Name: מודל hypoxic אנצפלופתיה איסכמי של איסכמיה הלידה (וידאו) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-11-19T00:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 47 s
Description: למדו את מודל אנצפלופתיה איסכמית היפוקסית בגורים של עכברושי Sprague Dawley בגיל שבעה ימים. השיטה כוללת ליגציה של עורק הקרוטיד והיפוקסיה בחדר מבוקר לחקר פגיעה מוחית ניאונטלית.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

הממומן על ידי איגוד הלב האמריקני ואת מצעד הפרוטות.

פרוטוקול זה אושר על ידי טיפול בבעלי חיים מוסדיים ועדת השתמש באוניברסיטת סטנפורד פועלת לפי המכון הלאומי לבריאות הנחיות לשימוש בחיות מעבדה. עכברוש ילודים HIE מודל <ol style=";text-align:right;direction:rtl"><li style=";text-align:right;direction:rtl"> יום הודעה הלידה (PND) 7 Sprague-Dawley גורי חולדה (Charles River Laboratories, Inc, בווילמינגטון, MA) מורדמים באופן מלא עם isoflurane (Aerrane, בקסטר, Deerfield, IL;% 3-4 לזירוז ו 1-2% עבור תחזוקה). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> חתך קטן עשה בצוואר (Extra Thin איריס מספריים # 14088-10, פיין למדע כלי Inc, פוסטר סיטי, קליפורניה) כדי לחשוף את עורק התרדמה השמאלי משותף (CCA). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המרכז לאמנות עכשווית הוא ligated עם תפר 5-0 משי (5-0 משי, Ethicon, סומר, NJ). </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> החתך נסגר עם דבק cyanoacrylate (Elmers מוצרים Inc, קולומבוס, OH). החתך מכוסה קלטת הרדמה היא נעצרה. הגורים הם חזרו אל הסכר שלהם מותר להתאושש במשך 1-2 שעות. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> גורים ממוקמות אז בתא hypoxic המכיל חמצן 8% מאוזנת עם חנקן 92% עבור 100 דקות 37 ° C. 8 oxygen/92%% גז חנקן (Airgas, סקרמנטו, קליפורניה) זרימה דרך צינור לתוך הכלוב העכבר מצויד בכיסוי פלסטיק. הכיסוי עשוי להתאים לכלוב ויש לו שני חורים של 2 ס&quot;מ קוטר, אחד מהם לקבל את הצינור המחובר הטנק 8% חמצן גז אחר מאפשר הגז flowout. החדר ממוקם בתוך אמבט מים הוא התחמם לפני השימוש מדחום בתוכו חייב לרשום 37 ° C לפני תחילת היפוקסיה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> בתום 100 דקות של היפוקסיה, הגורים הם חזרו שוב אל סכר שלהם להחלמה. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> 24 שעות לאחר סיומה של היפוקסיה, הגורים מומתים על ידי הרדמה עמוקה עם isoflurane. רקמת המוח היא perfused עם מלח רגיל קר, ואחריו פתרון של TTC 1% קר פוספט pH שנאגרו מלוחים, 7.4 (Sigma כימית Co, סנט לואיס, מיזורי). TTC חייב להישמר מפני אור. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> המוח יוסרו מקורר למשך 1-2 דקות על קרח, לארבעה חלקים העטרה 3 מ&quot;מ זה מזה (רמות 1-4) נחתכים, החל rostrally ברמה של opticchiasm ו משפך, המתאים גבחת 1.8 ~ 2.0 מ&quot;מ רמת המוח עכבר מבוגר. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> פרוסות המוח שקועים פתרון TTC וטופחו על 37 מעלות צלזיוס למשך 8 דקות, ואחריו קיבעון paraformaldehyde 4% / PBS לילה. מכיוון TTC אור רגישים, לשמור על פרוסות מן האור בתקופה זו. </li><li style=";text-align:right;direction:rtl"> סעיפים מוכתם TTC נסרקים ו דיגיטציה. באמצעות תמונה J (NIH, Bethesda, MD), את הדברים הבאים נמדדים עבור כל רמה: אזור של אוטם (אזור בלא כתם), שטח של חצי הכדור ipsilateral, ועל שטח של חצי הכדור הנגדי. אחוז infarcted שטח לכל פרוסה מחושב: (באזור של האוטם / שטח של חצי הכדור ipsilateral) או 1, 2, 3, 4. נפח אחוז האוטם מחושב כסכום (1 + 2 + 3 + 4) * 3mm. תחומי פגיעה בקליפת המוח או striatal ניתן לכמת בנפרד באופן דומה. </li></ol> נציג תוצאות <img src="/files/ftp_upload/old/955_2008_9_2_2/955_Fig-01.png" alt="איור 1" width="660" height="190" /> באיור 1. נציג HIE העטרה רמות 1-4 מוכתם TTC. סעיפים TTC העטרה מוכתם להפגין שטח של האוטם (בלבן).

<ol><li>Rice, J. E. 3rd, Vannucci, R. C., Brierley, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influence+of+immaturity+on+hypoxic-ischemic+brain+damage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+neurology%22%5BJournal%5D)">The influence of immaturity on hypoxic-ischemic brain damage in the rat.</a> Annals of neurology. 9 (2), 131-141 (1981).</li>
<li>Vannucci, R. C., Vannucci, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Perinatal+Hypoxic-Ischemic+Brain+Damage%3A+Evolution+of+an+Animal+Model%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Perinatal Hypoxic-Ischemic Brain Damage: Evolution of an Animal Model.</a> Dev Neurosci. 27 (2-4), 81-86 (2005).</li>
<li>Bona, E., Hagberg, H., Loberg, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+effects+of+moderate+hypothermia+after+neonatal+hypoxia-ischemia%3A+short-+and+long-term+outcome%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatric+research%22%5BJournal%5D)">Protective effects of moderate hypothermia after neonatal hypoxia-ischemia: short- and long-term outcome.</a> Pediatric research. 43 (6), 738-738 (1998).</li>
<li>Trescher, W. H., Ishiwa, S., Johnston, M. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+hypothermia+and+hyperthermia+on+attentional+and+spatial+learning+deficits+following+neonatal+hypoxia-ischemic+insult+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Behavioural+brain+research%22%5BJournal%5D)">Effects of hypothermia and hyperthermia on attentional and spatial learning deficits following neonatal hypoxia-ischemic insult in rats.</a> Behavioural brain research. 151 (1-2), 209-209 (2004).</li>
<li>Mishima, K., Ikeda, T., Yoshikawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+post-hypoxic-ischemic+hypothermia+markedly+delays+neonatal+brain+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+development%22%5BJournal%5D)">Brief post-hypoxic-ischemic hypothermia markedly delays neonatal brain injury.</a> Brain development. 19 (5), 326-326 (1997).</li>
<li>Young, R. S., Olenginski, T. P., Yagel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+graded+hypothermia+on+hypoxic-ischemic+brain+damage%3A+a+neuropathologic+study+in+the+neonatal+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">The effect of graded hypothermia on hypoxic-ischemic brain damage: a neuropathologic study in the neonatal rat.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 14 (6), 929-929 (1983).</li>
<li>Bederson, J. B., Pitts, L. H., Germano, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+2%2C3%2C5-triphenyltetrazolium+chloride+as+a+stain+for+detection+and+quantification+of+experimental+cerebral+infarction+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Evaluation of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride as a stain for detection and quantification of experimental cerebral infarction in rats.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 17 (6), 1304-1304 (1986).</li>
<li>Cai, J., Kang, Z., Liu, W. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+therapy+reduces+apoptosis+in+neonatal+hypoxia-ischemia+rat+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+letters%22%5BJournal%5D)">Hydrogen therapy reduces apoptosis in neonatal hypoxia-ischemia rat model.</a> Neuroscience letters. 441 (2), 167-167 (2008).</li>
<li>Grow, J., Barks, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogenesis+of+hypoxic-ischemic+cerebral+injury+in+the+term+infant%3A+current+concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Clinics+in+perinatology%22%5BJournal%5D)">Pathogenesis of hypoxic-ischemic cerebral injury in the term infant: current concepts.</a> Clinics in perinatology. 29 (4), 585-585 (2002).</li>
<li>Aden, U., Halldner, L., Lagercrantz , H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aggravated+brain+damage+after+hypoxic+ischemia+in+immature+adenosine+A2A+knockout+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Stroke%3B+a+journal+of+cerebral+circulation%22%5BJournal%5D)">Aggravated brain damage after hypoxic ischemia in immature adenosine A2A knockout mice.</a> Stroke; a journal of cerebral circulation. 34 (3), 739-739 (2003).</li>
</ol>

המודל הלידה מכרסם HIE הוא מודל נקבע כי משחזר היפוקסיה מוחית המתרחשים בתקופה פרי הלידה של ילודים. מחקרים נרחבים אפיון היסטולוגית ו immunocytochemical הראו כי מכרסמים בן 7 היום יש את הבגרות המוח מקביל מודל בשליש השלישי העובר האנושי 7. המודל HIE מכרסם כבר אינפורמטיבי מאוד להבנת המנגנונים של פגיעה מוחית מ היפוקסיה פרי הלידה 2, שם התערבויות כגון היפותרמיה אומתו 3. מודל זה שלמות תחילה חולדות מותאם ולאחרונה לעכברים 8. ...

<table><tbody><tr><td>גורי חולדה מסוג Sprague-Dawley</td><td>בעל חיים</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>ניתוח</td><td>Baxter Internationl Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>גז 8% Oxygen/ 92% Nitrogen</td><td>ניתוח</td><td>Airgas</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride </td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8877</td><td></td></tr><tr><td>מלח פוספט רב-ערכי (PBS) pH 7.4 </td><td>ריאגנט</td><td>GIBCO, by Life Technologies</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>ריאגנט</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P6148</td><td></td></tr></tbody></table>

מודל hypoxic אנצפלופתיה איסכמי של איסכמיה הלידה

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-איסכמי אנצפלופתיה (HIE) הוא תוצאה של חנק מערכתית המתרחשים בלידה. עשרים וחמישה אחוזים של יילודים עם HIE לפתח sequelae neuropsychological חמור וקבוע, כולל פיגור שכלי, שיתוק מוחין ואפילפסיה. התוצאות הן הרסניות של HIE וקבוע, מה שהופך אותו קריטי לזהות ולפתח אסטרטגיות טיפוליות כדי להפחית פגיעה מוחית בתינוקות עם HIE. לשם כך, המודל עכברוש בילוד לפגיעה hypoxic-איסכמי במוח פותחה מודל זה המצב האנושי. המודל HIE היה תוקף לראשונה על ידי ואנוצ&#39;י ואח&#39; 1 ומאז נעשה שימוש נרחב כדי לזהות את המנגנונים של פגיעה מוחית כתוצאה הלידה היפוקסיה איסכמיה-2 ו לבדוק התערבויות טיפוליות פוטנציאל 3,4. המודל HIE הוא תהליך דו שלב כרוך קשירת של עורק התרדמה השמאלי משותף ואחריו חשיפה לסביבה hypoxic. זרימת הדם במוח (CBF) בחצי הכדור ipsilateral על עורק הצוואר ligated אינו פוחת בגלל זרימת דם בטחונות דרך המעגל של ויליס, אולם עם מתח חמצן נמוך, CBF בחצי הכדור ipsilateral מקטין באופן משמעותי ותוצאות פגיעה איסכמי חד צדדית . השימוש כלוריד-2,3,5 triphenyltetrazolium (TTC) להכתים ולזהות רקמת מוח איסכמי פותחה במקור עבור דגמים הבוגרת של איסכמיה מכרסם מוחין 5, והוא משמש כדי להעריך את מידת infarctin מוחין בנקודות זמן מוקדם של עד 72 שעות לאחר האירוע איסכמי 6. בסרטון הזה, אנחנו מדגימים את המודל hypoxic-איסכמי פגיעה במוח חולדה הלידה ואת הערכה של גודל האוטם באמצעות מכתים TTC.

המודל עכברוש הלידה לפגיעה hypoxic-איסכמי המוח הוא מודל ומבוססת של אנצפלופתיה הילוד האנושי איסכמי היפוקסי (HIE). במאמר זה, אנו מתארים את המודל של HIE ב שלאחר הלידה גורי חולדה.

אנצפלופתיה היפוקסית-איסכמית (HIE) היא תוצאה של אספיקסיה מערכתית המתרחשת בלידה. עשרים וחמישה אחוזים מילדות עם HIE מפתחים מצב חמור של...

כדי להשרות מודל זה של איסכמיה ואנצפאלופתיה היפוקסית, גורי חולדה מסוג Sprague Dawley ביום השביעי לאחר הלידה עוברים מיקרו-כירורגיה וקישירת העורק התהומי השמאלי (left common carotid artery ligation). לאחר תקופת התאוששות של שעה עד שעתיים, הגורים מוכנסים לתא היפוקסי בטמפרטורה של 37 °C למשך 100 דקות.הגורים מוחזרים לאחר מכן לאמם עד להמתתם ההומנית. לאחר שני שלבים של פרפוזיה סיסטמית, המוחות מוצאים ונחתכים לפרוסות בעובי של שלושה מילימטרים. הפרוסות נצבעות לאחר מכן באמצעות תמיסת 1% 2, 3, 5, tri fennel, tetra oleum chloride, או TTC, וזאת כדי לחשוף את שטח האוטם.שלום, אני Hi tango ממעבדת Andre במחלקה לנוירולוגיה ומדעי מערכת העצבים בבית הספר לרפואה של אוניברסיטת סטנפורד. היום נראה לכם פרוצדורה למודל של פגיעה מוחית היפוקסית-איסכמית בילודים. אנו משתמשים בפרוצדורה זו במעבדה שלנו כדי לחקור את המכניזם של אנצפלופתיה היפוקסית-איסכמית במוח של ילודים, במטרה סופית לפתח טיפולים חדשים.אם כך, נתחיל. כדי להתחיל את הפרוצדורה, הרדימו באופן מלא גור חולדה מסוג spray dolly ביום postnatal שבע. להרדמה ב-ISO fluorine, נשתמש ב-4% לצורך השראה וב-1% עד 2% לצורך תחזוקה.לאחר מספר דקות, בצעו בדיקת צביטה באצבע כדי לוודא שהגור נמצא תחת הרדמה. לאחר מכן, סטריליזרו את צווארו של הגור באמצעות מקלוני צמרon המטופלים ב-10% povidone iod

the-hypoxic-ischemic-encephalopathy-model-of-perinatal-ischemia

Research

JoVE Journal

Biology

ביולוגיה

מודלים של בעלי חיים גדולים יש ערכי translational טובים בבחינת הפיסיולוגיה ופרמקולוגיה של חנק ילוד. שימוש חזירונים יילוד, אנו מפתחים פרוטוקול ניסוי, כדי לדמות חנק יילודים שיש יתרונות של לימוד פרמטרים המודינמיים המערכתיים ואזוריים, תחבורת חמצן עם מסלולים ומתאמי יוכימיים ופתולוגית.

דגם חזירים של חנק ילודים

הסרטון מדגים את ההליך ליצירת מודל עכבר לחקר פגיעה מוחית היפוקסית-איסכמית בילוד. הוא מתאר את הצעדים לגרימת איסכמיה כירורגית וחשיפת בעל החיים להיפוקסיה כדי להחמיר נזק מוחי. לבסוף, הוא מראה כיצד להעריך את נגעי המוח המתקבלים, ולהבטיח שמודל העכבר מוכן לחקירה מדעית נוספת.

הקמת מודל עכברי של פגיעה מוחית היפוקסית-איסכמית בילוד

מקור: Jantzie, L. L., et. al. מידול אנצפלופתיה של פגות באמצעות היפוקסיה-איסכמיה טרום לידתית עם ליפופוליסכריד תוך מי שפיר בחולדות. J. Vis. Exp. (2015)סרטון זה מדגים פרוטוקול לגרימת מצבים היפוקסיים-איסכמיים ודלקתיים בחולדות עובריות על ידי הגבלת זרימת הדם ברחם והזרקת LPS, מודלים של דלקת עצבית ושיבוש התפתחות המוח הרלוונטיים למחקרי לידה מוקדמת.

השראת מצבים היפוקסיים-איסכמיים ודלקתיים למודל אנצפלופתיה בחולדות טרום לידתיות

ניתן לחקור אנצפלופתיה היפוקסית-איסכמית בעקבות חנק סביב הלידה באמצעות מודלים של בעלי חיים. אנו מדגימים את ההליכים הדרושים לביסוס מודל חזרזיר של אנצפלופתיה היפוקסית-איסכמית בילודים.

דגם חזרזיר של ילודים חוסר חמצן-איסכמי אנצפלופתיה

מודלים של שבץ טרומבואמבולי הם כלים חיוניים לאופטימיזציה של הטיפול בתיעול מחדש. כאן אנו מדווחים על מודל שבץ מוחי פקקתי המבוסס על עלבון מוחי היפוקסי-איסכמי חולף (tHI), המעורר פקקת ואוטם, ומגיב בחיוב לפיברינוליזה בתיווך מפעיל פלסמינוגן רקמות (tPA) בחלון טיפולי הדומה לאלו בחולי שבץ מוחי.

דגם שבץ טרומבוטיים בהתבסס על היפוקסיה-איסכמיה מוחית חולפת

אנצפלופתיה של פגות מקיפה את ההפרעות במערכת העצבים המרכזית הקשורות לפגיעה מלידה מוקדמת. דוח זה מתאר מודל חולדה רלוונטי מבחינה קלינית של איסכמיה מערכתית חולפת ברחם ומתן ליפופוליסכריד תוך מי שפיר (LPS) המחקה כוריואמניוניטיס, ואת ההשפעה הקשורה של גירויים זיהומיים ותת-עירוי שליה על התפתחות מערכת העצבים המרכזית.

דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

שבץ יילודים הוא גורם משמעותי לפגיעה מוחית מוקדמת הדורש מודל תרגומי עם דפוסי פגיעה מוקדית עקביים ויכולת שחזור גבוהה על מנת לאפשר מחקר. מחקר זה מתאר את ההליך הכירורגי המפורט ליצירת פגיעת איסכמיה-רפרפרפוזיה מוקדית חד-צדדית שאינה דימומית במכרסמים בעלי ערך לטווח מלא.

עורקי חלוף דגם ספיג תיכון שיתוק של שבץ ילודים אצל חולדות P10

ביצענו חד-צדדית העורק הראשי סגר ביום כמחנכת CD 7-10-1 עכבר הגורים כדי ליצור מודל neonatal לפציעה hypoxic-איסכמי (איץ ' אי), חקר את ההשפעות של פגיעה מוחית HI. למדנו neurobehavioral פונקציות אלו עכברים לעומת עכברים רגילים שאינם המופעלים.

Neurobehavioral הערכות במודל של עכברים של פגיעה מוחית לפציעה Hypoxic-איסכמי Neonatal

השיטה מתארת דלקת-רגישות ארוי-איסכמי ופגיעה המוח hyperoxic ב P17 חמוס למודל האינטראקציה המורכבת בין דלקת ממושכת ופגיעה המוח חמצוני מנוסה במספר תינוקות טרום לטווח מאוחר.

מודל של החמוס של דלקת-מארוי מאוחר לטווח קדם-הסכמי פגיעה במוח

כתב יד זה מתאר שיטה להקלטות EEG וידאו מתמשכות באמצעות אלקטרודות עומק מרובות בעכברים יילודים העוברים היפוקסיה-איסכמיה.

אלקטרואנצפלוגרמה וידאו רציפה במהלך היפוקסיה-איסכמיה בעכברים יילודים

למדו את מודל אנצפלופתיה איסכמית היפוקסית בגורים של עכברושי Sprague Dawley בגיל שבעה ימים. השיטה כוללת ליגציה של עורק הקרוטיד והיפוקסיה בחדר מבוקר לחקר פגיעה מוחית ניאונטלית.

מודל hypoxic אנצפלופתיה איסכמי של איסכמיה הלידה

גלה סרטונים נוספים