresentativa di quattro anni del Necturus femmina in cattività, lo sviluppo delle uova era alto, ma l'ovideposizione non era garantita. Alcune femmine con uova trattenute concomitanti con guadagno di liquido nella cavità corporea, hanno mostrato eccessiva circonferenza e gonfiore, insieme ad alcuni segni di vasi sanguigni a scoppio, come quello mostrato in questi Rana e Necturus colpiti. Sebbene l'approccio chirurgico possa essere utilizzato per la gestione della patologia ovarica, questa tecnica può anche essere coinvolta nella ricerca gamet e ombelicale.

Dopo l'intervento chirurgico, il praticante può tornare al primo protocollo delineato in questo manoscritto per monitorare la salute generale in corso del soggetto anfibio.