Journal
/
/
Мониторинг активации А аврора-киназы в режиме реального времени с использованием конформационных биосенсоров FRET в живых клетках
JoVE Journal
Biology
This content is Free Access.
JoVE Journal Biology
Real-Time Monitoring of Aurora kinase A Activation using Conformational FRET Biosensors in Live Cells
DOI:

06:29 min

July 30, 2020

, ,

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:36Donor/Acceptor Förster Resonance Energy Transfer (FRET) Pair Selection
  • 01:13Cell Synchronization
  • 01:42FRET/Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy (FLIM) Acquisitions
  • 02:50Donor/Acceptor Pair Delta Lifetime Calculation and FLIM Value Comparison
  • 03:53Results: Representative Aurora Kinase A (AURKA) FRET Biosensor and Negative Control Images
  • 05:52Conclusion

Summary

Automatic Translation

Активация многофункциональной Ser/Thr киназы AURKA характеризуется ее автофосфорилированием на Thr288. Флуоресцентные зонды, полагающиеся на FRET, могут различать его неактивные и активированные состояния. Здесь мы иллюстрируем некоторые стратегии для разработки зондов вместе с быстрым протоколом FRET для отслеживания активации киназы на протяжении всего митоза.

Related Videos

Read Article