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접합 효율 모니터링을 위한 기자 기반 셀룰러 분석
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Biochemistry
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JoVE Journal Biochemistry
A Reporter Based Cellular Assay for Monitoring Splicing Efficiency
DOI:

08:53 min

September 15, 2021

, ,

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
  • 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
  • 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
  • 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
  • 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
  • 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
  • 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
  • 08:09Conclusion

Summary

Automatic Translation

이 프로토콜은 5'splice 사이트 돌연변이가 접합에 미치는 영향을 모니터링하기 위한 미니유전자 기자 분석체를 설명하고 돌연변이 유발 접합 억제를 위한 억제기 U1 snRNA를 개발한다. 리포터 및 억제기 U1 snRNA 구조는 HeLa 세포에서 발현되고, 접합은 프라이머 확장 또는 RT-PCR에 의해 분석된다.

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