/
/
En In Vitro single-molecule imaging assay for analyse av cap-avhengig oversettelse kinetikk
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:05Introduction
- 00:51Equipment Preparation
- 03:113’-End Biotinylated mRNA Immobilization
- 05:20Translation Mix Assembly and Delivery
- 07:24Results: Analyses for Saccharomyces cerevisiae Translation of a Firefly Luciferase-encoding mRNA
- 09:12Conclusion
Sporing av individuelle oversettelseshendelser gir mulighet for kinetiske studier med høy oppløsning av capavhengige oversettelsesmekanismer. Her demonstrerer vi en in vitro enkeltmolekylanalyse basert på bildeinteraksjoner mellom fluorescerende merkede antistoffer og epitopmerkede nascent peptider. Denne metoden muliggjør enkeltmolekyl karakterisering av initiering og peptid forlengelse kinetikk under aktiv in vitro cap-avhengig oversettelse.
