LPS و ATP الناجم عن موت البلاعم THP-1 المتمايزة PMA والتحقق من صحتها
May 3rd, 2024
يعتمد هذا البروتوكول على الموت الناجم عن LPS و ATP لبلاعم THP-1 المتمايزة PMA. نستخدم قياس التدفق الخلوي لتحليل التلوين المزدوج Annexin V و 7-AAD للكشف عن موت الخلايا ، باستخدام الخلية بأكملها واستخدام المجهر الإلكتروني الماسح لمراقبة مورفولوجيا غشاء الخلية.
نحن نعالج الوفيات التي أدخلتها LPS و ATP لبلاعم THP-1 المتمايزة من PMA. لا تقتصر الوفيات التي أدخلها LPS و ATP على pryoptosis ولكن يمكن أن يحدث موت الخلايا المبرمج والتنخر أيضا. سيساعد هذا في فهم أفضل لموت الخلايا بعد تحفيز LPS و ATP ، واختيار طرق تجريبية أكثر ملاءمة.
تدرس تقنية Cryo-EM العديد من الهياكل الأخرى في الأنسجة والخلايا والكائنات الحية الدقيقة. يوفر Cryo-EM بيانات بنية أصلية جديدة للمجمعات الجزيئية المتنوعة. على سبيل المثال ، يمكن أن يساعدنا استخدام تقنيات Cryo-Em لإجراء إعادة بناء 3D في فهم خصائص الأجزاء المبرمج والأجزاء الميتة.
على الرغم من أن pryoptosis يعتبر مهيمنا في LPS وموت الخلايا الذي أدخله ATP ، لا يمكن للمرء تحديد تخصيص أشكال الموت هذه أو ما إذا كانت جميعها موجودة. سيكون التحقق من موت الخلايا المتنوعة وقياسها مجال بحثنا في المستقبل.
نظرة عامة
تبحث هذه الدراسة في آليات موت الخلايا في الخلايا البلعمية الكبيرة THP-1 المتمايزة بـ PMA والمحفزّة بالليبوبوليساكاريد (LPS) والأدينوسين ثلاثي الفوسفات (ATP). تشمل التقنيات الرئيسية القياس الخلوي ومجهر المسح الإلكتروني، مما يكشف عن خصائص الموت المبرمج، وموت الخلايا المبرمج، والموت المبرمج بالنخر.
مكونات الدراسة الرئيسية
مجال البحث
- آليات موت الخلايا
- بيولوجيا الخلايا البلعمية
- استجابات الالتهاب
الخلفية
- يمكن أن يؤدي LPS و ATP إلى مسارات مختلفة لموت الخلايا
- تخدم الخلايا THP-1 المتمايزة بـ PMA كنظام نموذجي
- فهم هذه المسارات يمكن أن يفيد في تصميم التجارب
الطرق المستخدمة
- القياس الخلوي لتحليل موت الخلايا
- الخلايا البلعمية الكبيرة THP-1 المتمايزة بـ PMA
- مجهر المسح الإلكتروني لمورفولوجيا الغشاء
النتائج الرئيسية
- أشار القياس الخلوي إلى زيادة موت الخلايا بعد تحفيز LPS/ATP
- أظهر مجهر المسح الإلكتروني خصائص الموت المبرمج مثل انتفاخ الغشاء
- لوحظت علامات إضافية لموت الخلايا المبرمج والموت المبرمج بالنخر
الخلاصات
- توضح هذه الدراسة تعقيدات آليات موت الخلايا في ظل الظروف الالتهابية
- تشير النتائج إلى فهم الاستجابات المناعية والأمراض ذات الصلة
