أسلوب الخميرة مستعمرة التضمين

Summary

وهناك طريقة لتضمين مستعمرات الخميرة السماح لsectioning المجهر الضوئي والإلكترون. هذا البروتوكول يسمح بتحديد توزيع الخلايا والخلايا sporulated الكاذبة داخل المستعمرات توفير أداة جديدة لفهم تنظيم أنواع الخلايا داخل المجتمع الفطرية.

Abstract

الزخرفة من أنواع مختلفة من الخلايا في الأجنة هي الآلية الرئيسية في عملية التنمية metazoan. مجتمعات الكائنات الدقيقة ، مثل المستعمرات والأغشية الحيوية أيضا عرض نماذج من أنواع الخلايا. على سبيل المثال ، في الخميرة س. البيرة ، لا الخلايا والخلايا sporulated الكاذبة موزعة بشكل متجانس في المستعمرات. لا تزال على أهمية وظيفية من الزخرفة والآليات الجزيئية التي تكمن وراء هذه الأنماط غير مفهومة.

أحد التحديات فيما يتعلق بالتحقيق في أنماط من أنواع الخلايا في مستعمرات الفطرية هو أنه على عكس الأنسجة metazoan ، ونسبيا في مستعمرات الخلايا ضعيفة المرفقة مع بعضها البعض. بصفة خاصة ، مستعمرات فطرية لا تحتوي على نفس المستوى واسعة من المصفوفة خارج الخلية الموجودة في معظم الأنسجة. نحن هنا التقرير على طريقة لدمج وsectioning مستعمرات الخميرة التي تكشف عن أنماط الداخلية من أنواع الخلايا في هذه المستعمرات. ويمكن استخدام هذه الطريقة لتحضير المقاطع سميكة (0.5 μ) مفيدة للفحص المجهري والمقاطع الخفيفة رقيقة (0،1 μ) مناسبة لانتقال المجهر الإلكتروني. ويمكن بسهولة زقاق الكاذبة خلايا يمكن تمييزها عن خلايا الخميرة بيضوي الشكل بواسطة المجهر الضوئي ، في حين أن بنية الداخلية لهذه الخلايا التي يمكن تصور EM.

يستند هذا الأسلوب على المستعمرات المحيطة بها مع آغار ، تسلل لهم Spurr المتوسطة ، ثم sectioning. المستعمرات التي يبلغ قطرها في حدود 1-2 مم هي مناسبة لهذا البروتوكول. بالإضافة إلى الرؤية والداخلية من المستعمرات ، وطريقة تسمح برؤية منطقة مستعمرة أن يغزو آغار الكامنة.

Protocol

1. عزل مستعمرة والتثبيت

1. احتضان 300 المستعمرات على وسط آغار للمرة أشارت (مستعمرة معزولة ينبغي 1-2 مم في القطر).
2. إزالة مستعمرة (حتى الوجه) والمتوسطة الكامنة باستخدام ملعقة الضيقة.
3. المكان عدة قطرات من 2 ٪ آغار 42 درجة مئوية على شريحة المجهر باستخدام 1 مل pipetman طرف ومستعمرة على الفور مكان على وجه آغار حتى قبل أن يتصلب.
4. المكان عدة قطرات من 2 ٪ آغار 42 درجة مئوية على مستعمرة والسماح ليصلب.

Discussion

طريقة عرض يكشف عن الهياكل الداخلية للمستعمرات. لأن الطريقة فعالة في تحديد أنماط من أنواع الخلايا في مجموعة س. سلالات خميرة مع morphologies مستعمرة مختلفة ، وأيضا في الأنواع متناقض S. ذات الصلة ⁵ ، الأسلوب ومن المرجح أيضا أن تعمل على نطاق واسع من الفطريات والكائنات الدقيقة الأخرى.

خطوة واحدة حاسمة لنجاح هذه الطريقة لضمان أن تكون مستعمرة بأكملها ، بما في ذلك الجزء العلوي من مستعمرة ، وا.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
علوم مجهر	رابع أكسيد الأوزميوم	RT 19152
قوالب تضمين السيليكون	فيشر Scientific	NC 9975029
راتنجات الإيبوكسيد الحلقية	علوم المجهر الإلكتروني	RT 15004	ERL 4221
راتنجات الايبوكسي	علوم المجهر الإلكتروني	RT 13000	DER 736
نونينيل السكسينيك أنهيدريد	علوم المجهر الإلكتروني	RT 19050	NSA
2-Dimethyl amin &# 8211 ؛ ثانول	الإلكترون المجهر علوم	RT 13300	DMAE
تصاعد وسائل الإعلام	KPL Inc	71-00-16
عجلة دوارة	تيد بيلا ، Inc.	بيلكو 1055
ميكروتوم	لايكا مايكروسيستمز	ألترا كت إس