Grootschalige immunodetectie van target eiwitten in het hele primaat hersenen is mogelijk door het gebruik van nieuwe weefsel inbedden en snijden methoden gecombineerd met het gebruik van creatieve apparatuur voor batch kleuring van meerdere vrij zwevende delen op een gegeven moment.
Een abonnement op JoVE is vereist om deze inhoud te bekijken. Log in of start vandaag met uw gratis proefperiode.
Methodenartikel
Batch Immunokleuring Grootschalige eiwitdetectie in de Whole Brain Monkey
In dit artikel
Samenvatting
Samenvatting
Immunohistochemie (IHC) is een van de meest gebruikte laboratoriumtechnieken voor de detectie van doeleiwitten
Protocol
Immunohistochemisty is een van de meest gebruikte technieken voor het karakteriseren van proteïne-expressie in de hersenen van verschillende experimentele diermodellen. Het is relatief eenvoudig om een systematische immunohistochemische procedures te voeren op de hersenen van knaagdieren en andere gemeenschappelijke experimentele modellen met vergelijkbare hersengrootte. Er is echter geen gepubliceerde werk aan onze kennis, dat een volledig overzicht van het uitvoeren van een dergelijke immunodetectie procedures voor een heel aap hersenen zorgt. Wat volgt is een gedetailleerde beschrijving van hoe je een hele aap hersenen voor te bereiden op grootschalige immunohis....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Discussie
Er zijn twee belangrijke stappen in deze procedure dat grootschalige detectie van eiwitten in een hele aap hersenen mogelijk te maken. Een daarvan is de inbedding en snijden protocol, dat blijft de eigen kennis van de NSA. De andere is het gebruik van vlekken gerechten en manden door HistoTools. Deze laatste zorgt voor eenvoudige en snelle afhandeling van een groot aantal (~ 40) delen op een bepaald tijdstip. Het biedt ook de middelen voor het behandelen van alle secties gelijkmatig over de hersenen en zorgt voor een we.......
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Openbaarmakingen
De auteurs hebben niets te melden.
Dankbetuigingen
We zijn dankbaar voor Frank Ervin, Roberta Palmour en het personeel van de Gedragswetenschappen Stichting Laboratoria gevestigd in St. Kitts, West-Indië, voor hun blijvende steun van onze primaat werk. Dit werk werd ondersteund door een beurs van fragiele X Research Foundation of Canada (FXRFC) naar SZ en - exploitatiesubsidies van de Canadese Institutes of Health Research (AC) en de Nationale Engineering en Research Council of Canada (MP).
....Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Materialen
| Naam | Bedrijf | Catalogusnummer | Opmerkingen |
|---|---|---|---|
| anti-FMRP monoklonaal antilichaam | Chemicon International | MAB2160 | Vereist antigeenherstel in gefixeerd weefsel. |
| anti-NeuN monoklonaal antilichaam | Chemicon International | MAB377 | N/A |
| anti-Neurofilament H monoklonaal antilichaam | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/A |
| Antigen Unmasking Solution | Vector Laboratories | H-3300 | N/A |
| Normaal paardenserum | Invitrogen | 16050122 | 500 mL |
| Biotinylated Anti-Mouse IgG (H+L), geproduceerd in paard | Vector Laboratories | BA-2000 | |
| VECTASTAIN ABC Kit (Standard) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1.5 mg |
| Kleurbak voor drijvende coupes | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm |
| Kleurtransportmandje | HistoTools | 100012 | groot (past in bak van 12 x 65 mm) |
| Triton X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/A |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/A |
Referenties
- Guide to the Care and Use of Experimental Animals. Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. , Canadian Council on Animal Care. Ottawa. (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of ....
Toegang beperkt. Log in of start een proefperiode om deze inhoud te bekijken.
Herprints en machtigingen
