Summary
يوصف أسلوب لإدارة المخدرات على الفئران الأنف مستيقظا لغرض استهداف الدماغ. هذا الأسلوب يسمح للتكرار الجرعات على مدى فترات طويلة داخل الأنف باستخدام إدارة المخدرات من دون تخدير، والأنف إلى الدماغ مع التعرض تسليم النظامية الحد الأدنى.
Abstract
الأنف الإدارة هو وسيلة لإيصال العوامل العلاجية للجهاز العصبي المركزي (CNS). فمن غير الغازية ويسمح الجزيئات الكبيرة التي لا تعبر الوصول حاجز الدم في الدماغ إلى الجهاز العصبي المركزي. وتستهدف العقاقير مباشرة إلى الجهاز العصبي المركزي مع التسليم داخل الأنف، والحد من التعرض النظامية وغير المرغوب فيها وبالتالي الآثار الجانبية الجهازية 1. التسليم من الأنف إلى CNS يحدث في غضون دقائق على طول الممرات العصبية الشمية على حد سواء ومثلث التوائم عبر الطريق خارج الخلية و لا يتطلب المخدرات لربط أي مستقبلات أو النقل محواري 2. تسليم داخل الأنف هو وسيلة إعلامية على نطاق واسع ويستخدم حاليا في التجارب السريرية البشرية 3.
تسليم داخل الأنف من الأدوية في النماذج الحيوانية يسمح لتقييم أولي لتوزيع الدوائية والفعالية. مع الفئران، فمن الممكن لإدارة المخدرات للحيوانات مستيقظا (غير تخدير) على أساس منتظم باستخدام specialized قبضة داخل الأنف. تسليم مستيقظا هو مفيد لأنه يسمح على المدى الطويل المزمن الجرعات بدون تخدير، فإنه يأخذ وقتا أقل من التخدير مع، ويمكن تعلمها والذي قام به الكثير من الناس أن فرق من الفنيين أرقام جرعة كبيرة من الفئران يمكن في فترات قصيرة. وقد ثبت فعالية العلاجات تدار الأنف بهذه الطريقة على الفئران في عدد من الدراسات بما في ذلك الأنسولين في السكري نماذج الماوس 4-6 و ديفيروكسامين في نماذج الماوس الزهايمر. 7،8
يمكن تعلم قبضة الأنف بالنسبة للفئران، ولكن ليست سهلة وتتطلب الممارسة والمهارة، وقبضة دقيق لتسليم المخدرات بشكل فعال إلى الدماغ وتجنب الصرف إلى الرئة والمعدة. وضبط النفس الفئران باليد باستخدام القفا تعديل في اليد غير المسيطرة مع الرقبة عقد بالتوازي مع الكلمة، في حين يتم تسليم المخدرات مع pipettor استعمال اليد المهيمنة. وعادة ما يستغرق 3-4 أسابيع من التأقلم على التعامل مع الفئران قبلويمكن عقد مع هذه قبضة دون رد الإجهاد. قمنا بإعداد هذا الفيديو إن الرب لجعل هذه التقنية أكثر سهولة تسليم داخل الأنف.
Protocol
1. التأقلم لمناولة الجرعات داخل الأنف على الفئران استيقظ
مقدمة
يجب التعامل مع الفئران لتأقلم لمدة 2-4 أسابيع قبل بدء الجرعات داخل الأنف. التأقلم لمعالجة أمر مهم، لأنه يساعد على ضمان موقف الجسم الصحيح لأقصى قدر من الفعالية من مستيقظا تسليم المخدرات داخل الأنف. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن أن الفئران التي لم يتم بشكل صحيح اعتاد في هذه العملية يكون رد فعل القلق الشديد بعد الجرعات. يجب أن الفئران تنفق حوالي 2-3 أيام في كل من تسع خطوات قبل التقدم إلى الخطوة التالية، تبعا الراحة الحيوان للمعالجة. وينبغي استخدام الماوس، مستوى التوتر كمقياس للتقدم. هذا يعني رصد حركات الماوس،، وكمية / تواتر التبرز والتبول، يرتجف، والعض. إذا كان الماوس لديه استجابة عالية الإجهاد، والبقاء على هذه الخطوة قبل التقدم إلى أخرى حتى يتم تقليل استجابة. عينة التأقلم SCHويمكن رؤية edule في الجدول 1. يجب التأقلم من الفئران التقدم من خلال خطوات مرة واحدة في اليوم التالي. تنفيذ هذه الخطوات أكثر من مرة في اليوم الواحد، في محاولة لتسريع التأقلم، غير مستحسن.
- ضع الماوس في كف اليد لمدة دقيقتين إلى ثلاث دقائق، أي أكثر من قدم واحدة فوق قمة القفص، والقفز الحيوانات كثيرا خلال هذه الخطوة تمهيدية. إذا كان الماوس يحاول الزحف من يد وذراع واحد حتى، رفع ببساطة الماوس من قاعدة الذيل ووضعه مرة أخرى في يد واحدة.
- ضع الماوس في كف اليد لمدة ثلاث دقائق والحيوانات الأليفة الحيوان برفق. الحيوانات الأليفة الماوس إتجاهي من الرأس إلى الذيل، في حين يسمح للحيوان على التنقل بحرية.
- ضع الماوس في كف اليد لمدة ثلاث دقائق في حين تدليك خلف الأذنين (معسر طفيفة معا الجلد في الجزء الخلفي من الرقبة باستخدام الإبهام والإصبع المؤشر).
- عقد / لىFT الماوس من القفا من عنقه لمدة 30 ثانية، وترك بقية الماوس على أعلى القفص لمدة 30 ثانية قبل تكرار عقد مرة أخرى.
- عقد الماوس باستخدام قبضة داخل الأنف، والتي وصفها في القسم 2، ولكن لا قلب الحيوان (إكمال ما يصل إلى الخطوة 2.4). عقد مثل هذا الحيوان لمدة 30 ثانية والعودة الى الافراج أعلى القفص. كرر مرة ثانية بعد فترة راحة مدتها دقيقة واحدة.
- عقد الماوس مع قبضة داخل الأنف كما هو موضح في القسم 2، بما في ذلك الحيوان وعكس ذلك الجانب البطني ومواجهة نحو السقف. تأكد من أن الرقبة الحيوان موازية لارضية الغرفة. تشغل هذا المنصب لمدة 30 ثانية. كرر هذا مرة ثانية بعد فترة راحة مدتها دقيقة واحدة. فإن بعض الفئران تقاوم قبضة داخل الأنف أكثر من غيرها، وخصوصا عندما يستخدم لأول مرة مع انعكاس في هذه الخطوة في التأقلم. إذا كان الماوس يحرر نفسه من قبضة، وطرح الماوس مرة أخرى على أعلى القفص وإعادة قبضة. تكرار إعادة قبضة إذا لزم الأمر، ولكن مراقبة مستوى الإجهاد من الماوس وإعادته إلى القفص إذا لزم الأمر. وثمة عامل آخر يمكن أن تلعب دورا في فقدان قبضة في هذه المرحلة من عملية التأقلم هي قلة خبرة من المتعاملين مع الحيوانات مع تقنية التوصيل داخل الأنف.
- عقد الماوس مع قبضة داخل الأنف، عكس، ضع لفترة وجيزة pipettor مع تلميح فارغ على كل منخر، ويشغل هذا المنصب لمدة 30 ثانية الحيوانات. كرر هذا بعد فترة راحة مدتها دقيقة واحدة.
- عقد الماوس مع قبضة داخل الأنف، عكس ذلك، وإدارة الأنف 6 ميكرولتر من المياه المالحة في n هل اليسار واليمين كما هو موضح في القسم 3 (من خلال الخطوة 3.7).
- عقد الماوس مع قبضة داخل الأنف، عكس ذلك، وإدارة الأنف 6 ميكرولتر من المياه المالحة في n هل اليسار واليمين مرتين وضع هذا الحيوان مرة أخرى على أعلى القفص بين بين، كما هو موضح في القسم 3.
2. قبضة داخل الأنف لمنع حركة الفئران استيقظ
- ضع الماوس سن أعلى القفص.
- مع الإبهام والسبابة من يدك المهيمنة، أمسك الماوس من ذيله. استخدام الخاص بك الأوسط، خاتم، والأصابع الخنصر، دبوس برفق الجزء السفلي من الجسم إلى الأعلى قفص (الشكل 1A). اسمحوا الماوس الاستيلاء على أشرطة تمتد برفق كما كنت الماوس خارج والاستيلاء أفضل القفا.
- باستخدام الإبهام والإصبع الأوسط على يد غير المهيمنة الخاص بك، قرصة الماوس بقوة في القفا (الجلد الزائد) خلف الرقبة والكتفين. سحب ما يصل على الجلد فضفاضة لجعل خيمة من الجلد عبر لوحي الكتف (1B الشكل). يستغرق الجلد أكبر قدر ممكن، ولكن يجب الحرص على عدم سحب ما يصل العضلات حيث سيؤدي ذلك إلى تسبب عدم ارتياح الماوس. توخي الحذر حتى لا تطبق الكثير من الضغط على القفص الصدري والعمود الفقري أو الحيوان. أن الإفراط في الضغط أو سحب من الجلد يؤدي إلى تثبيط التنفس في بعض الحالات.
- وضع بسرعة السبابة من اليد غير المسيطرة الخاصة بك على رأس الماوس، كماعلى مقربة من الأنف ممكن وسحب على الجلد (الشكل 1C، 1D). في نفس الوقت، حرك أصابع الإبهام والوسطى نحو الرأس لموقف الأمثل. من الناحية المثالية، ينبغي أن لا يكون الماوس قادرة على التحرك رأسه عموديا أو أفقيا.
- مع الحفاظ على قبضته على القفا، وتحويل الماوس على ظهره. يجب العودة الماوس، يكون في راحة يدك. اعتقادا راسخا ذيل الماوس، (بالقرب من قاعدة) ضد راحة يدك بأصابعك الماضيين (خاتم الخنصر و) لتحقيق الاستقرار في الماوس، أو قد التفاف أصابعك عبر الجزء الأسفل من الجسم (الشكل 1E، 1F).
- في هذه المرحلة التأكد من أن الرقبة الماوس، والذقن هي مسطحة وبالتوازي مع الكلمة. ينبغي أن تكون قريبة من الذقن زاوية 180 درجة مع الرقبة إلى أقصى حد ممكن للمساعدة في تسليم داخل الأنف. يمكن تغييرات طفيفة في زاوية يسبب هذا الدواء في نهاية المطاف في موقع خاطئ. تأكد من أن الفأر هو قادرا على التنفس من خلال مشاهدة البطن. الماوس SHOULD لا تكون قادرة على التحرك، ولكن يجب أن تكون مريحة وليس في أي ألم. إذا كنت ترى الرقبة الماوس، وجعل الذقن "V"، ثم أنت بحاجة الى قبضة من جديد.
3. تسليم داخل الأنف المخدرات على الفئران استيقظ
مقدمة
باستخدام قبضة داخل الأنف، وتقييد كل الماوس مرتين وعقد مع الرقبة بالتوازي مع الكلمة في حين بلغ حجم التداول تدار من 20-30 ميكرولتر من السائل. هذا المجلد هو آمنة وفعالة لصغار الفئران الكبيرة، ونحن عادة استخدام 24 ميكرولتر، والموصوفة في هذا البروتوكول. ويمكن استخدام أسلوب مستيقظا داخل الأنف في الفئران في أي عمر، على سبيل المثال في الفئران حديثي الولادة للبحوث علم الأعصاب التنموي. في الفئران حديثي الولادة، يجب استخدام أصغر حجم إجمالي (8 ميكروليتر) وحجم القطيرات (1 ميكرولتر) لاستيعاب حجم أصغر من تجويف الأنف. عادة يتم تسليم المخدرات لاثنين من الفئران في كل مرة، بالتناوب فترات الراحة لجعل الاستخدام الأمثل للوقت والحفاظ على سن الجدول الزمني. وانشاء تكون مختلفة قليلا اعتمادا على إذا كنت الجرعات الفئران الفئران أو مجموعة مساكن إيواء بشكل فردي. مع الفئران يضم بشكل فردي، فإنه من المفيد أن تضع جميع المواد الخاصة بك في بين أقفاص لمنع الفئران من العبور إلى الأعلى قفص أخرى. مع مجموعة تسكين الفئران، أن جرعة من القفص فقط. من المهم أن كل الماوس في قفص يضم المجموعة يتلقى نفس المعاملة داخل الأنف، واحتمال التلوث عبر اثنين من العلاجات المختلفة بسبب وجود طرد المخدرات في الهواء أو مع ملامسة الجلد. ويوصى بشدة أن تكون مطبوعة ورقة الجرعات مقدما، لتذكير الفنيين من مهام العلاج، لتسجيل أية ملاحظات من قطرات لم يرد عليها، لاحظ الصحة العامة كل حيوان، الخ.
خطوات
- إنشاء أقفاص حيث ينبغي أن يكون لجرعات، وإنشاء محطة الجرعات (الشكل 2).
- إزالة الماوس من القفص والحفاظ على أعلى القفص خلال الجرعات.
- التقاط الماوس باستخدام قبضة الأنف الموصوفة في القسم 2.
- باستخدام يدك المهيمنة، تحميل pipettor مع 6 ميكرولتر من المخدرات أو مركبة. وضع غيض من الأنف pipettor ملء قرب الماوس الأيسر، وعادة بزاوية 45 درجة (الشكل 1G، 1H). إذا كان لديك حل لزجة قد تحتاج إلى زيادة زاوية 90 درجة للان الدواء قد سبقت جانب الطرف ماصة بدلا من اتخاذ الهبوط. إذا لزج جدا، قد مسح تلميح ماصة بمنديل قبل طرد السائل مساعدة. إخراج ببطء المخدرات لتشكيل قطرات صغيرة مع ما يقرب من نصف حجم (3 ميكرولتر).
- يجب وضع قطرة الأنف قريبة بما فيه الكفاية لالماوس، بحيث الماوس يمكن استنشاق القطيرات. مباشرة بعد هذا الماوس يستنشق قطرة صغيرة، إخراج بقية المخدرات في الطرف ماصة لتشكيل قطرات صغيرة لآخر الماوس ليستنشق عن طريق الأنف نفسه عن ثانية 2-3 في وقت لاحق. تأكد لمشاهدة الفم. إذا كان هناك طق أي سائل في الفم، فإن انخفاض لا تجعل تماما في الأنف وتجدر الإشارة بذلك.
- عقد الماوس في هذا المنصب لمدة 15 ثانية. ويوصى بشدة أن يتم استخدام جهاز توقيت لتوحيد هذا الانتظار ثانية 15.
- كرر الخطوات 3،3 حتي 3،6 لفتحة الأنف اليمنى. إذا شمها أي يتسرب، ينبغي الاستعاضة هذا الانخفاض، وأشار.
- ضع الماوس مرة أخرى في أعلى قفصه لمدة 2 دقيقة. كرر العملية برمتها ابتداء من 2 دقيقة. بعد ولادة أول انخفاض. هذا يعطي الماوس أربع قطرات من 6 ميكرولتر كل يبلغ 24 ميكرولتر من الحل. ويمكن الاطلاع على الجدول الزمني للعينة الجرعات واحد أو اثنين في وقت واحد الفئران في الجدول 2.
- بعد الماوس قد تسلم كل قطرات، والعودة الماوس لقفصه.
4. تقنيات التعامل مع الحيوانات العام لالتأقلم و تسليم داخل الأنف من المخدرات على الفئران استيقظ
بعد كل التأقلم داخل الأنف أو الدورة الجرعات، يجب أن يكون إعطاء الفئرانNA علاج، مثل مع السلامة أو مقشر بذور عباد الشمس والتعزيز الإيجابي. يتم إعطاء يعامل كمكافأة ويشغلهم عن خدش أنوفهم، يحتمل أن تسبب إصابة أنفسهم. عند العمل مع مجموعة الفئران يضم ينبغي إسقاط يعامل بما فيه الكفاية لكل الماوس. قبل أن يعود إلى الحيوانات أقفاصها تأكد من استعادة أعشاش إلى دولهم الأصلية من أجل الحد من التوتر. عندما الجرعات الحيوانات مجموعة إيواء، يجب تغيير القفازات بين الجرعات من أقفاص حتى لا نقل رائحة المستعمرة من قفص إلى قفص مستعمرة، لأنها سوف تصبح عدوانية تجاه بعضهم البعض.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
هناك عدة طرق لتحديد مدى فعالية لاستخدام العقاقير. الأول هو لإدارة الأنف صبغة، مثل الهند أو الحبر الأزرق والميثيلين لتصور الصبغة بعد القتل الرحيم للحيوان داخل الظهارة الشمية وبعد إزالة الدماغ، ودخول CNS من خلال لوحة المصفوية. والثاني هو لقياس المخدرات تسليمها إما باستخدام بصمة الراديوية المسمى أو باستخدام ELISA الكشف عن جزيء الخالي من الملصقات. ويمكن الاطلاع على مثال جيد على توزيع المخدرات في الجهاز العصبي المركزي بعد إعطاء الفئران لمستيقظا في هانسون وآخرون 2012 7. نتوقع البصلة الشمية والعصب مثلث التوائم لتحتوي على نسبة عالية من المخدرات تسليمها. في 30 دقيقة بعد تناوله داخل الأنف من ديفيروكسامين ميكرومول 3.65، وكانت التركيزات في العصب مثلث التوائم العصب الشمي و29 ميكرومتر ميكرومتر و13 على التوالي. وسوف يكون واضحا تركيزات المخدرات في جميع مناطق الدماغ (في هذا المثال رنوقد تم قياس ه بنسبة 0.6 ميكرومتر إلى 4.1 ميكرومتر) مع تركيزات أعلى في المناطق التي تتلقى مدخلات من الأعصاب الشمية ومثلث التوائم. على سبيل المثال، سوف المناطق منقاري من القشرة تحتوي على تركيزات أعلى من القشرة الذيلية وبونس وسوف تحتوي على تركيزات أعلى من الدماغ المتوسط أو النخاع. في النخاع الشوكي ويلاحظ عموما التدرج تركيز المتحدر من عنق الرحم إلى العمود الفقري القطني (في هذا المثال الانحدار من 1.5 ميكرومتر إلى 2.0 ميكرومتر). إدارة الأنف يؤدي أيضا إلى تركيزات عالية من المخدرات تصل إلى السحايا والغدد الليمفاوية عنق الرحم. والطريقة الثالثة لإثبات فعالية التسليم لقياس استجابة سلوكية أو البيوكيميائية للدواء تدار. على سبيل المثال، أدى العلاج داخل الأنف ديفيروكسامين من الفئران المعدلة وراثيا الزهايمر في تحسين الأداء في مهمة الذاكرة المكانية 7 و الفسفرة من كيناز سينسيز الجليكوجين 3 بيتا 9.
| يوم | عمل | |
| 1 | M | عقد لمدة 2-3 دقائق ~ |
| 2 | تو | عقد لمدة 2-3 دقائق ~ |
| 3 | W | عقد والحيوانات الأليفة ~ 2-3 دقائق |
| 4 | ال | عقد والحيوانات الأليفة ~ 2-3 دقائق |
| 5 | F | قرصة طفيفة أو القفا |
| 6 | M | قرصة طفيفة أو القفا |
| 7 | تو | ورفع القفا |
| 8 | W | ورفع القفا |
| 9 | ال | الأنف قبضة |
| 10 | F | الأنف قبضة |
| 11 | M < / TD> | الأنف (IN) وعكس قبضة |
| 12 | تو | الأنف (IN) وعكس قبضة |
| 13 | W | في قبضة، المقلوب، ضع تلميح ماصة قرب الأنف |
| 14 | ال | في قبضة، المقلوب، ضع تلميح ماصة قرب الأنف |
| 15 | F | في قبضة، المقلوب، وتقديم 1 الدور المالحة لكل n هل |
| 16 | M | في قبضة، المقلوب، وتقديم 1 الدور المالحة لكل n هل |
| 17 | تو | في قبضة، المقلوب، وتقديم 2 جولات المالحة لكل n هل |
| 18 | W | في قبضة، المقلوب، وتقديم 2 جولات المالحة لكل n هل |
الجدول 1. جدول عينة التأقلم لمعالجة لجرعات داخل الأنف على الفئران مستيقظا.
| الوقت (دقيقة: ثانية) | الماوس # | عمل |
| 0:00 | 1 | 1 * مجموعة من قطرات الأنف اليسرى في |
| 0:15 | 2 * مجموعة من قطرات في فتحة الأنف اليمنى | |
| 0:30 | مكان على رأس قفص | |
| 1:00 | 2 | 1 * مجموعة من قطرات الأنف اليسرى في |
| 1:15 | 2 * مجموعة من قطرات في فتحة الأنف اليمنى | |
| 1:30 | مكان على رأس قفص | |
| 2:00 | 1 | 3 مجموعة من قطرات في الأنف * اليسار |
| 2:15 | 4 * مجموعة من قطرات في فتحة الأنف اليمنى | |
| 2:30 | مكان في قفص مع علاج | |
| 3:00 | 2 | 3 مجموعة من قطرات في الأنف * اليسار |
| 3:15 | 4 * مجموعة من قطرات في فتحة الأنف اليمنى | |
| 3:30 | مكان في قفص مع علاج |
* يتم تحميل pipettor مرة واحدة مع 6 ميكرولتر، ولكن تدار على الماوس ك 2 قطرات 3 × ميكرولتر.
الجدول 2. الجدول الزمني للعينة واحد أو اثنين من الجرعات الفئران.
الشكل 1. صور من مراحل مختلفة وزوايا عقد الماوس للتسليم داخل الأنف مستيقظا من المخدرات. 1A) عقد الماوس لأسفل بشدة على قمة القفص مع اليد المهيمنة ترك الكتفين تتعرض لقبضة الجلد. 1B) استخدم الإبهام والإصبع الوسطىمن جهة غير المسيطرة لقبضة وسحب ما يصل الجلد فقط وراء لوحي الكتف. 1C) استخدم السبابة لسحب الجلد مرة أخرى من بين العينين نحو الإبهام والإصبع الوسطى (عرض الجبهة). 1D) نفس 1C (الجانب عرض). 1E) امسك الماوس رأسا على عقب باستخدام البنصر و / أو الخنصر لتأمين قاعدة الذيل إلى كف اليد. يجب أن تكون رقبة الفأر الأفقي. 1F) مثل E، من الجانب الآخر. 1G) إدارة المخدرات مع pipettor 20 ميكرولتر ماصة والإكراميات هلام تحميل. 1H) نفس 1G، عن قرب عرض.
الشكل 2. صورة لمحطة الجرعات كاملة لمدة 2 الفئران يضم كل على حدة. وشملت هي أقفاص الماوس اثنين مع مسافة كافية بين للحفاظ على الفئران منفصلة، والماصةتور مع نصائح، وعاء للحصول على نصائح المستخدمة، جهاز توقيت، ورقة الجرعات، علاج ما بعد الجرعات (مثل بذور عباد الشمس أو تشيريوس)، وتقضي الصحية، و(أو P10) P20 pipettor، والمخدرات ليتم تسليمها.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
هذا الأسلوب يوضح كيف يمكن إعطاء الفئران جرعات منتظمة من الدواء داخل الأنف لاستهداف الدماغ من دون استخدام التخدير. يمكن أن يتم تسليم داخل الأنف المخدرات إلى مجموعات كبيرة من الفئران لفترات طويلة من الزمن مع الحد الأدنى من الجهد. يمكن مجموعة واحدة تصل إلى 20 الفئران التي عولجت الأنف قبل شخص واحد في أقل من ساعة واحدة. وقد أظهرت مجموعة واسعة من الجزيئات، التي تتراوح بين chelators الحديد الصغيرة لعوامل النمو للخلايا الجذعية الوسيطة، لاستهداف بسرعة CNS وأظهرت فعالية في نماذج القوارض. الآليات المقترحة من التسليم المباشر من الأنف إلى الدماغ تشمل النقل خارج الخلية على طول الأعصاب الشمية ومثلث التوائم وتدفق الجزء الأكبر ضمن المساحات حول الأوعية 1،10. تسليم داخل الأنف إلى CNS هو أسلوب مفيدة بشكل خاص لأنه ليس فقط هو السريع، ولكنه يستهدف الحد من التعرض CNS النظامية. على سبيل المثال، أدى الأنف إدارة ديفيروكسامين للفئران في 3-19 أضعاف بغية دراسته واقرارهntrations في مناطق الدماغ مع 28 مرات أقل تركيزات في الدم 11. وفي مثال آخر، الانسولين يحسن الذاكرة تدار الأنف في مرضى الزهايمر في غضون 15 دقيقة دون تغيير مستويات البلازما من الانسولين أو السكر 12. ميزة إضافية هي غير الغازية للتقنية التوصيل داخل الأنف.
هناك قيود عديدة لهذا الأسلوب. الأولى، ويقتصر تقديم الأدوية لحوالي 20-30 ميكرولتر في إدارة واحدة، لذلك ذوبان العلاجية ستلعب دورا في تحديد حدود الجرعات. أيضا، صياغة المخدرات لا يقل أهمية عن العوامل مثل درجة الحموضة والملوحة يمكن أن تؤثر على التسليم. يمكن انحرافات كبيرة من الظروف الطبيعية، مثل الرقم الهيدروجيني المدقع والملوحة، إلى إلحاق أضرار في الجهاز التنفسي وظهائر حاسة الشم لدى الفئران. 13،14 علاوة على ذلك، الجرعات داخل الأنف من الفئران unanesthetized يمكن أن يكون صعبا لإتقان، ويمكن أن يستغرق عدة أسابيع من التدريب للالصيادلة "داخل الأنف "أن تكون قادرة على قطرةإيزي "وجها لتذبذب غرفة" وتحقيق الجرعات داخل الأنف الأمثل للدواء. مع تقنية الجرعات غير صحيحة، يمكن أن تستنزف المخدرات في الرئة أو المعدة، والتي يمكن إدخال تقلب في مجال مكافحة المخدرات الوصول إلى المخ. دلائل على أن هذا حدث وصعوبات في التنفس أو تصور السائل في الفم بعد تناوله. إذا كان ذلك ممكنا، فإنه من المستحسن للحد من الأنف الجديد "الصيادلة" لتقديم المالحة / السيارة للسيطرة على الجماعات لعدة أسابيع أو أشهر قبل أن يتم الموافقة عليها من قبل لجرعة المخدرات المدربين الخبراء. وأخيرا، يقتصر هذا الأسلوب على الفئران مستيقظا داخل الأنف، والفئران والحيوانات الكبيرة مستيقظا ليست بسهولة كما عصفت، ويمكن شدد مفرط عندما عقد رأسا على عقب.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
الإعلان عن أي تضارب في المصالح.
Acknowledgments
فإن الكتاب أود أن أشكر HealthPartners رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام اللجنة في مستشفى الأقاليم.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| P20 pipettor set at 6 μl | |||
| Gel loading pipette tips | |||
| Timer | |||
| Waste receptacle for tips | |||
| Dosing sheet for notes | |||
| Pen | |||
| Drug and vehicle | |||
| Container to hold drug vials | |||
| Animals to be dosed | |||
| Spare gloves | |||
| Paper towels to wipe urine | |||
| Table 3. Materials Needed | |||
References
- Dhuria, S. V., Hanson, L. R., Frey, W. H. 2nd Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. J. Pharm Sci. 99, 1654-1673 (2010).
- Thorne, R. G., Pronk, G. J., Padmanabhan, V., Frey, W. H. 2nd Delivery of insulin-like growth factor-I to the rat brain and spinal cord along olfactory and trigeminal pathways following intranasal administration. Neuroscience. , 127-481 (2004).
- Benedict, C., et al. Intranasal insulin as a therapeutic option in the treatment of cognitive impairments. Exp. Gerontol. 46, 112-115 (2011).
- Francis, G. J., et al. Intranasal insulin prevents cognitive decline, cerebral atrophy and white matter changes in murine type I diabetic encephalopathy. Brain. 131, 3311-3334 (2008).
- Francis, G., et al. Intranasal insulin ameliorates experimental diabetic neuropathy. Diabetes. 58, 934-945 (2009).
- Marks, D. R., Tucker, K., Cavallin, M. A., Mast, T. G., Fadool, D. A. Awake intranasal insulin delivery modifies protein complexes and alters memory, anxiety, and olfactory behaviors. J. Neurosci. 29, 6734-6751 (2009).
- Hanson, L., et al. Intranasal delivery of deferoxamine reduces spatial memory loss in APP/PS1 mice. Drug Delivery and Translational Research. 2, 160-168 (2012).
- Danielyan, L., et al. Protective effects of intranasal losartan in the APP/PS1 transgenic mouse model of Alzheimer disease. Rejuvenation Research. 13, 195-201 (2010).
- Fine, J. M., et al. Intranasal deferoxamine improves performance in radial arm water maze, stabilizes HIF-1alpha, and phosphorylates GSK3beta in P301L tau transgenic mice. Exp. Brain Res. 219, 381-390 (2012).
- Lochhead, J. J., Thorne, R. G. Intranasal delivery of biologics to the central nervous system. Adv. Drug Deliv. Rev. 64 (11), 614-628 (2012).
- Hanson, L. R., et al. Intranasal deferoxamine provides increased brain exposure and significant protection in rat ischemic stroke. J. Pharmacol. Exp Ther. 330, 679-686 (2009).
- Reger, M. A., et al. Effects of intranasal insulin on cognition in memory-impaired older adults: modulation by APOE genotype. Neurobiol. Aging. 27, 451-458 (2006).
- Kim, C. H., Song, H. yun, M, E. unA. hn, Lee, Y., G, J., Yoon, J. H. Effect of hypo-, iso- and hypertonic saline irrigation on secretory mucins and morphology of cultured human nasal epithelial cells. Acta Otolaryngol. 125, 1296-1300 (2005).
- Greiff, L., Andersson, M., Wollmer, P., Persson, C. G. Hypertonic saline increases secretory and exudative responsiveness of human nasal airway in vivo. Eur. Respir. J. 21, 308-312 (2003).
