A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Chapters
- 00:04Introduction
- 00:58Preparation of CRISPR Gene Editing and Guide RNA Design to Generate miRNA Cluster Knockout Cell Lines
- 02:06Generation of Stable Lentiviral Cell Lines Carrying the DOX-Inducible Cas9 Expression Cassette
- 03:20Performing CRISPR Reactions by Cas9 Induction and Synthetic Guide RNA Transfection of Cells Using a High-Throughput Format
- 07:22PCR Genotyping of CRISPR Cell Lines Using Crude Cell Lysates
- 08:37Results: High-Throughput CRISPR Experimental Design to Generate Multiple miR-888 Cluster Deletion Combinations
- 09:51Conclusion
Denne protokollen beskriver en høy gjennomstrømningsklynget regelmessig interspaced korte palindromiske repetisjoner (CRISPR) genredigeringsarbeidsflyt for mikroRNA-klyngenettverksanalyse som tillater rask generering av et panel av genetisk modifiserte cellelinjer som bærer unike miRNA-klyngemedlemsslettingskombinasjoner så store som 35 kb i et enkelt eksperiment.
