Name: Sıçanlarda Sinir Hasarına Bağlı Mekanik Aşırı Duyarlılığın Orofasiyal Operant Ağrı Testi Kullanılarak Değerlendirilmesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-07-26T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 39 s
Description: Öğrenin, sıçanlarda sinir hasarına bağlı mekanik aşırı duyarlılığı orofasiyal operant ağrı testi cihazı kullanarak değerlendirmeyi. Bu yöntem, translasyonel ağrı araştırmalarında güvenilir veri sağlar.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Bu çalışma Yüz Ağrısı Araştırma Vakfı tarafından finanse edilmektedir.

Tüm deneysel prosedürler Florida Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmış ve Ulusal Sağlık Enstitüleri Laboratuvar Hayvanlarının Bakımı ve Kullanımı Kılavuzu'nda belirtilen standartlara uymuştur. Burada, OPAD kullanılarak mekanik aşırı duyarlılığın değerlendirilmesi, nöropatik orofasiyal ağrının bir sıçan modeli kullanılarak tanımlanmıştır. Etüde kullanılan zaman çizelgesinin bir şeması Şekil 1'de gösterilmiştir. Tüm davranışsal değerlendirmeler kadın deneyciler tarafından yapıldı.
1. Hayvanlar
<ol><li>Ev dişi Sprague-Dawley sıçanları (n = 8 / grup, 150-200 g) sıcaklık kontrollü bir odada (22 ° C ± 1 ° C) çiftler halinde 12 saat: 12 saat açık-karanlık döngüsüne sahip. Yiyecek ve su ad libitum sağlayın. Deneylerden önce sıçanları alışmak için 5 gün boyunca tesiste tutun.</li>
	<li>Operant ağrı tahlillerini haftanın aynı günü ve saatinde (9:00-11:00) yapın.</li>
	<li>Deneylerin sonunda, izofluran anestezisini takiben dekapitasyon yoluyla sıçanları ötenazi yapın.</li>
</ol>2. OPAD'ın kurulması
<ol><li>OPAD'ın üzerine süt damlama tepsileri, Pleksiglas kafesler ve metal döşeme ızgaraları yerleştirin. Kabloları kafeslere takın. Şişe tutucuyu cihazın arkasındaki metal direğe kaydırın.</li>
	<li>Bir kutu şekerli yoğunlaştırılmış süt açıp 1 L'lik bir beherin içine dökerek ödül çözeltisi olarak 2: 1 oranında su ile tatlandırılmış yoğunlaştırılmış süt hazırlayın. 300 mL süte ~ 600 mL musluk suyu ekleyin. Başlangıçta çözeltiyi bir kaşık kullanarak karıştırın ve ardından bir karıştırma çubuğu ve sıcak plaka karıştırıcı kullanın. Ardından, ödül şişelerini süt çözeltisiyle doldurun ve stok süt çözeltisini 4 ° C'de tutun. NOT: Stok süt çözeltisini plastik gıda ambalajı ile örtün. Her kullanımdan önce süt çözeltisini ısıtın. Buzdolabındaki stok süt çözeltisi bir hafta sonra pıhtılaşabilir. Pıhtılaştığında, yalama tüpünü tıkayabilir. Bu nedenle, atın ve yeni bir stok çözümü hazırlayın.</li>
	<li>Ödül süt şişelerini şişe tutucuya yerleştirin ve musluğa hayvan tarafından ulaşılabilecek şekilde ayarlayın. Şişeyi yerine sabitlemek için tutucunun sol tarafındaki düğmeyi sıkın.</li>
	<li>Ön paneldeki anahtarı kullanarak kafesleri açın.</li>
</ol>3. Bir protokol oluşturma ve deneme dosyası oluşturma
NOT: İlk olarak, denemeyi çalıştırmak için protokolü ayarlayın. Protokol, ANY-labirent yazılımının deneyi nasıl gerçekleştirdiğini açıklar.
<ol><li>Yazılımı açın. Parolayı yazın. Oturumumu aç'ı tıklayın veya Enter tuşuna basın.</li>
	<li>Yeni boş deneme |'e tıklayın Protokol menüsü.<ol><li>Bu protokolün kullanacağı modu seçin ve protokolü adlandırın. Aygıt'ın altında, Adsız Protokol'ü tıklatın, Bu protokolün kullanacağı modu seç bölümünü tıklatın ve Donanıma Özel Modlar altında OPAD mekanik kafes modu'nu seçin ve Tamam'ı tıklatın. Ardından, protokolü adlandırın (örneğin, OPAD mekanik).</li>
		<li>OPAD kafesleri ekleyin.<ol><li>Apparatus (Aygıt) altında, Apparatus | (Aygıt) seçeneğini tıklatın Protokol bölmesinin en üstünde bulunan öğeyi ekle | Yeni OPAD kafes | Bağlı tüm OPAD kafeslerini ekleyin. NOT: Kafesleri eklemeden önce, tüm kafeslerin açık olduğundan emin olun.</li>
		</ol></li>
		<li>Deneme testi aşamaları ekleyin.<ol><li>Test altında, Aşamalar |'nı tıklatın İlk aşama ve Aşama adı (örneğin, Temel Gün 1). Test süresi için 10 dakika yazın. Daha fazla aşama eklemek için, Protokol bölmesinin en üstünde bulunan Öğe ekle'yi tıklatın | Yeni Aşama. NOT: Her aşama, bir tahlil yapıldığında yapılan oturumu ifade eder. Örneğin, 10 günlük eğitim için 10 aşamaya ihtiyaç vardır. Test süresi, deneysel tasarıma bağlı olarak arttırılabilir veya azaltılabilir.</li>
		</ol></li>
		<li>Tedavi grupları atayın.<ol><li>Ek Bilgiler altında, Tedavi grupları'na tıklayın. Kullanım tedavi grupları | Kullanıcı hayvanları gruplarına manuel olarak atar. NOT: Referans verilen yazılım ( Malzeme Tablosuna bakınız) ayrıca hayvanların rastgele veya belirli bir sırayla atanmasına izin verir. Deneyler kör olarak çalıştırılabilir. Atanan tedavi gruplarını görmek için Denemeleri kör çalıştır seçeneğinin işaretini kaldırın.</li>
		</ol></li>
		<li>Hayvan kimlikleri (ID) atayın.<ol><li>Protokol menüsünü tıklatın; Ek Bilgiler altında, Hayvan Kimliği'ni tıklatın ve Hayvanlara başvurmak için kimliklerimi kullan'ı işaretleyin.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>Deneme menüsünü tıklayın.<ol><li>Bir deneme başlığı yazın.</li>
		<li>Tedavileri görüntüle'ye tıklayarak tedavileri adlandırın ve tedavi adlarını yazın (örneğin; Tedavi 1: CCI-ION, Tedavi 2: sahte).</li>
		<li>Hayvanları görüntüle | tıklayarak hayvan ekleyin ve tedaviler ile hayvan kimlikleri atayın Hayvanları ekleyin, test edilecek hayvan sayısını girin ve Tamam'ı tıklatın. Hayvan listesinin görünmesini bekleyin ve her sıçan için hayvan kimlikleri ve tedavileri ekleyin. NOT: Hayvan kimliğinin yanında görünen bir durum listesi , çalışmanın başında Normal olarak ayarlanacaktır. Hayvanlar daha sonra durumları Kullanımdan Kaldırıldı veya Silindi olarak değiştirilerek test programından çıkarılabilir.</li>
	</ol></li>
	<li>Protokol menü | tıklatarak protokolü kaydedin Protokol bölmesinin en üstünde bulunan protokolü kaydedin. Dosya adı ve yazılım (ANY-labirent) parolasını yazın ve Kaydet'i tıklatın. NOT: Kaydedilen protokoller yeni deneyler için yeniden kullanılabilir.</li>
	<li>Dosya |'ı tıklayarak deneme dosyasını kaydetme Kaydet, yazılım parolasını yazın ve Kaydet'i tıklatın.</li>
</ol>4. Eğitim ve temel test oturumları
NOT: Davranışsal test odası aynı hayvan barınma tesisinde ise, testten en az 15 dakika önce sıçanları odaya getirin. Hayvan tesisinin dışındaki bir test odasına taşınırlarsa, sıçanlara odaya alışmaları için 1 saat verin.
<ol><li>Temel kayıtlardan önce, OPAD'lerdeki sıçanları, süt çözeltisini almak için yüzlerini metal çivili çubuklara bastırmak için 2 hafta boyunca (5 gün / hafta, 10 dakika / gün) eğitin. NOT: Çivili çubukların ve tahlili yapan bir sıçanın temsili bir görüntüsü Şekil 2'de gösterilmiştir.</li>
	<li>OPAD ekipmanını kurun.</li>
	<li>Ön paneldeki anahtarı kullanarak kafesleri açın. Kafesteki yeşil ışığı arayın, bu da kafesin test etmeye hazır olduğu anlamına gelir.</li>
	<li>Açmak için kaydedilen deneme dosyasını çift tıklayın. Parolayı yazın. Oturumumu aç'ı tıklayın veya Enter tuşuna basın.</li>
	<li>Testler menüsünün görünmesini bekleyin. Ekranın sol tarafında, hayvan sayısını ve ilgili kafesi (örneğin, Hayvan 1, kafes 1'de test edilecektir), o gün çalıştırılacak aşamayı ve test durumunu ("hazır") not edin. Ekranın sağ tarafında, yalama ve temas sayılarını gösteren her hayvanın çizelgesini gözlemleyin.</li>
	<li>Test edilecek hayvanın kimliğini gösteren kafeslerin ekranını gözlemleyin. Her sıçanı ilgili kafese yerleştirin ve kafesteki düğmeye iki kez basın. Test başladıktan sonra yeşil ışığın turuncu ışığa dönüşeceğini ve test oturumu bittiğinde bir uyarı sesi duyulacağını unutmayın.</li>
	<li>Eğitimin ilk 2 günü boyunca, sıçanların uyaranla temas etmeden süt içmesine izin vermek için süt şişelerini tamamen kafese yerleştirin.</li>
	<li>Eğitimin 3-8. günlerinde, hayvanlar içmeye başladığında, fareleri yüzlerini çivili çubuklara bastırmaya teşvik etmek için şişeleri kademeli olarak geriye doğru hareket ettirin.</li>
	<li>Eğitimin 9-10. günlerinde, hayvanlar çivili çubuklara tamamen bastırdıklarında ve yalama sayıları tutarlı olduğunda (10 dakikalık test oturumları sırasında en az 500 yalama), her hayvan için süt şişesinin yerini not edin ve bu mesafeyi temel kayıtlar için kullanın.</li>
	<li>2 haftalık eğitimin ardından, belirtilen süt şişesi mesafesinden 5 gün boyunca temel olarak veri toplayın (10 dakika / gün).</li>
</ol>5. Orofasiyal nöropatik ağrının indüklenmesi ve mekanik aşırı duyarlılığın değerlendirilmesi
NOT: Temel ölçümleri takiben, sıçanlara, daha önce tarif edildiği gibi ION'un bilateral ligasyonunu içeren CCI-ION ameliyatı uygulandı20. Kontrol sıçanları sahte ameliyat geçirdi. Nöropatinin zaman seyrini değiştirebileceği için prosedürde ameliyat öncesi veya sonrası analjezi kullanılmadı. DİKKAT: Atık izofluran, kömür bidonlarından temizlenmelidir. Neşter bıçakları ve iğneleri biyolojik tehlike atıklarına atılmalıdır.
<ol><li>İndüksiyon odasındaki sıçanıO2 (1 L / dak) ve% 4 izofluran karışımı ile anestezi altına alın ve ameliyat süresince özel bir burun konisi ile anestezik durumu koruyun.</li>
	<li>Anestezi uygulanan sıçanı cerrahi bir tezgaha yerleştirin ve kısıtlayın. Bir ısıtma yastığı kullanarak vücut ısısını 37 ° C'de tutun. Kurumasını önlemek için gözlere oftalmik merhem uygulayın. Ayak parmağını sıkıştırarak anestezik derinliği kontrol edin ve ayak parmağı çekilme refleksi artık gözlenmediğinde işleme başlayın.</li>
	<li>Cerrahi prosedürü stereo mikroskop altında gerçekleştirin. Retraktörler kullanarak ağzınızı açın ve küçük bir klips kullanarak dudağı geri çekin.</li>
	<li>Bir neşter bıçağı kullanarak sırt sakızı ve dudak arasında küçük bir kesi yapın (# 15). ION'un bir dalını ortaya çıkarmak için neşter bıçağının ucunu kullanarak yumuşak dokuyu yavaşça kesin.</li>
	<li>Künt, bükülmüş bir şırınga iğnesi kullanarak ION'un etrafına iki kromik bağırsak (# 5-0) ligatürü yerleştirin.</li>
	<li>Doku yapıştırıcısı kullanarak yarayı kapatın.</li>
	<li>Sahte cerrahi için, aynı prosedürü kullanarak ION'u açığa çıkarın, ancak siniri kandırmayın.</li>
	<li>Ameliyattan sonra, yemeyi teşvik etmek ve dehidrasyonu önlemek için 2 gün boyunca sütle yumuşatılmış kemirgen chow sağlayın.</li>
	<li>OPAD'daki sıçanları, ameliyattan sonraki gün art arda 3 gün ve daha sonra 3 gün / hafta (örneğin, her Salı, Perşembe ve Cuma) sonraki haftalarda, yalama sayıları temel değerlerine ulaşana kadar test edin. NOT: CCI-ION kaynaklı mekanik hassasiyetin süresi, cinsiyete, kullanılan kemirgenin gerilmesine ve deneycinin performansına bağlı olabilir. Bu nedenle, hayvanları test etmek için belirli bir süreyi belirtmek doğru olmayabilir. Bu nedenle, yalama sayıları taban çizgisi değerlerine ulaşana kadar test etmek daha doğrudur.</li>
</ol>6. Cihazın temizlenmesi
<ol><li>Test tamamlandığında, sağ üst köşedeki x simgesine tıklayarak yazılımdan çıkın ve verilerin otomatik olarak kaydedilmesini bekleyin.</li>
	<li>Ön paneldeki anahtarı kullanarak kafesleri kapatın.</li>
	<li>Kabloları metal döşeme ızgaralarından çıkarın. Süt damlama tepsilerini, Pleksiglas kafesleri, metal döşeme ızgaralarını ve şişe tutucularını bulaşık sabunu ile çıkarın ve yıkayın. Her şeyi kurutma rafına koyun.</li>
	<li>Metal çivili çubukları, test cihazını ve laboratuvar tezgahlarını %70 izopropil alkol kullanarak silin. NOT: Aletlerin dikkatli bir şekilde kullanılması gerekir. Süt şişelerini temizlerken ve tüpleri yalarken yumuşak fırçalar kullanın. Kirli ekipman bakteri birikimine neden olabilir.</li>
</ol>7. Veri analizi
<ol><li>Denemek dosyasını açmak için üzerine çift tıklayın.</li>
	<li>Sonuçlar menüsüne tıklayın. Hangi hesaplamaların (ör. yalama, temas kurma) veya test günlerinin görüleceğini seçin.</li>
	<li>Bir metin, grafik veya istatistiksel analiz raporu görmek için Sonuçlar panelinin üst kısmındaki Metin veya Grafik ya da İstatistik bulundu'yu tıklayın.</li>
	<li>Ham verileri görmek için, Veri menüsüne tıklayın. Verileri elektronik tablo olarak kaydetmek için Veri panelinin üst kısmındaki Kaydet'i tıklatın veya e-posta yoluyla almak için Gönder'i tıklatın.</li>
	<li>Görülecek değişkenleri değiştirmek veya daha fazla değişken eklemek için Veri seç'i tıklayın, hesaplamaları seçin ve E-tabloyu görüntüle'yi tıklayın.</li>
	<li>İstatistiksel analiz<ol><li>Yalama ve kişi sayısını ve ilk yalamaya kadar olan gecikmeyi yazılımdan otomatik olarak türetin ve verileri yazılımdan bir elektronik tabloya aktarın.</li>
		<li>L / F oranını, yalama sayısını21,22,23 temas sayısına bölerek aşırı duyarlılık indeksi olarak hesaplayın. NOT: Bu çalışmada, sahte gruptaki sıçanlardan biri, ameliyattan önce düşük yalama sayıları (<500 yalama) nedeniyle çalışmanın dışında bırakılmıştır.</li>
		<li>L / F arasındaki farkların istatistiksel önemini, yalama sayısını ve kontakları ve ilk yalamanın gecikmesini iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA ile analiz edin, ardından Dunnett'in çoklu karşılaştırmaları veya uygun olduğunda Šídák'ın çoklu karşılaştırma testleri izleyin. NOT: 0.05 
	</ol></li>
</ol>

<ol><li>Dahlhamer, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevalence+of+chronic+pain+and+high-impact+chronic+pain+among+adults+-+United+States%2C+2016%5BTitle%5D)+AND+%22Morbidity+and+Mortality+Weekly+Report%22%5BJournal%5D)">Prevalence of chronic pain and high-impact chronic pain among adults - United States, 2016.</a> Morbidity and Mortality Weekly Report. 67 (36), 1001-1006 (2018).</li>
<li>Ab del Shaheed, C., Maher, C. G., Williams, K. A., Day, R., McLachlan, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficacy%2C+tolerability%2C+and+dose-dependent+effects+of+opioid+analgesics+for+low+back+pain%3A+A+systematic+review+and+meta-analysis%5BTitle%5D)+AND+%22JAMA+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">Efficacy, tolerability, and dose-dependent effects of opioid analgesics for low back pain: A systematic review and meta-analysis.</a> JAMA Internal Medicine. 176 (7), 958-968 (2016).</li>
<li>Chou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effectiveness+and+risks+of+long-term+opioid+therapy+for+chronic+pain%3A+A+systematic+review+for+a+National+Institutes+of+Health+Pathways+to+Prevention+Workshop%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Internal+Medicine%22%5BJournal%5D)">The effectiveness and risks of long-term opioid therapy for chronic pain: A systematic review for a National Institutes of Health Pathways to Prevention Workshop.</a> Annals of Internal Medicine. 162 (4), 276-286 (2015).</li>
<li>Vowles, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rates+of+opioid+misuse%2C+abuse%2C+and+addiction+in+chronic+pain%3A+A+systematic+review+and+data+synthesis%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Rates of opioid misuse, abuse, and addiction in chronic pain: A systematic review and data synthesis.</a> Pain. 156 (4), 569-576 (2015).</li>
<li>Barrot, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tests+and+models+of+nociception+and+pain+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Tests and models of nociception and pain in rodents.</a> Neuroscience. 211, 39-50 (2012).</li>
<li>Bove, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+sensory+threshold+testing+using+nylon+monofilaments%3A+The+pain+field%27s+%26%2334%3Btin+standard%26%2334%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Mechanical sensory threshold testing using nylon monofilaments: The pain field's &#34;tin standard&#34.</a> Pain. 124 (1-2), 13-17 (2006).</li>
<li>Negus, S. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Core+outcome+measures+in+preclinical+assessment+of+candidate+analgesics%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Core outcome measures in preclinical assessment of candidate analgesics.</a> Pharmacological Reviews. 71 (2), 225-266 (2019).</li>
<li>Vierck, C. J., Hansson, P. T., Yezierski, R. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+and+pre-clinical+pain+assessment%3A+Are+we+measuring+the+same+thing%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Clinical and pre-clinical pain assessment: Are we measuring the same thing.</a> Pain. 135 (1-2), 7-10 (2008).</li>
<li>Anderson, E. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+Operant+Orofacial+Pain+Assessment+Device+%28OPAD%29+to+measure+changes+in+nociceptive+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Use of the Operant Orofacial Pain Assessment Device (OPAD) to measure changes in nociceptive behavior.</a> Journal of Visualized Experiments. (76), e50336(2013).</li>
<li>Murphy, N. P., Mills, R. H., Caudle, R. M., Neubert, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Operant+assays+for+assessing+pain+in+preclinical+rodent+models%3A+Highlights+from+an+orofacial+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Topics+in+Behavioral+Neurosciences%22%5BJournal%5D)">Operant assays for assessing pain in preclinical rodent models: Highlights from an orofacial assay.</a> Current Topics in Behavioral Neurosciences. 20, 121-145 (2014).</li>
<li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+novel+thermal+operant+behavioral+assay+for+characterization+of+orofacial+pain+sensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Use of a novel thermal operant behavioral assay for characterization of orofacial pain sensitivity.</a> Pain. 116 (3), 386-395 (2005).</li>
<li>Neubert, J. K., Rossi, H. L., Malphurs, W., Vierck, C. J., Caudle, R. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+between+capsaicin-induced+allodynia+and+hyperalgesia+using+a+thermal+operant+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Differentiation between capsaicin-induced allodynia and hyperalgesia using a thermal operant assay.</a> Behavioural Brain Research. 170 (2), 308-315 (2006).</li>
<li>Kumada, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intradermal+injection+of+Botulinum+toxin+type+A+alleviates+infraorbital+nerve+constriction-induced+thermal+hyperalgesia+in+an+operant+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Oral+Rehabilitation%22%5BJournal%5D)">Intradermal injection of Botulinum toxin type A alleviates infraorbital nerve constriction-induced thermal hyperalgesia in an operant assay.</a> Journal of Oral Rehabilitation. 39 (1), 63-72 (2012).</li>
<li>Ma, F., Zhang, L., Lyons, D., Westlund, K. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Orofacial+neuropathic+pain+mouse+model+induced+by+Trigeminal+Inflammatory+Compression+%28TIC%29+of+the+infraorbital+nerve%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Orofacial neuropathic pain mouse model induced by Trigeminal Inflammatory Compression (TIC) of the infraorbital nerve.</a> Molecular Brain. 5, 44(2012).</li>
<li>Deseure, K., Hans, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chronic+constriction+injury+of+the+rat%27s+infraorbital+nerve+%28IoN-CCI%29+to+study+trigeminal+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Chronic constriction injury of the rat's infraorbital nerve (IoN-CCI) to study trigeminal neuropathic pain.</a> Journal of Visualized Experiments. (103), e53167(2015).</li>
<li>Rohrs, E. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+operant-based+behavioral+assay+of+mechanical+allodynia+in+the+orofacial+region+of+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A novel operant-based behavioral assay of mechanical allodynia in the orofacial region of rats.</a> Journal of Neuroscience Methods. 248, 1-6 (2015).</li>
<li>Cha, M., Kohan, K. J., Zuo, X., Ling, J. X., Gu, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+chronic+trigeminal+neuropathic+pain+by+the+orofacial+operant+test+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Assessment of chronic trigeminal neuropathic pain by the orofacial operant test in rats.</a> Behavioural Brain Research. 234 (1), 82-90 (2012).</li>
<li>Zuo, X., Ling, J. X., Xu, G. Y., Gu, J. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Operant+behavioral+responses+to+orofacial+cold+stimuli+in+rats+with+chronic+constrictive+trigeminal+nerve+injury%3A+Effects+of+menthol+and+capsazepine%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pain%22%5BJournal%5D)">Operant behavioral responses to orofacial cold stimuli in rats with chronic constrictive trigeminal nerve injury: Effects of menthol and capsazepine.</a> Molecular Pain. 9, 28(2013).</li>
<li>Nolan, T. A., Hester, J., Bokrand-Donatelli, Y., Caudle, R. M., Neubert, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+a+novel+operant+orofacial+testing+system+to+characterize+both+mechanical+and+thermal+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Adaptation of a novel operant orofacial testing system to characterize both mechanical and thermal pain.</a> Behavioural Brain Research. 217 (2), 477-480 (2011).</li>
<li>Rossi, H. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+bilateral+trigeminal+constriction+injury+using+an+operant+facial+pain+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Characterization of bilateral trigeminal constriction injury using an operant facial pain assay.</a> Neuroscience. 224, 294-306 (2012).</li>
<li>Ramirez, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+an+orofacial+operant+pain+assay+as+a+preclinical+tool+for+evaluating+analgesic+efficacy+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">Assessment of an orofacial operant pain assay as a preclinical tool for evaluating analgesic efficacy in rodents.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 54 (4), 426-432 (2015).</li>
<li>Rossi, H. L., Vierck, C. J., Caudle, R. M., Neubert, J. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+cold+sensitivity+and+thermal+preference+using+an+operant+orofacial+assay%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of cold sensitivity and thermal preference using an operant orofacial assay.</a> Molecular Pain. 2, 37(2006).</li>
<li>Sapio, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pain+control+through+selective+chemo-axotomy+of+centrally+projecting+TRPV1%2B+sensory+neurons%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Pain control through selective chemo-axotomy of centrally projecting TRPV1+ sensory neurons.</a> Journal of Clinical Investigation. 128 (4), 1657-1670 (2018).</li>
<li>Lambru, G., Zakrzewska, J., Matharu, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Trigeminal+neuralgia%3A+A+practical+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Practical+Neurology%22%5BJournal%5D)">Trigeminal neuralgia: A practical guide.</a> Practical Neurology. 21 (5), 392-402 (2021).</li>
<li>Doshi, T. L., Nixdorf, D. R., Campbell, C. M., Raja, S. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biomarkers+in+temporomandibular+disorder+and+trigeminal+neuralgia%3A+A+conceptual+framework+for+understanding+chronic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Canadian+Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Biomarkers in temporomandibular disorder and trigeminal neuralgia: A conceptual framework for understanding chronic pain.</a> Canadian Journal of Pain. 4 (1), 1-18 (2020).</li>
<li>Sadler, K. E., Mogil, J. S., Stucky, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innovations+and+advances+in+modelling+and+measuring+pain+in+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Innovations and advances in modelling and measuring pain in animals.</a> Nature Reviews Neuroscience. 23 (2), 70-85 (2022).</li>
<li>Neubert, J. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characterization+of+mouse+orofacial+pain+and+the+effects+of+lesioning+TRPV1-expressing+neurons+on+operant+behavior%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Pain%22%5BJournal%5D)">Characterization of mouse orofacial pain and the effects of lesioning TRPV1-expressing neurons on operant behavior.</a> Molecular Pain. 4, 43(2008).</li>
<li>Vlaeyen, J. W. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Learning+to+predict+and+control+harmful+events%3A+Chronic+pain+and+conditioning%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Learning to predict and control harmful events: Chronic pain and conditioning.</a> Pain. 156, Suppl 1 86-93 (2015).</li>
<li>Vierck, C. J. Animal studies of pain: Lessons for drug development. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aVierck%2C+CJ+%22Emerging+Strategies+for+the+Treatment+of+Neuropathic+Pain%22">Emerging Strategies for the Treatment of Neuropathic Pain</a>. Campbell, J. C., et al. , IASP Press. Chapter 23 475-495 (2006).</li>
</ol>

John K. Neubert ve Robert M. Caudle, OPAD'ın mucitleridir. Stoelting Co., OPAD'ın üreticisidir ve Richard Mills, Stoelting'in bir çalışanıdır. Yayın ücreti Stoelting Co. Richard Mills, John K. Neubert ve Robert M. Caudle tarafından ödenmiştir, operant ağrı tahlilleri kullanarak hizmet için ücretli davranış testi sağlayan bir şirket olan Velocity Laboratories'in önceki sahipleridir.

Yüzün ve ağız içi mukozanın zararsız mekanik stimülasyonu ile tetiklenen ağrı, trigeminal nevralji ve temporomandibuler eklem bozuklukları da dahil olmak üzere orofasiyal ağrı durumlarının belirgin bir özelliğidir24,25. Trigeminal nöropatik ağrı klinik olarak iyi tanımlanmış olmasına rağmen, kemirgenlerde nöropatik nosiseptif davranışların değerlendirilmesi zordur. Refleksif davranışları ölçen ağrı tahlilleri, klinik öncesi ağrı araştırmalarında en sık kullanılan yöntemlerdir. Bununla birlikte, cihazla ilgili stresin test edilmesi, duygusal durumun değerlendirilememesi ve deneyci önyargısı, refleks tahlillerinin yararlılığı ve geçerliliği ile ilgili endişeleri artırmaktadır26.
Bu çalışma, sıçanların orofasiyal bölgesindeki mekanik duyarlılığın değerlendirilmesini tanıtmakta ve operant bazlı bir ağrı testi kullanarak CCI-ION'a duyarlılığını göstermektedir. Aynı çalışma sistemi, farelerin mekanik hassasiyetini test etmek için de kullanılabilir. Fare ve sıçan suşlarının CCI-ION'a yanıtlarında farklılıklar gösterebileceği ve dolayısıyla mekanik aşırı duyarlılık seviyelerinin farklılık gösterebileceği belirtilmelidir. Deneyimlerimize dayanarak, Sprague-Dawley sıçanları tipik olarak CCI-ION'dan 2 hafta sonra stabil bir mekanik aşırı duyarlılık geliştirir, CCI-ION'dan 4 hafta sonra iyileşmeye başlarlar ve 6 haftalık CCI-ION'dan sonra ameliyattan iyileşme görürüz. 
Bu protokolde, mekanik aşırı duyarlılık, yalama sayısını ve ilk yalamaya temasları, L / F'yi ve gecikmeyi ölçerek ölçüldü. Veriler, CCI-ION'un L / F'de azalmaya ve yalama yanıtlarının sayısında azalmaya ve ilk yalama tepkisine gecikme süresinde artışa neden olduğunu gösterdi; bu, hayvanların artan orofasiyal ağrı duyarlılığı nedeniyle yüzlerini çivili çubuklara bastırmak istemediklerini gösterdi. 
OPAD, hayvanların lezzetli bir ödüle erişmek için nosiseptif uyaranlara katlanması gereken bir ödül çatışması testidir. Tahlildeki yalama davranışı iştah açıcı davranıştan etkilenebilir. Ek olarak, bu çalışmada, yüz kılları olan fareleri kullandık. Operant ağrı tahlilleri ile ilgili önceki deneyimlere dayanarak, kemirgenler arasında, tüysüz suşlar yüz temaslarını tespit etmek için daha iyidir16; Bununla birlikte, yayın sırasında, tüysüz sıçan suşları artık ticari olarak mevcut değildi. Bu, çalışmanın bir sınırlaması olarak düşünülebilir. Ayrıca sadece dişi Sprague-Dawley sıçanlarını kullandığımız için, ağrı yanıtlarında cinsiyet ve suşla ilgili farklılıklar öngörülmelidir. 
Tahlil ile optimum sonuçların sağlanması için bazı kritik adımlar da vardır. Doğru yalama ve temas verileri, referans verilen yazılımda sırasıyla düz kırmızı ve beyaz bloklar olarak görünmelidir (bkz. Şekil 3). Sivri uçlar ve süt şişesi arasındaki mesafe, deneyin başarısı için çok önemlidir. Süt şişesinin ucu çok ilerideyse, hayvan sivri uçlarla temas etmeyecek ve yazılım temasları doğru şekilde kaydetmez veya sayıları yalar. Tersine, süt şişesi çok gerideyse, temaslar kaydolacaktır, ancak hayvan süte ulaşamayacaktır. Eğitim seansları sırasında, süt şişesinin ucu çok ileride olduğu için yalama verileri düz beyaz bloklar olarak görünebilir. Süt şişesi geriye doğru itildikten sonra kırmızı katı bloklara dönüşür. Bazı nedenlerden dolayı, yalama verileri belirtilen mesafeden beyaz bloklar olarak görünmeye başlarsa, şişeyi biraz itmek ve süt tutucuyu hafifçe aşağı / yukarı doğru hareket ettirmek yardımcı olabilir. 
Burada tarif edilen orofasiyal operant ağrı sisteminin sınırlamaları olarak da birkaç nokta düşünülebilir. Kemirgenlerin eğitimi gereklidir ve haftalar sürer. Her test seansından önce, farelerde gıda kısıtlaması gereklidir, ancak sıçanlarda gerekli değildir. Açsız farelerin, oruç tutan farelere kıyasla düşük ve tutarsız yalama sayılarına sahip olduğu gösterilmiştir27. OPAD sistemi bir ödül-çatışma modeli olduğundan, hayvanların iştah açıcı davranışlarından veya iştahı etkileyen bir ilaçtan etkilenebilir. Birden fazla aparata sahip olmak, hayvanları test etmek için toplam süreyi azaltmak için de avantajlıdır, bu da maliyetleri artırabilir. Bununla birlikte, orofasiyal operant ağrı testleri, aynı anda birden fazla hayvanın test edilmesine izin verdiği ve hayvan-deneyci etkileşimini sınırladığı için geleneksel refleks tabanlı testlere göre hala avantajlıdır.
Ağrı durumları sırasında edimsel koşullanma, insan ve hayvan davranışlarını sonuçlarına göre değiştirir28. Bu nedenle, bir ödül-çatışma modeli kullanmak, ağrı koşullarını değerlendirmek için avantajlıdır, çünkü hayvanların operant tepkiler vermesine izin verir. Bu klinik olarak daha önemlidir, çünkü operant davranışların özellikleri niyet, motivasyon ve tipik olarak kortikal işlemeyi içerir29. Hayvanlar gönüllü olarak ödül şişesine yaklaştıklarından ve herhangi bir zamanda çivili çubuklardan serbestçe çekilebildiklerinden, bu beynin daha yüksek merkezlerini bütünleştirir ve ağrı10 ile ilgili duygusal-motivasyonel durumların değerlendirilmesine izin verir. Bu nedenle, operant ağrı tahlilleri, ağrı ve analjezikleri in vivo olarak değerlendirirken üstün veriler sağlar. Ayrıca trigeminal sistemdeki nosiseptif süreçleri anlamaya yardımcı olurlar, böylece orofasiyal ağrı alanının ilerlemesine katkıda bulunurlar.

Kronik ağrı her yıl milyonlarca Amerikalıyı etkilemektedir1. Ne yazık ki, mevcut tedaviler kronik ağrıyı hafifletmede nispeten etkisiz olduğundan ve genellikle uzun süreli kullanımda istenmeyen yan etkilere sahip olduğundan kronik ağrının tedavisi zordur 2,3,4. Von Frey testi gibi geleneksel klinik öncesi ağrı tahlilleri, refleksif sonuçlara veya ağrı ile uyarılmış yanıtlara dayanır5. Von Frey testi, mekanik allodiniyi ölçmek için onlarca yıldır kullanılmış olsa da, özellikle deneyci önyargısı6 olmak üzere çeşitli kafa karıştırıcı faktörlere karşı hassastır. Orofasiyal ağrıyı değerlendirmek için von Frey testinin kullanılması, hayvanın başını yüz bölgesini başarılı bir şekilde test etmek için sabitlemek için gereken kısıtlama derecesi nedeniyle de sorunludur; bu, ağrıyı arttırmak veya tersine strese bağlı analjezi gibi istenmeyen stres etkileri üretebilir.
Ağrı uyarıcı davranışlar aynı zamanda yanlış pozitif sonuçlara karşı da hassastır7 ve insan acı deneyiminin ayrılmaz bir parçası olan ağrının duygusal bileşenini hesaba katmaz8. Bu nedenle, preklinik testlerde içeriği ve öngörücü geçerliliği iyileştirmek için ağrının hem duyusal hem de duygusal bileşenlerini kapsayan ağrı-depresif davranışları değerlendiren operant ağrı modellerinin kullanılmasına artan bir ilgi vardır. Burada açıklanan operant orofasiyal ağrı değerlendirme testi, ödül çatışması paradigması 9,10,11'e dayanmaktadır. Bu tahlilde, kemirgen pozitif bir güçlendirici almak ve kendisini nosiseptif bir uyarana maruz bırakmak veya ödülden vazgeçmek ve nosiseptif uyarandan kaçınmak arasında seçim yapabilir, böylece yaşadığı ağrı miktarını kontrol edebilir. Geleneksel ağrı tahlillerinin aksine, operant-bazlı tahlil deneyciden bağımsızdır ve istenmeyen yatıştırıcı etkiler nedeniyle yanlış pozitif sonuçlara duyarlı değildir.
Baş ve yüzden gelen zararlı duyumlar, trigeminal sinirin oftalmik, maksiller ve mandibuler dalları tarafından taşınır. Trigeminal sinirin yaralanması veya iltihaplanması, duyusal nöronların termal veya mekanik uyaranlara duyarlılığını arttırır12,13,14,15. Rebrent bazlı orofasiyal ağrı testleri, kemirgenlerde trigeminal sinir tarafından iletilen termal veya mekanik orofasiyal ağrının otomatik bir ölçümünü sağlar 11,12,16,17,18. Zararlı olmayan ve zararlı uyaranlarla stimülasyon, orofasiyal bölgede termal ve mekanik allodinya ve hiperaljezi testi ile OPAD arasında önemli bir ayrımdır, çünkü farklı altta yatan mekanizmaların tezahürlerini temsil edebilirler.
Orofasiyal termal tahlilde, hayvanlar ödüle erişmek için yüzlerini pürüzsüz termodlara bastırırlar. Termodlar çeşitli soğuk, sıcak ve sıcak sıcaklıklara ayarlanabilir, böylece nötr veya nosiseptif koşullar altında davranışın değerlendirilmesine izin verilir. Orofasiyal mekanik tahlilde, hayvanlar çalışma testi sırasında yüzlerini çivili çubuklara bastırır; Bu sivri uçlar bir miktar rahatsızlığa neden olduğundan, kemirgenler yüzleri termodların pürüzsüz yüzeylerine karşı sivri uçlara dokunduğunda daha az içebilirler. Böylece, operant orofasiyal mekanik tahlil, değişen derecelerde mekanik nosiseptif stimülasyonun etkisini değerlendirebilir. OPAD'ın akut termal9'un yanı sıra akut mekanik19, nosiseptif ve hiperaljezi değerlendirmesinde yararlı ve güvenilir bir yöntem olduğunu daha önce göstermiştik.
Bu yazıda mekanik nosiseptif ve aşırı duyarlılığı değerlendirmek için OPAD'ın yeni geliştirilmiş bir versiyonunun kullanımı bildirilmiştir. Ek olarak, doğrulama yoluyla, CCI-ION'un OPAD'da öngörülebilir bir yanıtla sonuçlanan kronik nöropatiyi indükleme yeteneğini gösteriyoruz. Ayrıca, kemirgen davranış verilerini hızlı bir şekilde elde etmek ve analiz etmek için OPAD ve ilişkili yazılımın nasıl kullanılacağı da ayrıntılıdır.

<table><tbody><tr><td>ANY-labirent Video İzleme Yazılımı</td><td>Çalmak</td><td>60000</td><td></td></tr><tr><td>Şişe temizleme fırçaları</td><td>HERHANGİ BİR</td><td></td><td>Şişeler ve tüpler için farklı boyutta fırçalar</td></tr><tr><td>Kromik bağırsak sütür boyutu 5-0</td><td>Ethicon</td><td>687-G</td><td></td></tr><tr><td>Bulaşık sabunu</td><td>HERHANGİ</td><td>BİR</td><td>Sıvı</td></tr><tr><td>Bulaşık süngeri</td><td>HERHANGİ</td><td>BİR</td><td></td></tr><tr><td>GraphPad Prizma versiyonu 9.3.1&nbsp;</td><td>GraphPad Yazılımı, San Diego, CA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ocak gözü manyetik karıştırıcı</td><td>Benchmark Scientific</td><td>H4000-HS</td><td></td></tr><tr><td>İzofluran</td><td>Patterson Veteriner</td><td>07-893-8440</td><td>Pivetal</td></tr><tr><td>İzopropil alkol</td><td>Fisher Scientific</td><td>60-001-56</td><td></td></tr><tr><td>Oftalmik merhem</td><td>Dechra</td><td></td><td>Puralube Veteriner Merhem, vazelin oftalmik merhem</td></tr><tr><td>Edimsel Ağrı Değerlendirme Cihazı (OPAD) Sistemi</td><td>Çalıntı</td><td>67500</td><td></td></tr><tr><td>Oksijen tankı</td><td></td><td></td><td>Tıbbi</td></tr><tr><td>Kağıt havlu</td><td>HERHANGİ</td><td>BİR</td><td></td></tr><tr><td>Plastik gıda ambalajı</td><td>HERHANGİ</td><td>BİR</td><td></td></tr><tr><td>Poligon karıştırma çubukları</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-512-124</td><td></td></tr><tr><td>Yeniden kullanılabilir cam Berzelius beherleri (1 L)</td><td>Fisher Scientific</td><td></td><td></td>FB1021000</tr><tr><td>Neşter bıçağı # 15</td><td>FST</td><td>10015-00</td><td></td></tr><tr><td>Küçük hayvan anestezi sistemi</td><td>VetFlo</td><td>VetFlo-1205S</td><td></td></tr><tr><td>Kaşık</td><td>HERHANGİ</td><td>BİR</td><td></td></tr><tr><td>Sprague-Dawley sıçanları, dişi</td><td>Charles River Laboratories,&nbsp; ABD</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereo boom mikroskobu</td><td>Omano</td><td>OM2300S-GX4</td><td></td></tr><tr><td>Şekerli yoğunlaştırılmış süt</td><td>Borden&nbsp;</td><td></td><td>Eagle Marka</td></tr><tr><td>Doku yapıştırıcısı</td><td>3M Vetbond</td><td>1469SB</td><td></td></tr><tr><td>Su sirkülasyonlu ısıtma yastığı ve pompası</td><td>Gaymar</td><td>Model TP-500</td><td></td></tr></tbody></table>

sıçanlarda sinir hasarına bağlı mekanik aşırı duyarlılığın orofasiyal operant ağrı testi kullanılarak değerlendirilmesi

Assessment of Nerve Injury-Induced Mechanical Hypersensitivity in Rats Using an Orofacial Operant Pain Assay

Ağrının duyusal ve duygusal bileşenleri vardır. Geleneksel, refleks tabanlı ağrı tahlillerinin aksine, operant ağrı tahlilleri, kemirgenlerde ağrının bilişsel ve motivasyonel yönlerini ele alarak klinik olarak daha alakalı sonuçlar üretebilir. Bu yazıda, orofasiyal operant ağrı sistemi kullanan sıçanlarda infraorbital sinirlerin (CCI-ION) kronik daralma hasarını takiben mekanik aşırı duyarlılığın değerlendirilmesi için bir protokol sunulmaktadır. CCI-ION ameliyatından önce, sıçanlar, metal çivili çubuklar ve yalama tüpü ile yüz teması kurarken tatlandırılmış yoğunlaştırılmış süt içmek için bir orofasiyal ağrı değerlendirme cihazında (OPAD) eğitildi.
Bu tahlilde, sıçanlar pozitif bir güçlendirici olarak süt almak veya ödül erişim deliğinin her iki tarafındaki küçük piramit şeklindeki sivri uçların dikey bir sırası tarafından üretilen engelleyici bir mekanik uyarandan kaçmak arasında seçim yapabilirler. OPAD'da 2 haftalık eğitimin ardından ve CCI-ION ameliyatından önce, 10 dakikalık bir test oturumu sırasında her sıçan için 5 gün boyunca temel mekanik duyarlılık verileri kaydedildi. Bir oturum sırasında, çalışma sistemi, diğer önlemlerin yanı sıra, ödül şişesi aktivasyonlarının (yalamaların) ve yüz temaslarının, temas süresinin ve gecikmenin ilk yalamanın sayısını otomatik olarak kaydeder.
Temel ölçümleri takiben, sıçanlara CCI-ION veya sahte cerrahi uygulandı. Bu protokolde, mekanik aşırı duyarlılık, yalama sayısını, ilk yalamaya gecikmeyi, temas sayısını ve yalamaların yüz temaslarına oranını (L / F) ölçerek ölçülmüştür. Veriler, CCI-ION'un yalama sayısında ve L / F oranında önemli bir azalmaya ve mekanik aşırı duyarlılığı gösteren ilk yalamaya gecikme süresinde bir artışa neden olduğunu göstermiştir. Bu veriler, klinik öncesi ağrı araştırmalarında mekanik ağrı duyarlılığını değerlendirmek için operant bazlı ağrı tahlillerinin kullanımını desteklemektedir.

Tek bir sıçanın ödül şişesi üzerindeki yalamalarının ve başlangıçta ve ameliyattan 2 hafta, 4 hafta ve 6 hafta sonra metal çivili çubuklarla temas etmesinin bir örneği Şekil 3'te sunulmuştur. Zararlı olmayan dönemlerde, sıçanlar genellikle uzun içme seanslarına sahiptir (örneğin, CCI-ION'dan sonra başlangıçta ve iyileşmede: görüntüde 6. hafta) ve CCI-ION'u takiben, çivili çubuklarla yüz temasını uzun süre koruyamadıkları için yalama sayıları azalır (Şekil 3A), sahte gruptaki içme dönemlerinde önemli bir değişiklik olmaz (Şekil 3B).
CCI-ION'lu sıçanlar, ameliyattan 4 hafta sonrasına kadar yalama sayısında önemli bir azalmaya ve ameliyat haftasında (0. hafta) ve ameliyattan 1 hafta sonra ilk yalama gecikmesinde başlangıca göre bir artışa sahipti. Sahte grupta anlamlı bir değişiklik saptanmadı (Şekil 4A,B). CCI-ION, kontak sayısında bir azalmaya neden oldu, ancak bu fark anlamlı değildi (Şekil 4C). CCI-ION ayrıca L / F'de önemli bir azalmaya neden olmuştur ve CCI-ION grubu için düşüş, sahte grup için düşüşten daha büyüktü (Şekil 4D).
Bu sonuçlar, CCI-ION'u takiben, sıçanların daha az ödül süt içme davranışı gösterdiğini ve ilk yalamayı yapmalarının biraz zaman aldığını ve nosifensif bir davranışı gösterdiğini göstermektedir. Bununla birlikte, CCI-ION süte ulaşma isteklerini etkilemez. Ek olarak, CCI-ION'lu sıçanların L / F'sindeki azalma, ağrılı olmayan koşullar sırasında L / F daha yüksek olduğu için mekanik aşırı duyarlılığı gösterir.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64221/64221fig01.jpg"> Şekil 1: Çalışma tasarımının şematik gösterimi. Kısaltmalar: OPAD = orofasiyal ağrı değerlendirme cihazı; CCI-ION = infraorbital sinirlerin kronik daralma <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64221/64221fig01large.jpg" target="_blank">yaralanması. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64221/64221fig02.jpg"> Şekil 2: Çivili çubukların temsili görüntüsü ve tahlili yapan bir sıçan. Çivili çubuklar paslanmaz çelik metalden yapılmıştır. Tüm çubuğun uzunluğu 7 cm'dir. Sivri uçların yüksekliği 0,3 cm'dir. Sivri uçlar arasındaki mesafe 0,5 cm'dir. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64221/64221fig02large.jpg" target="_blank">Bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64221/64221fig03.jpg"> Şekil 3: Başlangıçta ve ameliyattan 2 hafta, 4 hafta ve 6 hafta sonra standart 10 dakikalık test oturumu sırasında tek bir CCI-ION ve sahte ameliyat edilen sıçanın temsili temas girişimleri ve yalama verileri. Kısaltmalar: CCI-ION = infraorbital sinirlerin kronik daralma yaralanması; AS = ameliyattan sonra. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64221/64221fig03large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64221/64221fig04.jpg"> Şekil 4: Sprague-Dawley sıçanlarında CCI-ION'u takiben mekanik aşırı duyarlılık gelişimi. (A) CCI-ION'lu sıçanlarda (n = 8) ameliyattan 4 hafta sonrasına kadar yalama sayısında anlamlı bir azalma ve (B) ameliyat haftasında (0. hafta) ve ameliyattan 1 hafta sonra ilk yalama gecikmesinde bir artış (**p &lt; 0.01, *p &lt; 0.05: ameliyat haftalarından sonra başlangıç çizgisine göre. #p &lt; 0.05: CCI-ION vs. sahte). Sahte grupta anlamlı bir azalma saptanmadı (n=7, p &gt; 0.05). (C) CCI-ION veya sahte cerrahi, temas sayısında önemli bir değişiklik yaratmadı. (D) KKI-ION'lu sıçanlar, ameliyat haftasında ve 3 hafta sonra L / F'de anlamlı bir düşüş gösterdi ve ameliyattan 2 hafta sonra azalan bir eğilim sergiledi. Sahte grup sıçanlarla karşılaştırıldığında, bu azalma CCI-ION sıçanlarında anlamlı olarak daha yüksekti ve ameliyattan 1 hafta sonra başladı ve ameliyattan 3 hafta sonrasına kadar devam etti. Sahte grupta anlamlı bir fark yoktu (**p &lt; 0.01, *p &lt; 0.05: ameliyat haftalarından sonra başlangıç çizgisine karşı. # p &lt; 0.05: CCI-ION vs sahte). Grafiklerde, kırmızı çizgi CCI-ION grubunu ve mavi çizgi sahte grubu temsil eder. Önemli farklılıklar±, iki yönlü tekrarlanan ölçümler ANOVA ve ardından Šídák veya Dunnett'in çoklu karşılaştırma testleri ile analiz edildi. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64221/64221fig04large.jpg" target="_blank">Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.</a>

Bu protokol, operant tabanlı bir orofasiyal ağrı değerlendirme cihazı kullanılarak nöropatik orofasiyal ağrının bir sıçan modelinde mekanik aşırı duyarlılığın değerlendirilmesini açıklar.

Sıçanlarda Sinir Hasarına Bağlı Mekanik Aşırı Duyarlılığın Orofasiyal Operant Ağrı Testi Kullanılarak Değerlendirilmesi

Pain has sensory and affective components. Unlike traditional, reflex-based pain assays, operant pain assays can produce more clinically relevant results ...

Orofasiyal ağrı değerlendirme cihazı veya OPAD, operant bir ödül çatışması paradigması kullandığı için klinik öncesi ağrı araştırmaları için değerli bir araçtır. Bu, insan ağrısı deneyiminde önemli olan ve translasyonel geçerliliği artıran nosiseptif, öğrenme ve motivasyonu kapsar. OPAD'ın geleneksel refleks tabanlı testlere göre önemli bir avantajı, ilgili stres etkilerini önleyen hayvanları kısıtlama ihtiyacını ortadan kaldıran ve aynı zamanda deneyci önyargısını azaltan tamamen otomatik olmasıdır.İnfraorbital sinirin CCI ameliyatını gösteren, laboratuvarımdan bir laboratuvar teknisyeni olan Darrice Montgomery olacak. Süt damlama tepsilerini, pleksiglas kafesleri ve metal döşeme ızgaralarını yerleştirerek orofasiyal ağrı değerlendirme cihazını veya OPAD'ı kurmakla başlayın. Kabloları kafeslere takın ve şişe tutucuyu cihazın arkasındaki metal direğe kaydırın.Ardından, ödül süt şişelerini şişe tutucuya, musluğa hayvan tarafından ulaşılabilecek şekilde yerleştirin. Şişeyi yerine sabitlemek için tutucunun sol tarafındaki düğmeyi sıkın. Ardından, ön paneli açın ve kafesleri açın.Protokolü ayarlamak için yazılımı açın, parolayı girin ve Log Me On (Oturumumu Aç) seçeneğini tıklayın veya Enter tuşuna basın. Aygıt'ın altında, Adsız Protokol'ü tıklatın ve bu protokolün kullanacağı modu seçin.Ekipmana Özel Modlar altında, OPAD Mekanik Kafes Modu'nu seçin ve protokolü adlandırın. Tüm kafeslerin açık olduğundan emin olduktan sonra, protokol bölmesinin üst kısmındaki Aparat ve Öğe Ekle'ye tıklayarak OPAD kafeslerini ekleyin, ardından Yeni OPAD Kafesi ve Tüm Bağlı OPAD Kafeslerini Ekle'yi seçin. Deneme testi aşamalarını eklemek için, aşamaları seçmek üzere Test sekmesine ve İlk Aşama sekmelerine gidin, ardından aşamayı adlandırın.Test süresi olarak 10 dakika ekleyin. Öğe Ekle Sekmesi'ni ve ardından Yeni Aşama'yı tıklatarak daha fazla aşama ekleyin. Ardından, Ek Bilgiler ve Tedavi Grupları'na tıklayarak grupları atayın.Kullanılan Tedavi Gruplarını Kontrol Edin ve ardından Kullanıcı Hayvanları Gruplarına Manuel Olarak Atayacak seçeneğini seçin. Protokol menüsüne tıklayarak hayvan tanımlamaları atayın. Ek Bilgiler altında, Hayvan Kimliği'ne tıklayın ve Hayvanlara Başvurmak için Kimliklerimi Kullan seçeneğini işaretleyin.Denemeyi, Tedavileri Görüntüle'yi tıklayıp tedavi adlarını yazmadan önce deneme başlığını yazarak ayarlayın. Hayvanları ekleyin ve Hayvanları Görüntüle ve Hayvan Ekle'yi tıklayarak tedavileri ve hayvan kimliklerini atayın. Test edilecek hayvan sayısını ve ardından Tamam'ı girin.Hayvan listesi göründüğünde, her sıçan için hayvan kimliği ve tedavi ekleyin. Protokol menüsünü ve ardından Protokolü Kaydet'i tıklatarak protokolü kaydedin. Dosya adını ve yazılım parolasını girin ve Kaydet'i tıklatın.Ardından, dosyayı tıklatıp Kaydet'i, yazılım parolasını yazıp Kaydet sekmesini tıklatarak deneme dosyasını kaydedin. Kafesleri açtıktan sonra, kafesin test edilmeye hazır olduğunu gösteren kafes üzerindeki yeşil ışığı arayın. Kaydedilen deneme dosyasını çift tıklayarak açın.Parolayı girin, Log Me On'u tıklayın veya Enter tuşuna basın. Ekranın sol tarafında, hayvan sayısını ve ilgili kafesi, o gün çalışan sahneyi ve test durumunu not edin. Kafesin ekranında test hayvanının kimliğini gözlemleyin.Sıçanı kafese yerleştirin ve ilgili kafesteki düğmeye basın. Test başladıktan sonra yeşil ışığın turuncu ışığa dönüştüğünü unutmayın. Mekanik çivilerle yeterli temas kurarken hayvanın ödül şişesine erişebildiğinden emin olun.Ekranın sağ tarafında, her hayvanın yalama ve temas sayılarını gösteren grafiğini gözlemleyin. Test oturumu bittiğinde bir uyarı sesi duyulur. Anestezi uygulanan sıçanı cerrahi bir tezgaha yerleştirin ve kısıtlayın.Bir ısıtma yastığı kullanarak vücut ısısını 37 santigrat derecede tutun. Kurumasını önlemek için gözlere oftalmik merhem uygulayın. Sırt sakızı ve dudak arasında küçük bir kesi yapmak için neşter bıçağı 15 kullanın.Neşter bıçağını kullanarak yumuşak dokuyu çıkarın ve infraorbital sinirlerin dalını veya ION'u ortaya çıkarın. Künt bükülmüş bir şırınga iğnesi yardımıyla, ION'un etrafına iki adet 5-O kromik bağırsak bağı yerleştirin, ardından doku yapıştırıcısı kullanarak yarayı kapatın. Tek bir CCI ION ve Sham ile ameliyat edilen sıçanın temas girişimleri ve yalama verileri, başlangıçtaki standart 10 dakikalık test oturumu sırasında ve ameliyattan iki hafta, dört hafta ve altı hafta sonra burada sunulmaktadır.Model, zararlı olmayan dönemlerde sıçanların uzun içme seanslarına sahip olduklarını ortaya koydu. Yaralanmadan sonra, hayvan çivili çubuklarla yüz temasını uzun süre koruyamaz ve bu da yalama sayısının azalmasına neden olur. Şam grubunda, içme süresi için önemli değişiklikler gözlenmedi.Başlangıçta CCI ION ve Sham ile çalışan sıçanlar arasındaki ortalama yalama sayısı anlamlı bir fark göstermedi. Bununla birlikte, CCI ION, ameliyattan dört hafta sonrasına kadar yalama sayılarını önemli ölçüde azalttı ve ameliyat sonrası hafta boyunca ve mekanik hiperaljeziyi gösteren sinir hasarından bir hafta sonra ilk yalama için gecikmeyi arttırdı. Şam tarafından ameliyat edilen sıçanlarda anlamlı bir değişiklik olmadı.OPAD'ı kullanırken, süt şişesinin mesafesini ve sivri uçların genişliğini optimize edin. Veri toplama sırasındaki hataları azaltmak için bunu tutarlı tutmak önemlidir.

assessment-nerve-injury-induced-mechanical-hypersensitivity-rats

Research

JoVE Journal

Behavior

Davranış

Ayrılan Sinir Sakatlık hayvan modeli kalan sural sinir zedelemeden, siyatik sinirin kısmi denervasyon aşağıdaki tibial ve peroneal sinir dallarının lezyon periferik nöropatik ağrı bir fare modeli olarak burada açıklanmıştır. Mekanik allodini kaynaklanan davranış değişikliği von Frey filamentler miktarı.

Fare İndüklenmiş Mekanik allodini ayrılan sinir hasarı (SNI) Model

Cerrahi basitlik ve sağlam davranışsal sonuçları nedeniyle, siyatik sinirin kronik daralma nöropatik ağrı seçkin hayvan modelleri biridir. Ameliyat sonrası 24 saat içinde, ağrı aşırı duyarlılık kurulan ve kantitatif bir von Frey aesthesiometer (mekanik test) ve plantar analjezi metre (termal testi) kullanılarak ölçülebilir.

Siyatik Sinir Sıçanlarda Ağrı aşırı duyarlılık Test Kronik daraltma

Bu video, anestezi hazırlığından fasiyal sinir yaralanması indüksiyonuna kadar adımları detaylandıran bir sıçan modelinde cerrahi protokolü göstermektedir. Bu protokol, tıbbi araştırmalarda sinir rejenerasyonu ve cerrahi teknikleri incelemek için yararlıdır.

Bir sıçan modelinde fasiyal sinir yaralanmasına neden olmak

Bu video, infraorbital siniri bağlayarak bir sıçan modelinde orofasiyal nöropatik ağrının indüksiyonunu göstermektedir. Bu, sinir hasarı ve iltihaplanma ile sonuçlanır, anormal ağrı sinyaline neden olur ve orofasiyal ağrı testini incelemek için kullanılabilecek kronik ağrı durumlarını taklit eder.

İnfraorbital Sinir Ligasyonları Yoluyla Bir Sıçan Modelinde Orofasiyal Nöropatik Ağrının İndüklenmesi

Biz uyanık, bilinçli kemirgenlerde ağrı davranışların değerlendirilmesi için kullanıcı dostu, yüksek verimli edimsel sistemi mevcut. Orofasiyal Ağrı Değerlendirme Ölçeği (OPAD) böylece test daha insancıl bir şekilde sağlayan bir ödül / çatışma paradigma ile ağrı değerlendirebilir. Bu protokol kemirgenler daha fazla klinik ve öteleme veri verecektir.

Nosiseptif Davranış değişiklikler Tedbir Edimsel Orofasiyal Ağrı Değerlendirme Ölçeği (OPAD) kullanımı

Yemek süresinde bir uzatma, orofasiyal ağrısı olan insanların koruma davranışına benzer kemirgenlerde orofasiyal noseptif davranışı temsil eder. Yemek, eğitim veya hayvan manipülasyonu gerektirmeyen, kortikal katılım gerektiren ve bu tahlilleri alternatif refleks veya operant ölçümlerden ayıran diğer deneysel olarak indüklenen davranışlarla rekabet etmeyen bir davranıştır.

Kemirgenlerde Orofacial Noseptif Yanıtların Ölçüsü Olarak Yemek Süresi

Bu el yazması, trigeminal nöropatik ağrıyı incelemek için bir kemirgen modelini tanımlamaktadır. Açıklanan yöntemler, sıçanın infraorbital sinirinin kronik daralma yaralanmasını gerçekleştirmek için cerrahi prosedürleri ve kalıcı ağrı ve allodinin göstergesi olan spontan ve uyarılmış davranıştaki değişiklikleri ölçmek için cerrahi sonrası davranış testlerini içerir.

Trigeminal Nöropatik Ağrı Eğitim için Rat adlı infraorbital Sinir (ION-CCI) kronik Daralma Yaralanma

Modifiye cerrahi, hem ortak peroneal hem de sural sinirleri yaralamak için sadece bir ligasyon ve bir kesi gerektiren fare veya sıçan korunmuş sinir yaralanması modeli için basitleştirilmiş bir yöntemdir.

Farelerde Nöropatik Ağrının Modifiye Edilmiş Korunmuş Sinir Yaralanması Cerrahisi Modeli

Parsiyel siyatik sinir ligasyonu, termal ve mekanik uyaranlara abartılı tepkilerle karakterize uzun süreli kronik nöropatik ağrıya neden olur. Nöropatik ağrının bu fare modeli, ağrı yönetimi için yenilikçi terapileri incelemek için yaygın olarak kullanılır. Bu makalede, standardizasyonu ve tekrarlanabilirliği artırmak için cerrahi prosedür ayrıntılı olarak anlatılmaktadır.

Kısmi Siyatik Sinir Ligasyonu: Yeni Tedavilerin Antinosiseptif Etkisini İncelemek için Kronik Nöropatik Ağrının Bir Fare Modeli

Farelerde distal infraorbital sinirin kronik daralma yaralanması, devam eden ağrı ve allodinin belirtileri olan dokunsal stimülasyona (von Frey saç stimülasyonuna aşırı duyarlılık) yanıt olarak spontan davranışta (artmış yüz bakım aktivitesi) ve nosifensif davranışta değişikliklere neden olur ve trigeminal nöropatik ağrı için bir model görevi görür.

Trigeminal Nöropatik Ağrıyı İncelemek İçin Farelerde Distal İnfraorbital Sinirin (DIoN-CCI) Kronik Daralma Hasarı

Öğrenin, sıçanlarda sinir hasarına bağlı mekanik aşırı duyarlılığı orofasiyal operant ağrı testi cihazı kullanarak değerlendirmeyi. Bu yöntem, translasyonel ağrı araştırmalarında güvenilir veri sağlar.

Sıçanlarda Sinir Hasarına Bağlı Mekanik Aşırı Duyarlılığın Orofasiyal Operant Ağrı Testi Kullanılarak Değerlendirilmesi

Daha fazla video keşfet