Aufzeichnung der funktionellen Barriereintegrität auf bEnd.3 vaskulären Endothelzellen mittels transendothelialer elektrischer Widerstandsdetektion
September 29th, 2023
Dieses Protokoll beschreibt ein zuverlässiges und effizientes In-vitro-Modell der Blutschranke des Gehirns. Die Methode verwendet zerebrale vaskuläre Endothelzellen der Maus bEnd.3 und misst den elektrischen Widerstand der Transmembran.
Aktuelle Studien verwenden in der Regel Permeabilitätstests und die damit verbundene Proteinexpression, um die Genauigkeit des TEER-Nachweises zu überprüfen. Das BHS-Modell von Monolayer-Zellen ist für das Wirkstoff-Screening weniger effektiv, und die Verwendung von mehr Zellen erschwert die Konstruktion des Modells. Das Protokoll dieser Studie ist relativ einfach, da das nicht-invasive Verfahren es ermöglicht, die Zellproben nach dem TEER-Nachweis in anderen Experimenten zu verwenden.
Der Nachweis von TEER zur Beurteilung der Permeabilität von Zellmodellen kann das Screening von Medikamenten zur Behandlung und Prävention des zentralen Nervensystems beschleunigen, um die Erfolgsrate der Entwicklung neuer Medikamente zu erhöhen. In Zukunft werden wir die Expression des Tight-Junction-Proteins in Zellen des oberen Kompartiments der Brustwand nachweisen, um zu überprüfen, ob TEER-Testergebnisse die Integrität der BHS-Barrierefunktion effektiv darstellen können.
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Übersicht
Diese Studie präsentiert ein zuverlässiges in vitro Modell der Blut-Hirn-Schranke (BBB) unter Verwendung von zerebralen vaskulären endothelialen Mauszellen (bEnd.3). Das Modell bewertet den transmembranen elektrischen Widerstand (TER), um die Integrität der BBB zu beurteilen und erleichtert die Wirkstoffprüfung für Behandlungen des zentralen Nervensystems.
Wichtige Studienkomponenten
Wissenschaftsbereich
- Zellbiologie
- Neurowissenschaften
- Pharmakologie
Hintergrund
- Die Blut-Hirn-Schranke ist entscheidend für die Aufrechterhaltung der Homöostase im zentralen Nervensystem.
- Traditionelle in vitro Modelle sind für die Wirkstoffprüfung aufgrund von Einschränkungen in der zellulären Komplexität weniger effektiv.
- Diese Studie adressiert diese Einschränkungen durch die Präsentation einer einfacheren, nicht-invasiven Methode.
Zweck der Studie
- Verbesserung der Beurteilung der BBB-Integrität durch TER-Messung.
- Erleichterung der Wirkstoffprüfung für Behandlungen von Erkrankungen des zentralen Nervensystems.
- Überprüfung der Beziehung zwischen TER-Werten und der Expression von Tight-Junction-Proteinen.
Verwendete Methoden
- Die Studie nutzte die bEnd.3-Zellkultur, die in einem 96-Well-Platten-Format ausgesät und kultiviert wurde.
- Wichtige Interventionen umfassten die Zugabe von Kobaltchlorid zur Beurteilung der zellulären Lebensfähigkeit und Barriereintegrität.
- TEER-Werte wurden im Laufe der Zeit aufgezeichnet, um die Bildung und Stabilität des BBB-Modells zu bestimmen.
- Statistische Analyse wurde eingesetzt, um Kontroll- und Behandlungsgruppen zu vergleichen.
Hauptergebnisse
- Die Ergebnisse zeigten eine signifikante Reduktion der TEER-Werte nach Behandlung mit Kobaltchlorid, was auf eine beeinträchtigte BBB-Integrität hinweist.
- Die Studie zeigte das Potenzial der Verwendung von TER als zuverlässige Methode zur Beurteilung von Wirkstoffeffekten auf die BBB.
- Die Stabilität der Zellbarriere wurde am fünften Tag erreicht, was die Effektivität der Methode unterstreicht.
Schlussfolgerungen
- Diese Studie demonstriert einen vereinfachten und effektiven Ansatz zur Beurteilung der BBB-Integrität in der Wirkstoffentwicklung.
- Die Ergebnisse könnten das Verständnis von therapeutischen Interventionen für Erkrankungen des zentralen Nervensystems verbessern.
- Die beschriebenen Methoden könnten für breitere Anwendungen in der pharmakologischen Forschung angepasst werden.
Häufig gestellte Fragen
Chapters in this video
0:00
Introduction
1:17
Culture of bEnd·3 Cells and Cell Viability After CoCl2 Treatment
3:47
In Vitro Blood‐Brain Barrier Model Assembly for Measurement of TEER
7:24
Barrier Destruction and Statistical Analysis After TEER Measurement in an In Vitro Blood‐Brain Barrier Model
