Synthèse combinatoire des protéines et de décharge à haut débit à partir du film polymère et bibliothèques nanoparticules

Résumé

Cette méthode décrit la synthèse combinatoire du film polyanhydride biodégradable et bibliothèques nanoparticules et la détection à haut débit de la libération de protéines à partir de ces bibliothèques.

Résumé

Polyanhydrides sont une classe de biomatériaux avec une excellente biocompatibilité et les capacités d'administration de médicaments. Même si elles ont été largement étudiés avec conventionnelle d'un échantillon-à-la-fois des techniques de synthèse, une étude plus récente à haut débit approche a été développée permettant la synthèse et le test des grandes bibliothèques de polyanhydrides ^1. Cela facilitera l'optimisation plus efficace et processus de conception de ces biomatériaux pour la délivrance de médicaments et de vaccins. La méthode présentée dans ce travail décrit la synthèse combinatoire du film polyanhydride biodégradable et bibliothèques nanoparticules et la détection à haut débit de la libération de protéines à partir de ces bibliothèques. Dans ce procédé robot actionné (figure 1), des actionneurs linéaires et les pompes à seringue sont commandés par LabVIEW, qui permet à un protocole automatisé mains libres, ce qui élimine une erreur d'utilisateur. De plus, cette méthode permet la fabrication rapide de bibliothèques polymères micro-échelle, rougepremière utilisation de la taille du lot tout en conduisant à la création de systèmes de polymères multivariée. Cette approche combinatoire pour la synthèse de polymères facilite la synthèse de jusqu'à 15 différents polymères en une quantité équivalente de temps il faudrait pour synthétiser un polymère classique. En outre, la banque combinatoire de polymère peut être fabriqué dans des géométries vides ou protéine-chargé notamment des films ou des nanoparticules lors de la dissolution de la bibliothèque de polymère dans un solvant et précipitation dans un non-solvant (nanoparticules) ou par séchage sous vide (pour les films). Lors du chargement d'une protéine conjugué à un fluorochrome dans les bibliothèques de polymères, cinétique de libération de protéines peut être évalué à haut débit en utilisant une méthode de détection basée sur la fluorescence (figures 2 et 3) comme décrit précédemment ^1. Cette plate-forme combinatoire a été validé avec des méthodes conventionnelles ² et le film polyanhydride et les bibliothèques des nanoparticules ont été caractérisées par cellulaire in vitro, la production de cytokines, marqueurs expression à la surface, l'adhérence, la prolifération et de la différenciation et de biodistribution in vivo et mucoadhésion ^1-11. La méthode combinatoire développée ici permet la synthèse de polymères à haut débit et la fabrication de protéines chargé de nanoparticules et de cinémathèques, qui peut, à son tour, être examinés in vitro et in vivo pour l'optimisation de la performance biomatériau.

Protocole

1. Combinatoire Polymer Bibliothèque de synthèse (variant en chimie des polymères) - voir Figure 1 pour l'installation robotisée

1. Dissoudre chaque monomère dans le solvant approprié (concentration = 25 mg / ml) et charger chaque gaz dans une seringue étanche à 10cc.
2. Fixer les tubes de verrouillage résistant aux solvants leurres capillaires à la fin de chaque seringue.
3. Placez les seringues sur les pompes à seringues (New Era Pompes seringues programmables) et la verrouiller en position.
4. Définir les actionneurs linéaires (Zaber) à la position de départ.
5. Grâce aux pinces support universel, positionne....

Discussion

Connaissance des conditions de synthèse nécessaires et les températures de transition vitreuse _(Tg) des polymères étant synthétisés sont indispensables pour la fabrication de la bibliothèque. Si la _Tg est inférieure à la température ambiante, l'étape de fabrication de nanoparticules peuvent avoir besoin d'être effectuée dans un environnement à température contrôlée en dessous de la T _g des polymères. En outre, des précautions doivent être prises pour s'assurer que tout le mat.......

Matériaux

Liste des matériaux utilisés dans cet article

Nom	Entreprise	Numéro de catalogue	Commentaires
Nom	Entreprise	Numéro de catalogue
Motorisée XYZ étape: 3x T-LSM050A, course 50 mm par axe	Technologies Zaber	T-XYZ-LSM050A-KT04
NE-1000 Pompe à seringue unique	Nouveaux systèmes de pompage Era	NE-1000
Pyrex * Vista * Rimless réutilisables Tubes de culture en verre	Corning	07-250-125
Cuves en verre	Stratégies scientifiques	G102
LabVIEW	National Instruments	776671-35
Seringues étanches aux gaz SGE, Luer Loc	Sigma Aldrich	509507
U96 DeepWell plaques 1,3 ml et 2,0 ml	Thermo Scientific: Nunc	278743
Tapis de capitalisation ainsi	Thermo Scientific: Nunc	276000
Typhoon 9400	GE Healthcare	63-0055-79
Whatman Grade 50 cercles de 90 mm	Whatman	1450-090