A gran escala inmunodetección de las proteínas diana a través del cerebro de los primates todo es posible mediante el empleo de tejidos novedosos métodos de inclusión y corte en combinación con el uso de aparatos creativas para la tinción de lotes de varias secciones de flotación libre en un momento dado.
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Artículo de método
Lote de inmunotinción para la detección de proteínas a gran escala en el cerebro del mono entero
En este artículo
Resumen
Resumen
Inmunohistoquímica (IHC) es una de las técnicas de laboratorio más utilizados para la detección de proteínas diana
Protocolo
Inmunohistoquímica es una de las técnicas más utilizadas para la caracterización de la expresión de proteínas en el cerebro de los diversos modelos de experimentación animal. Es relativamente fácil de llevar a cabo procedimientos sistemáticos de inmunohistoquímica en el cerebro de los roedores y otros modelos experimentales común con el tamaño del cerebro similar. Sin embargo, no hay ningún trabajo publicado en nuestro conocimiento que proporciona una explicación detallada de cómo llevar a cabo dichos procedimientos de inmunodetección a través de un cerebro de mono entero. Lo que sigue es una descripción detallada de cómo preparar un cerebro del mono todo a gran esca....
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Discusión
Hay dos pasos fundamentales en este procedimiento que hacen a gran escala de detección de proteínas en el cerebro de un mono completo posible. Uno de ellos es el protocolo de inclusión y corte, que sigue siendo el conocimiento de su propiedad de la NSA. El otro es el uso de platos de tinción y cestas proporcionada por HistoTools. Este último permite un manejo fácil y rápido de muchas (~ 40) secciones en un momento dado. También proporciona los medios para tratar de manera uniforme a todos los sectores a través del cereb.......
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Divulgaciones
Los autores no tienen nada que revelar.
Agradecimientos
Estamos muy agradecidos a Frank Ervin, Palmour Roberta y el personal de Laboratorios de Ciencias de la Conducta fundación con sede en San Cristóbal, de las Indias Occidentales, por su continuo apoyo a nuestro trabajo de primates. Este trabajo fue apoyado por una beca de la Fundación X Frágil de Investigación de Canadá (FXRFC) a SZ y - subvenciones de funcionamiento de los Institutos Canadienses de Investigación en Salud (AC) y la Nacional de Ingeniería y de Investigación de Canadá (MP).
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| anticuerpo monoclonal anti-FMRP | Chemicon International | MAB2160 | Requiere recuperación de antígeno en tejido fijado. |
| anticuerpo monoclonal anti-NeuN | Chemicon International | MAB377 | N/A |
| anticuerpo monoclonal anti-neurofilamento H | Sternberger Monoclonals Inc. | SMI32 | N/A |
| Solución desenmascarante de antígenos | Vector Laboratories | H-3300 | N/A |
| suero normal de caballo | Invitrogen | 16050122 | 500 mL |
| Anti-IgG (H+L) biotinilado, producido en caballo | Vector Laboratories | BA-2000 | |
| Kit VECTASTAIN ABC (Estándar) | Vector Laboratories | PK-4000 | 1.5 mg |
| recipiente para tinción de secciones flotantes | HistoTools | 10009 | 12 x 65 mm |
| canasta de transporte para tinción | HistoTools | 10012 | grande (para recipiente de 12 x 65 mm) |
| Tritón X-100 | Fisher Scientific | P8514B | N/A |
| DAB | Fisher Scientific | AC11209-0050 | N/A |
Referencias
- Guide to the Care and Use of Experimental Animals. Olfert, E. D., Cross, B. M., McWilliam, A. A. , Canadian Council on Animal Care. Ottawa. (1993).
- Devys, D., Lutz, Y., Rouyer, N., Bellocq, J. P., Mandel, J. L. The FMR-1 protein is cytoplasmic, most abundant in neurons and appears normal in carriers of ....
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Reimpresiones y permisos
