在实验室条件下收集和长期维护切叶蚁（Atta）

在实验室条件下成功收集和维持不同类型的巢穴中的菌落，可以开展一般研究，并可以促进科学推广。由于文件测试的菌落难以监测，因此该协议允许在受控环境中进行初步实验条件，使用整个菌落作为操作单元。该协议可以适用于考虑蚂蚁物种异质生活方式的其他感兴趣的群体，例如Acromimix属的特殊蚂蚁。

从未使用过这种技术的人可能会认为事件的不确定性和复杂的日常护理程序是困难。第一次收集应该在婚礼飞行后立即进行，其中移除翅膀并开始挖掘的女王被放置在带有石膏底座的小容器中。第二次收集应该在婚礼飞行后六个月进行，收集由成功开始殖民地基础的女王开发的殖民地。

在菌落发育后，它们被转移到更大的容器中，并可选择转移到不同的巢穴设置中。准备带有底部石膏层的塑料盖容器，以单独保留皇后。在繁殖季节，在切叶蚁发生区域识别阿塔巢，并寻找表明有翼生殖蚁即将离开的外部特征。

巢穴的特征包括隧道入口加宽，隧道入口处出现有翅膀的繁殖蚂蚁，以及增加的工人流对可能的捕食者表现出更具攻击性的行为。婚后飞行后，当雌性繁殖返回土壤时，移除翅膀并开始筑巢挖掘。开始皇后收藏。

小心地将它们单独放入用石膏层准备的塑料容器中。将蜂王放在受控的环境中，大约三天不要操纵或移动它们以避免压力。小心地刺破盖子，每两天用针头注射器在容器的石膏层上倒入2.5毫升水。

只要真菌花园表现出干燥的一面，缺水，请灌溉石膏层。检查蜂王是否在收集两周后反刍了真菌。如果没有真菌，收集两克健康和已建立的菌落的真菌花园，并将它们转移到女王的容器中。

即使真菌没有发育，也要执行此步骤。在第一批工人出现后，开始根据菌落的切割活动定期提供幼叶和薄叶的碎片，并清除菌落废物和干叶碎片。跟随菌落的发育，当真菌园达到容器体积的至少一半时，将菌落转移到人工的、持久的巢穴中。

在最后一次婚后六个月，在切叶蚁发生的位置上识别带有初始附着物颗粒的指示性塔形土丘。据估计，在婚礼飞行六个月后，幼蜂群的巢穴在土壤中深达一米。此时，挖掘巢穴入口，直到您到达用花园锄头容纳年轻殖民地的房间。

收集蜂王、真菌园、未成熟和年轻工人，并将它们放入约 500 毫升的塑料容器中。将装有菌落的塑料盖容器移动到指定的受控环境中。大约三天内不要操纵或移动菌落以避免压力。

开始提供叶子。提供新叶子时，请清除干叶和菌落废物。在勺子的帮助下从收集中清除土壤残留物。

跟随菌落的发展，当真菌园达到容器体积的至少一半时，将菌落转移到人工的、持久的巢穴中，即隐蔽的垂直巢穴、隐蔽的水平巢穴和开放的竞技场巢穴。准备人工的、持久的巢穴，使用更合适的设置隔离垂直巢、隐蔽水平巢和开放竞技场巢。准备一个带有觅食室、废物室和真菌花园室的隐居垂直巢穴设置。

然后准备一个带有觅食室、废物室和真菌花园室的隐居水平巢设置。接下来，准备一个开放的竞技场巢穴设置，带有一个觅食和废物室以及与之相连的真菌花园室。竞技场还可以容纳真菌室。

将一层聚四氟乙烯液体单次涂抹到竞技场边界以容纳蚂蚁。使用浸有液体和丁腈手套的棉布。每个菌落每天至少向觅食室提供一片大叶子，并附有一升真菌花园体积。

供应频率取决于工人将植物材料加入真菌的敏捷性。如果蚂蚁的切割活动很强烈，请增加叶子的数量。在与世隔绝的巢穴中，迅速进行祭品，以避免蚂蚁逃离觅食室。

也可以提供其他类型的资源。在开放的竞技场巢穴中，根据真菌的升数提供叶子，远离废物。每两周从所有菌落和每个耐用巢穴和工人中清除废物室的所有内容物，以用于人口控制目的。

如果处理的废物量很大，或者太潮湿，请每周清除一次。如果工人将健康的真菌转移到废物室，请确保蜂王不在上面并将其移除。每当提供新的蚂蚁时，请从觅食室中取出未被蚂蚁带走的材料，并确保它始终保持清洁。

如果工人将健康的真菌转移到觅食室，请打扰它，让容器盖打开并将中性滑石粉涂抹在觅食室边缘表面。这样，工人会将真菌转移回容器中，而不会丢失它或任何不成熟的真菌。如果需要更多的真菌花园，请添加另一个抹灰容器并将一部分真菌海绵移入其中。

真菌园的生长应该逐渐发生，而不是为了损害菌落平衡。如果需要更大的容器，请确保在转移之前让真菌占据最小容器的整个空间。菌落废物不应积聚在真菌花园室中。

通过按照协议中所述收集处于早期生命周期不同时刻的蜂王，并将尼龙线引入个体的胃部，可以评估和比较处女蜂王、最近交配的蜂王和交配六个月的蜂王之间的个体免疫抵抗。通过插入个体胃部的尼龙丝图像的平均灰度值评估封装水平。最暗的线被认为代表有效的细胞防御。

最近交配的蜂王表现出最高的包膜水平，因此具有有效的个体免疫防御。为了改进种群控制方法，通过该方案收集的菌落被提交给贝茨吸引力测试。在整个实验过程中，对每个物种的五个菌落进行了五次重复，Atta laevigata和Atta Sextens。

用不同副产品配制的无毒诱饵在重复中排列不同。此处显示了 Atta laevigata 和 Atta sexdens 工人的平均装载百分比。柠檬浆、大豆和大豆加柠檬浆处理对这两个物种的负荷最大。

然而，Atta sexdens的最后负荷治疗是由Atta laevigata工人负荷的60%。在2016年至2019年期间，来自约34所学校的约2，020名学生能够参观切叶蚁实验室，以观察使用上述协议收集和维护的蚁群。可以看到教育组织对举办蚂蚁等活虫展览的兴趣增加，这些展览可以让学生近距离观察。

根据学生的教育水平，访问的目的从普通生物学到社会行为学习。该技术中的一些关键步骤与促进真菌园的生长，保持巢穴清洁和避免可能的逃逸有关。例如，该协议可以应用于其他具有科学意义的物种，以了解早期菌落发育和有毒诱饵相互作用研究。

该技术已被来自比较形态学，组织学，毒理学和微生物学等多个领域的研究人员在个体和群体水平上使用22年。