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Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
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JoVE Science Education Basic Methods in Cellular and Molecular Biology
The ELISA Method
  • 00:00Overview
  • 00:43ELISA: Components and Principles
  • 04:03Running an ELISA
  • 07:18Applications
  • 09:53Summary

Il Metodo ELISA

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Overview

Un saggio di immunoassorbimento enzimatico (ELISA) viene in genere eseguito per rilevare la presenza e/o la quantità di una proteina bersaglio di interesse all’interno di un campione sperimentale. Il rilevamento della proteina bersaglio è reso possibile dagli anticorpi, che rendono l’ELISA un test immunologico. Attraverso una serie di fasi di incubazione e lavaggio, questi anticorpi, che sono spesso collegati, o coniugati, a un enzima, rileveranno il rivestimento proteico del fondo di un pozzo su una piastra di microtitolazione. Se esposto a un substrato, l’enzima legato agli anticorpi causerà un cambiamento di colore, indicando così la presenza della proteina di interesse nel campione.

In questo video, viene spiegata la teoria alla base del funzionamento degli ELISA, inclusa una discussione sul legame degli anticorpi primari e secondari e sull’importanza delle fasi di blocco. La teoria è seguita dalla pratica, mentre il video progredisce verso una spiegazione della procedura passo-passo. Infine, vengono introdotte varianti dell’ELISA standard come il sandwich e gli ELISA competitivi e vengono spiegate le applicazioni reali di questo metodo, come nei test di gravidanza da banco.

Procedure

L’ELISA, o saggio immunoassorbente enzimatico, è un metodo ampiamente utilizzato per determinare la presenza o l’assenza di una specifica proteina bersaglio. Attraverso una serie di fasi di lavaggio e legame, un anticorpo coniugato, o collegato, a un enzima riconoscerà una proteina bersaglio sul fondo di una piastra a 96 pozzetti. Quando il substrato viene aggiunto al campione, si verificherà una reazione enzimatica, causando un cambiamento di colore che consente l’identificazione e la quantificazione della prot…

Disclosures

No conflicts of interest declared.

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JoVE Science Education Database. JoVE Science Education. The ELISA Method. JoVE, Cambridge, MA, (2023).

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