Een TNBS-geïnduceerd knaagdiermodel om de pathogene rol van mechanische stress bij de ziekte van Crohn te bestuderen

Dus in ons protocol leidt intra-coloninstillatie van TNBS tot transmurale ontsteking op de instillatieplaats en de mechanische uitzetting in het segment proximaal tot ontsteking. Dit bootst dus de ziekte van Crohn stenotisch na. Omdat het proximale segment mechanisch is opgezwollen maar geen zichtbare ontsteking vertoont, helpt een vergelijkende studie van het proximale segment en de ontstekingsplaats om te bepalen of mechanische stress een rol speelt bij colitis crohn.

Eerdere studies richten zich alleen op de ontstekingsplaats. Ons protocol dat op verschillende locaties in het model werkt, benadrukt een cruciale rol van mechanische stress bij de ziekte van Crohn, met name bij de ziekte van Crohn. Plaats om te beginnen de ratten op de anesthesietafel in rugligging.

Om colitis te induceren, brengt u een polyurethaankatheter van medische kwaliteit in met open uiteinde door de anus gedurende ongeveer zeven tot acht centimeter van de anale berm en brengt u TNBS voorzichtig in de dikke darm in. Dien de schijnbestrijdingsratten toe met 250 microliter zoutoplossing. Om de verdeling van TNBS of zoutoplossing te helpen en morsen te voorkomen, houdt u de ratten in rugligging met hun kop naar beneden gericht in een hoek van ongeveer 30 graden, met de anus gedurende twee minuten gesloten.

Open de buik van de rat met een schaar en een tang van chirurgische kwaliteit. Verwijder voorzichtig de gehele dikke darm boven het anale kanaal en breng de dikke darm onmiddellijk over naar ijskoude 1x HBSS-buffer. Maak de dubbele punt in de buffer recht en meet de darmlengte met behulp van een liniaal.

Neem een nylondraad en cirkel deze rond de dikke darm om de externe omtrek van de dikke darmsegmenten onder controle en met TNBS behandelde ratten te meten. Neem weefsels van volledige dikte voor histologie. Snijd de dikke darm langs de mesenteriale plank open en reinig de dikke darm grondig met HBSS-buffer.

Beoordeel de colon op macroscopische ontstekingsscore op basis van de vooraf gedefinieerde criteria met minimale wijzigingen. Verzamel darmweefselmonsters van met TNBS behandelde ratten op plaatsen P, I en D.Site P is het gedeelte twee tot drie centimeter vóór de orale marge van de ontstekingsplaats. Plaats I is de ontstekingsplaats waar TNBS wordt ingeprent, meestal vier tot zes centimeter van het einde van de dikke darm.

Ten slotte is site D het gedeelte één tot twee centimeter distal van de aborialmarge van de ontstekingsplaats. Intra-coloninstillatie van TNBS bij ratten veroorzaakte een gelokaliseerde transmurale ontsteking van ongeveer twee centimeter lang met een verdikte darmwand en vernauwd lumen op de plaats van instillatie in de distale dikke darm. De plaats van TNBS-instillatie werd aangeduid als plaats I.As gevolg van transmurale ontsteking en stenose waren zowel ontsteking als mechanische stress aanwezig op plaats I.De stenose op plaats I leidde tot duidelijke lumenuitzetting in het segment proximaal tot de plaats van TNBS-instillatie, aangeduid als site P.De colonomtrek was significant verhoogd op plaatsen P en I in vergelijking met schijncontrole colon.

Hoewel mechanisch opgezwollen, vertoonde site P geen zichtbare ontsteking. Integendeel, het colonsegment distale van de TNBS-instillatie, aangeduid als site D, vertoonde geen ontsteking of mechanische uitzetting. De macroscopische score van ontsteking op plaats I bij de met TNBS behandelde ratten was dramatisch verhoogd in vergelijking met schijncontroles op plaatsen P en D van colitisratten.

De ontstekingsscores op de plaatsen P en D waren niet significant verhoogd in vergelijking met sham. Het is dus belangrijk om niet alleen site I te bestuderen, maar ook sites P en D in het model, omdat dit helpt om de pathogene betekenis van mechanische stress bij de ziekte van Crohn te herkennen. Om verder te bepalen of mechanische stress een pathogene factor is bij darmontsteking, kan men ook proberen mechanische uitzetting vrij te geven door de dieren uitsluitend met een vloeibaar dieet te voeren en te zien of dit helpt bij ontsteking en darmfunctie.