Name: マイクロインジェクションによる ストロンギロイデス 種におけるトランスジェニックとノックアウトの生成 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2021-10-07T14:45:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: 学ぶマイクロインジェクションによるStrongyloides寄生線虫への遺伝子導入法。トランスジェニックとノックアウトを生成し、寄生メカニズムと宿主相互作用の研究に新たな知見を提供します。

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pPV540とpPV402は、ペンシルベニア大学のジェームズ・ロック博士からの親切な贈り物でした。原稿に関する有益なコメントをくれたAstra Bryantに感謝します。この研究は、バローズ・ウェルカム基金の研究者から、疾患の病因賞、ハワード・ヒューズ医学研究所教員奨学生賞、国立衛生研究所R01 DC017959(E.A.H.)から資金提供を受けました。

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</ol>

著者らは利益相反がないと宣言しています。

このマイクロインジェクションプロトコルは、トランスジェネシスおよびCRISPR/Cas9媒介突然変異誘発のための構築物を S. stercoralis および S. ratti に導入するための方法を詳述する。S. stercoralis と S. rattiの両方について、注射後の生存率およびトランスジェネシスまたは突然変異誘発の速度は、微調整可能ないくつかの変数の影響を受けます。
トランスジェネシスを成功させるための最初の重要な考慮事項は、プラスミド導入遺伝子がどのように構築されるかです。以前の研究では、ストロンギロイデスにおける外因性導入遺伝子の発現には、ストロンギロイデス5'プロモーターおよび3'UTRエレメント3、13、19の使用が必要であることが分かっている。C. ele...

ストロンギロイデス・ステコラリスは、より広く認識されている鉤虫や回虫のアスカリス・ルンブリコイデス1と比較して、重要なヒト病原体として長い間見過ごされてきた。ワームの負担に関する以前の研究では、S.スターコラリス2の一般的な診断方法の感度が低いため、S.スターコラリスの有病率をしばしばひどく過小評価していました。近年、改良された診断ツールに基づく疫学的研究は、S.ステルコラリス感染症の真の有病率は、以前に報告されたよりもはるかに高く、世界中で約6億1000万人と推定されている2。
S. stercoralisと他のストロンギロイデス種(近縁のラット寄生虫および共通ラボモデルS. rattiを含む)は、寄生世代と自由生活(環境)世代の両方からなるため、実験的ゲノム研究に有利な異常なライフサイクルを持っています3(図1)。具体的には、S. stercoralisとS. rattiの両方が単一の自由生活世代を循環させることができます。自由生活世代は、自由生活の成人男性と女性に発達する寄生後の幼虫からなる。自由生活の成虫のすべての子孫は感染性の幼虫に発達し、ライフサイクルを継続するために宿主に感染しなければならない。さらに、この環境世代または自由生活世代は、実験室で実験的に操作することができる。自由生活のストロンギロイデス成虫とC.エレガンス成虫は類似の形態を共有しているため、もともとC.エレガンスのために開発された性腺内マイクロインジェクションなどの技術は、自由生活の成体ストロンギロイデス4,5での使用に適合させることができる。DNAは一般に自由生活の成人女性に導入されるが、ストロンギロイデスの男性と女性の両方にマイクロインジェクションすることができる6。したがって、機能的ゲノムツールは、ストロンギロイデスの生物学の多くの側面を調査するために利用可能である。他の寄生性線虫は自由生活世代を欠いており、その結果、機能的ゲノム技術に容易に順応していない3。
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/63023/63023fig01.jpg"> 図1:ストロンギロイデス・ステロイドのライフサイクル S.ステルコラリス寄生雌は、哺乳類宿主(ヒト、非ヒト霊長類、イヌ)の小腸に生息する。寄生雌は単為生殖によって繁殖し、小腸内で卵を産む。卵は宿主の内部に留まっている間に孵化し、寄生後幼虫に孵化し、糞便とともに環境に渡される。寄生後の幼虫が雄である場合、それらは自由生活の成人男性に発達する。寄生後幼虫が雌である場合、それらは自由生活の成体雌(間接発達)または第3段階の感染性幼虫(iL3s;直接発達)のいずれかに発達することができる。自由生活の男性と女性は、iL3になるように制約されている子孫を作り出すために性的に繁殖します。特定の条件下では、S. stercoralisはまた、寄生後幼虫の一部が糞便中の環境に入るのではなく宿主腸内に留まる自己感染を受ける可能性がある。これらの幼虫は、宿主内で自己感染性幼虫(L3a)に発達し、腸壁を貫通し、体内を移動し、最終的に腸に戻って生殖成虫になることができる。S. rattiの生活環は、S. rattiがラットに感染し、自己感染サイクルを持たないことを除いて、類似している。環境生成は、遺伝学的研究にストロンギロイデス種を使用するための鍵です。自由生活の成人女性(P0)にはマイクロインジェクションすることができます。それらの子孫は、すべてiL3sになり、潜在的なF1遺伝子導入薬である。この図はカステルレットらから修正されたものである。3. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/63023/63023fig01large.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、ここをクリックしてください。</a>
S. stercoralisは 、宿主の侵入や宿主の免疫調節を含む他の胃腸ヒト寄生性線虫と生物学の多くの側面を共有しています。例えば、 Necator 属および Ancylostoma 属のヒト寄生性鉤虫も皮膚浸透によって感染し、同様に体内をナビゲートし、そして最終的には小腸に寄生成体として存在する7。したがって、多くの胃腸線虫は、一般的な感覚行動および免疫回避技術を使用する可能性が高い。その結果、 ストロンギロイデス から集められた知識は、他の遺伝的に扱いにくい線虫の発見を補完し、これらの複雑で重要な寄生虫のより完全な理解につながるでしょう。
このマイクロインジェクションプロトコルは、トランスジェニックおよび突然変異体の子孫を作るために 、ストロンギロイデス の自由生活の成人女性にDNAを導入する方法を概説しています。マイクロインジェクションのための成虫の発生時期およびトランスジェニック子孫の収集を含む、株維持要件が記載されている。プロトコルと完全なマイクロインジェクション技術のデモンストレーション、トランスジェニック子孫の培養とスクリーニングのためのプロトコルが、必要なすべての機器と消耗品のリストとともに含まれています。

<table><tbody><tr><td>(&マイナス;)-ニコチン、&ge;99% (GC)、液体</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>N3876-5ML</td><td>ニコチン 麻痺虫用</td></tr><tr><td>3" 鉄 C クランプ、3" x 2" (容量 x 深さ)</td><td>VWR</td><td>470121-790</td><td>C クランプ ベンチトップ</td></tr><tr><td>アガロース LE</td><td>Phenix</td><td>RBA-500</td><td>アガロース スライド用</td></tr><tr><td>骨炭、4 ポンド バケツ、10 x 28 メッシュ</td><td>Ebonex</td><td>n/a</td><td>糞便炭培養</td></tr><tr><td>用木炭骨炭、顆粒、10 x 28メッシュ</td>、糞便培養用<td>、Reade</td><td>bonechar10x28</td><td>、木炭(上記に代わるもの)、</td></tr><tr><td>粗いマイクロマニピュレーター</td><td>、成茂</td><td>、MMN-1</td><td>、粗いマイクロマニピュレーター</td></tr><tr><td>、コーニング、Costar Spin-X、遠心分離管フィルター</td><td>、フィッシャー</td><td>、07-200-385</td><td>、マイクロフィルターカラム</td></tr><tr><td>、カバーガラス、48 x 60 mm、厚さNo.1</td>、<td>ブレインリサーチラボ</td><td>、4860-1</td>、<td>カバースリップ(48 x 60 mm)</td></tr><tr><td>深いペトリ皿、6つの通気口、直径100 mmの</td><td>VWR</td><td>82050-918</td><td>10 cmのペトリ皿(糞便炭文化用)</td></tr><tr><td>Eiscoレトルトベースw /ロッド</td><td>フィ</td><td>ッシャー12-000-101</td><td>スタンドベアマン装置</td></tr><tr><td>Eppendorf FemtoJetマイクロインジェクターマイクロローダーチップ</td><td>VWR</td><td>89009-310マイクロインジェクション針充填用VWR89009-310</td><td></td></tr>フィ<tr><td>ッシャーブランド吸収性アンダーパッドフィ</td><td>ッシャー</td><td>14-206-62</td><td>ベンチペーパー(準備用)</td></tr><tr><td>フィッシャーブランド鋳鉄リング</td><td>フィ</td><td>ッシャー14-050CQ</td><td>ベアマンOリング</td></tr><tr><td>フィッシャーブランド三角ポリプロピレンビーカー</td><td>フィ</td><td>ッシャー14-955-111F</td><td>プラスチックビーカー(混合用)</td></tr><tr><td>フィッシャーブランド三角ポリプロピレンビーカー</td><td>フィ</td><td>ッシャー14-955-111F</td><td>プラスチックビーカー(キャッチバケツ・水バケツ用)</td></tr><tr><td>フィッシャーブランドの三角ポリプロピレンビーカー</td><td>フィ</td><td>ッシャー14-955-111F</td><td>プラスチックビーカー(x2)(ホルダーを作るため)</td></tr><tr><td>シリンジのゴリラエポキシ</td><td>McMaster-Carr</td><td>7541A51</td><td>接着剤(チューブを取り付けるため)</td></tr><tr><td>ハロカーボンオイル700</td><td>シグマ-アルドリッチ</td><td>H8898-50ML</td><td>ハロカーボンオイル</td></tr><tr><td>食品および飲料用高温シリコーンゴムチューブ、1/2 "ID、5/8 "OD</td><td>マクマスターカー</td><td>3038K24</td><td>チューブ(漏斗用)</td></tr><tr><td>KIMAX漏斗、ロングステム、60°;角度、キンブルチェイス</td><td>VWR</td><td>89001-414</td><td>ベアマン漏斗</td></tr><tr><td>キンバリークラークプロフェッショナル Kimtechサイエンスベンチトッププロテクター</td><td>フィ</td><td>ッシャー15-235-101</td><td>ベンチペーパー(準備用)</td></tr><tr><td>蛍光付きライカ実体顕微鏡</td><td>ライカ</td><td>M165 FC</td><td>GFP実体顕微鏡 トランスジェニックワームの識別と選別用</td></tr><tr><td>マイクロインジェクター 真鍮製ストレートアームニードルホルダー</td><td>トライテック</td><td>MINJ-4</td><td>マイクロインジェクションニードル</td></tr><tr><td>ホルダーmicroINJECTORシステム</td><td>Tritech</td><td>ミンJ-1</td><td>マイクロインジェクションシステム</td></tr><tr><td>モンゴルのスナネズ</td>ミ<td>チャールズリバー研究所</td>213-S.stercoralisのメンテナンスのための<td>スナネズ</td>ミ、<td>オス4-6週間</td></tr><tr><td>のNasco Whirl-Pakの簡単な閉じる袋、18オン</td>スの<td>VWR</td><td>11216-776</td><td>Whirl-Pakサンプル袋</td></tr><tr><td>ナイロンチュール(メッシュ)</td><td>Jo-Ann Fabrics</td><td>zprd_14061949a</td><td>Baermannホルダー用ナイロンメッシュ</td></tr><tr><td>プラチナワイヤー、36ゲージ、1インチあたり</td><td>トーマスサイエンティフィック</td><td>1233S72</td><td>プラチナ/イリジウムワイヤー、ワームピックピ</td></tr><tr><td>ューリタン舌圧子、152 mm (L) x 17.5 mm (W)</td><td>VWR</td><td>62505-007</td><td>ウッドスティック (サンプルの混合用)</td></tr><tr><td>QIAprep スピン ミニプレップキット (250)</td><td>QIAGEN</td><td>27106</td><td>QIAGEN ミニプレップキット</td></tr><tr><td>Rats-Long Evans</td><td>Envigo</td><td>140 HsdBlu:LE S</td><td>. rattiのメンテナンスのためのLE Long Evansラット、女性 4-6週間</td></tr><tr><td>Rats-Sprague Dawley</td><td>Envigo</td><td>002 Hsd:Sprague Dawley SD</td><td>ラット S. rattiのメンテナンス用、女性 4-6週間</td></tr><tr><td>本当に便利なボックス 蓋付き半透明収納ボックス、容量1.6 L、7-5/8インチ x 5-5/16インチ x 4-5/16インチ</td> <td>オフィスデポ</td><td>452369</td><td>加湿チャンバー</td></tr><tr><td>用プラスチックボックスシェパードテックボード、8 x 16.5インチ</td><td>Newco</td><td>999589</td><td>techboard</td></tr>、<tr><td>ステンレス鋼、隆起ワイヤーフロア</td><td>、アンケア</td><td>R20SSRWF</td><td>ワイヤーケージボトム、</td></tr><tr><td>StalkMarket堆肥化可能なカトラリースプーン、6インチ、白、1,000オフィス</td><td>デポ</td><td>9587303</td><td>スプーンス</td></tr><tr><td>テンダーディッシュのパック、スタッキングタイプ、37 x 25 mm</td><td>カロライナ(科学)</td><td>741012</td><td>時計メガネ(小、丸)</td></tr><tr><td>実体顕微鏡</td><td>Motic</td><td>K-400 LED</td><td>解剖準備スコープ</td></tr><tr><td>収納トート、カラー クリア/ホワイト、外高 4-7/8 インチ、外の長さ 13-5/8 インチ、Sterilite</td><td>グレインジャー</td><td>53GN16</td><td>加湿チャンバー用プラスチックボックス</td></tr><tr><td>サッター P-30 マイクロピペット プーラー</td><td>サッター</td><td>P-30/P</td><td>プラチナ/イリジウム フィラメント付きニードル プラー</td></tr><tr><td>シラキュース ウォッチ グラス</td><td>フィッシャー</td><td>S34826</td><td>時計メガネ(大・丸型)</td></tr><tr><td>Thermo Scientific Castaloy 固定角クランプ</td><td>Fisher</td><td>05-769-2Q</td><td>ファンネルクランプ (2x)</td></tr><tr><td>3 軸吊り下げジョイスティック オイルハイドロリックマイクロマニピュレーター</td><td>Narishige</td><td>MM0-4</td><td>ファインマイクロマニピュレーター</td></tr><tr><td>United Mohr ピンチコッククランプ</td><td>Fisher</td><td>S99422</td><td>ピンチクランプ (2x)</td></tr><tr><td>ベント付きシャープエッジシャーレ (直径 60 mm)</td><td>Tritech研究</td><td>T3308P</td><td>6センチメートルのペトリ皿(小規模の糞便炭培養用)</td></tr><tr><td>VWR軽量ティッシュワイ</td><td>パーVWR</td><td>82003-820</td>の<td>裏地Baermannホルダー</td></tr><tr><td>時計ガラス、正方形、カ</td><td>ロライナ州1-5</td> / 8(科学)<td>742300</td>時計<td>メガネ(小、正方形)</td></tr><tr><td>Whatman定性的グレードのプレーンサークル、グレード1、直径5.5</td>センチメートルフィ<td>ッシャー09-805B</td><td></td><td>濾紙(6センチメートルのペトリ用)皿)</td></tr><tr><td>Whatman定性的グレードのプレーンサークル、グレード1、直径9 cm</td><td>フィ</td><td>ッシャー09-805D</td><td>濾紙(10 cmシャーレ用)</td></tr><tr><td>World Precision Instrumentホウケイ酸ガラス毛細管、1.2 mm x 4 in</td><td>Fisher</td><td>50-821-813</td><td>マイクロインジェクション針用ガラス毛細血管</td></tr><tr><td>X-Actoナイフ、No.11ブレード付きNo.1ナイフ</td>オフィス<td>デポ</td><td>238816</td><td>ワームピックを保持するためのブレードなしX-Actoナイフ</td></tr><tr><td>ツァイス AxioObserver A1</td><td>ツァイス</td><td>倒</td><td>立顕微鏡</td></tr></tbody></table>

マイクロインジェクションによる ストロンギロイデス 種におけるトランスジェニックとノックアウトの生成

Generating Transgenics and Knockouts in Strongyloides Species by Microinjection

ストロンギロイデス属は、ストロンギロイデス・ステロイドおよびストロンギロイデス・ラティを含む、異なる宿主範囲を有する皮膚貫通線虫の複数種からなる。S. stercoralisは、約6億1000万人に感染するヒト寄生性の皮膚透過性線虫であり、ラット寄生虫S. rattiはS. stercoralisと密接に関連しており、S. stercoralisの実験室モデルとしてしばしば使用されている。 S. stercoralisとS. rattiの両方は、生殖腺内マイクロインジェクションの外因性核酸送達技術によるトランスジェニックおよびノックアウトの生成に容易に順応性であり、したがって、この技術にまだ順応していない他の寄生性蠕虫のモデルシステムとして浮上している。
寄生性 ストロンギロイデス 成虫は宿主の小腸に生息し、糞便を介して子孫を環境に放出する。環境に入ると、幼虫は糞便に住み、新しい宿主を見つけて侵入しなければならない子孫を産む自由生活の成虫に発達する。この環境生成は ストロンギロイデス 種に特有のものであり、モデルの自由生活線虫 Caenorhabditis elegansに形態が十分に類似しており、 C. elegans のために開発された技術は、性腺内マイクロインジェクションを含むこれらの寄生性線虫での使用に適合させることができる。生殖腺内マイクロインジェクションを用いて、多種多様な導入遺伝子を ストロンギロイデスに導入することができる。CRISPR/Cas9成分をマイクロインジェクションして、変異型 ストロンギロイデス 幼虫を作成することもできる。ここでは、自由生存成人の調製、注射手順、およびトランスジェニック子孫の選択を含む、 ストロンギロイデス への性腺内マイクロインジェクションの技術について説明する。CRISPR/Cas9突然変異誘発を用いて作製されたトランスジェニックスト ロンギロイデス 幼虫の画像が含まれる。この論文の目的は、他の研究者がマイクロインジェクションを使用してトランスジェニックおよび変異型の ストロンギロイデスを作成できるようにすることです。

実験が成功した場合、F1幼虫は目的の導入遺伝子および/または変異表現型を発現する(図4)。しかし、形質転換率は非常に変動し、構築物、ワームの健康状態、注射後の培養条件、および実験者のスキルに依存する。一般に、実験が成功すると、注射された雌あたり&gt;15F1幼虫が得られ、蛍光マーカーの形質転換率は&gt;3%となる。生きている子孫の総数が平均して10匹未満の幼虫/雌である場合、構築物は有毒であり、形質転換された幼虫は生存していない可能性がある。蛍光幼虫ではなく蛍光卵を多数見つけることは、注入混合物が有毒である可能性があるという別の指標である。この手法を初めて学ぶときは、体壁筋13の堅牢な表現を駆動するact-2::mRFPmarsなど、よく表現するコンストラクトを使用することをお勧めします(図4)。
CRISPR/Cas9媒介標的突然変異誘発によって変異...

寄生性線虫 Strongyloides stercoralis および Strongyloides ratti のための機能的ゲノムツールキットには、トランスジェネシス、CRISPR/Cas9媒介突然変異誘発、およびRNAiが含まれる。このプロトコルは、生殖腺内マイクロインジェクションを使用して、導入遺伝子およびCRISPR成分を S. stercoralis および S. rattiに導入する方法を実証する。

The genus Strongyloides consists of multiple species of skin-penetrating nematodes with different host ranges, including Strongyloides stercoralis and ...

マイクロインジェクションを使用してDNA構築物をストロンギロイデスに送達することで、ノックアウトとトランスジェニックを生成することができ、これらのワームがどのように発達し、環境をナビゲートし、宿主に寄生するかを研究するために使用できます。これまでのところ、これはこれらの寄生虫にノックアウトとトランスジェニックを生成するための唯一の成功した技術です。マイクロインジェクションの1日前に、ガラスパスツールピペットを使用して180マイクロリットルのアガロース溶液をカバースリップに加え、すぐに2番目のカバースリップを上に落としてアガロースを薄いパッドに平らにします。5~10秒後、2つをスライドさせてトップカバースリップを取り外し、寒天パッドがどちらがオンになっているかを確認し、上を向いて置きます。次に、壊れたカバースリップから小さなガラス片を選択し、鉗子を使用して、パッドの上端近くの寒天に静かに押し込みます。マイクロインジェクションの日に、2つのプラスチックリングで作られたふるいであるBaermannホルダーに、2つの層のナイロンチュイルネットが3つの重なり合ったラボ組織で固定されています。次に、糞便 - 木炭混合物をBaermannホルダーに加える。次に、糞便 - 木炭混合物を含むBaermannホルダーを漏斗に置き、糞便 - 木炭混合物の周りに組織の断片を折り畳み、そして糞便炭の大部分を沈めるのに十分な水を加える。次に、漏斗の上に15センチメートルのプラスチック製のペトリ皿蓋を付けて臭いを封じ込め、必要に応じて漏斗にラベルを付けます。1〜2時間後、漏斗の底にあるゴムチューブの下に50ミリリットルの遠沈管を持ち、底部のクランプを慎重に開いて、ワームを含む30〜40ミリリットルの水を50ミリリットルのチューブに分配します。そうしたら。ワームを含む15ミリリットルのバールマン水を15ミリリットルの遠沈管に移す。チューブを回転させ、最大13ミリリットルの上清を除去し、ヨウ素を含む液体廃棄物容器に捨ててワームを殺す。すべてのワームを集めた後、チューブの底にあるワームのペレットを検査します。ワームが見えない場合は、1〜2時間待ってから、Baermann装置からさらにワームを収集します。大腸菌HB101の芝生を備えた6センチメートルの2%線虫増殖培地プレートにできるだけ少ない水でワームを移し、このプレートをマイクロインジェクションのソースプレートとして使用する。解剖顕微鏡下で、マイクロインジェクションパッドカバースリップ上のガラスの破片を、標準的なプラチナワームピックを使用してハロカーボンオイルで覆います。次に、マイクロインジェクションパッドカバースリップをマイクロインジェクションスコープの上に置き、オイルで覆われたガラスの破片を見つけます。針の方向に対してエッジが垂直になるよ

generating-transgenics-knockouts-strongyloides-species

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

免疫学と感染症

このビデオでは、トランスジェニック動物を作成するために線虫の生殖巣にマイクロインジェクションのテクニックを示しています。...

マイクロインジェクションを使用して安定したトランスジェニック線虫の世代

トランスジェニックワームは一般的に使用されています...

トランスジェニックの世代 C.エレガンスバイオリスティック変換による

私たちは、体細胞核移植（SCNT）を介してエピジェネティックなリプログラミングが事前定義されたT細胞受容体（TCR）特異性を有するマウスモデルを生成するためのツールと​​して使用できることをここに示しています。これらtransnuclearマウスは、内因性プロモーターの制御下での内因性遺伝子座から対応するTCRを発現する。...

に対する事前定義されたT細胞受容体の特異性をもつTransnuclearマウストキソプラズマ SCNTを介して取得

RNAiは、特定のmRNAの転写産物が1〜2ノックダウンできますが、モデル生物において、遺伝子導入は遺伝子の機能を操作することができます。このプロトコルは、necromenic線虫に安定的に伝送されるDNAと一時的な二本鎖RNAを導入するために必要な手法を例示することを目指して...

RNAiは、Necromenic虫にマイクロインジェクションによる遺伝子ノックダウンとトランスジェネシスを媒介 Pristionchus pacificus</em

地中海のショウジョウバエ(メドフライ)Ceratitis...

世界的な農業害虫昆虫における胚のマイクロインジェクションを介して、核酸の送達、<em&gt;チチュウカイミバエ</em

マウス卵母細胞のマイクロインジェクションは、古典的なトランスジェネシス（ すなわち、トランスジーンのランダム組込み）およびCRISPR媒介遺伝子ターゲティングの両方に一般的に使用される。このプロトコールは、マイクロインジェクションの最新動向をレビューし、特に品質管理とジェノタイピング戦略を重視しています。...

卵母細胞のマイクロインジェクションによる遺伝子改変マウスの作製

キョウソヤドリコバチ胚のマイクロインジェクションは、ゲノムの遺伝の変更を生成するため不可欠な方法です。マイクロインジェクションと大幅にこの生物の将来ゲノム操作を容易にするキョウソヤドリコバチ胚移植の手順の詳細については、ここで説明しました。...

胚のインジェクションと移植キョウソヤドリコバチゲノム操作手法

この記事では、ショウジョウバエのphiC31インテグラーゼ媒介トランスジェネシスを例に、トランスジェニックフライを作成するための重要なステップである胚マイクロインジェクションの最適化されたプロトコルを紹介します。...

ショウジョウバエにおけるトランスジェネシスのための胚マイクロインジェクション

卵管核酸送達 による 改良ゲノム編集 (I-GONAD) 法の効率は、ドナーの女性から接合子を採取し、偽妊娠中の女性に移植する必要がある従来のマイクロインジェクションに匹敵します。このプロトコルは、CRISPR/Cas9 誘発変異を染色体 6 上の ROSA26...

ノックアウトマウス生成のための卵管核酸送達に基づくin vivoエレクトロポレーション技術によるゲノム編集の改善

本稿では、昆虫病原性線虫(EPN:昆虫寄生)線虫であり、新たな遺伝モデルである Steinernema hermaphroditum におけるCRISPR-Cas9媒介ゲノム工学を実証しています。この技術は変異体の作成に有用であり、相利共生および寄生共生に関連する線虫生物学の遺伝子機能の解明を可能にします。...

CRISPR-Cas9ベースの線虫 Steinernema hermaphroditum における変異誘発と変異系統の維持

学ぶマイクロインジェクションによるStrongyloides寄生線虫への遺伝子導入法。トランスジェニックとノックアウトを生成し、寄生メカニズムと宿主相互作用の研究に新たな知見を提供します。

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