Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Engineering

בנייה של מיקרוסקופ ברזולוציה גבוה עם יכולות קונבנציונליות והשמנה אופטיות הולוגרפי

Published: April 22, 2013 doi: 10.3791/50481

Summary

המערכת המתוארת במסמך זה מעסיקה מלכודת אופטית מסורתית, כמו גם קו השמנה אופטי הולוגרפית עצמאי, מסוגלת ליצור מניפולציה ומלכודות רבות. זה מאפשר יצירת הסדרים גיאומטריים מורכבים של חלקיקים שבירה בעת גם מאפשרים מדידות בו זמנית במהירות גבוהה, ברזולוציה גבוהה של הפעילות של אנזימים ביולוגיים.

Abstract

מיקרוסקופ מערכות רזולוציה גבוהה עם מלכודות אופטיות מאפשרות מניפולציה מדויקת של אובייקטים שבירה שונים, כגון חרוזים דיאלקטרי 1 או אברונים סלולריים 2,3, כמו גם עבור קריאת נתונים ברזולוציה מרחבית וזמניים גבוהות של את עמדתם ביחס למרכז המלכודת. מערכת הפעלה שתוארה יש אחד כזה "מסורתית" מלכודת ב980 ננומטר במסמך זה. בנוסף הוא מספק מערכת השמנה אופטית שנייה שמשתמשת בחבילה הולוגרפית זמינה מסחרי כדי ליצור בו זמנית ולטפל דפוסי השמנה מורכבים בשדה הראייה של המיקרוסקופ 4,5 באורך גל של 1064 ננומטר. שילוב של שתי המערכות מאפשר למניפולציה של חפצים שבירה מרובים באותו הזמן ובמקביל ביצוע במהירות גבוהה ומדידות ברזולוציה גבוהות של תנועה וכוח ייצור בקנה המידה ננומטרי וpiconewton.

Introduction

השמנה אופטית היא אחת הטכניקות המרכזיות ב6 ביופיסיקה. התקדמות מכרעת בהשמנה אופטית כבר הפיתוח של מלכודות הולוגרפית המאפשרות יצירה של דפוסי השמנה תלת ממדיים ולא קונבנציונליות מלכודות נקודה 7. מלכודות הולוגרפית כאלה יש יתרון של גמישות במיקום של חפצים שבירה. עם זאת ניתן ליישר מלכודות קונבנציונליות בקלות להיות יותר סימטרי מאשר ערכות הולוגרפית זמינות מסחרי. הם גם מאפשרים למעקב מדויק מהיר של העצמים שנלכדו. כאן אנו מתארים מערכת (איור 1) המשלבת את שתי גישות השמנה במכשיר אחד, ומאפשרת למשתמש לנצל את היתרונות של שניהם בהתאם לצורך.

השיקולים הכלליים של בניית מלכודות אופטיות (המבוסס על קרן לייזר בודד או מרובה) הם דנו בפירוט במקומות אחרים 8-10. כאן, אנו מתארים את השיקולים ספציפיים שלנוetup ולספק פירוט של הליך יישורנו. לדוגמה, מערכות עם שתי אלומות השמנה אופטיות כבר תאר קודם (לדוגמא נ"צ. 11), בדרך כלל באמצעות קרן לייזר אחת ללכידת אובייקט שבירה ושימוש אחר (קרן כוח מכוון נמוכה) לreadout decoupled של המיקום של האובייקט הלכוד . כאן לעומת זאת, שתי קרני לייזר צריכים להיות מופעל (300 מגה ואט ומעלה) גבוהה כי שניהם כדי לשמש להשמנה. למדידות של מערכות ביולוגיות, הלייזרים המשמשים ללכידה בצורה אופטימלית צריכים ליפול בתוך חלון ספציפי של אורך גל ניר כדי למזער את פירוק חלבונים מושרה אור 1. כאן יש לנו בחרנו להשתמש בדיודה ננומטר 980 ו1,064 לייזרי DPSS ננומטר בגלל העלות, זמינות וקלות תפעול הגבוה הנמוך שלהם.

גם אנו בחרנו להשתמש באור מאפנן מרחבית (SLM) כדי ליצור ולטפל מלכודות מרובות בו זמנית בזמן אמת 4,5. התקנים אלה זמינים באופן מסחריעם זאת השתלבותם בהתקנה מלאה מציבה אתגרים ייחודיים. כאן אנו מתארים גישה מעשית המתייחסת לקשיים פוטנציאליים אלה ומספק מכשיר תכליתי מאוד. אנו מספקים דוגמה מפורשת להתקנה הספציפית המתוארת אשר יכול לשמש כמדריך לעיצובים שונה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

1. התקנה של מלכודת יחידה 980 ננומטר אורך גל אופטית

  1. השמנה אופטית באורך גל nm 980 היא לעתים קרובות אופטימלית עבור ניסויי ביופיסיקה ודיודות לייזר זולים זמינים בקלות עם הספק גבוה כמו 300 מגה ואט. עדיף לליזר דיודה לצמה עם קיטוב שמירת סיבי מצב יחיד בקוטר שדה במצב ידוע. הסיבים צריך להיות מספיק ארוך כדי לפעול כמסנן מצב והוא הופסק בדרך כלל עם או FC / PC או מחבר FC / APC. מבין אלה, FC / APC עדיף לצמצם חזרה השתקפות של אי יציבות משוב אור ופוטנציאליים.
  2. אבטח את דיודת לייזר ננומטר 980 בהר המאפשר לכוח ולבקרת טמפרטורה. עדיף לתקן את ההר לשולחן אופטי ישירות למקסם את טביעת חום פסיבית, ובכך למזער את הסכנה של כישלון דיודה בשל תקלה של בקר טמפרטורה.
  3. הר מחבר סיבי מחשב / APC לאופטיקה collimating הקורה. זהקריטי כדי להבטיח כי יש לי קרן collimated סטייה מינימאלית ולכן יציאות סיבים מתכווננות הן שימושיות ביותר. ודא שיציאת הסיבים נבחרה תואמת את קוטר השדה במצב של סיבי צמת דיודה. אם הקרן היא להיות rastered באמצעות deflectors acousto אופטי (AOD) או deflectors אלקטרו אופטי (EOD) ולאחר מכן את המותניים קרן לייזר collimated חייבת להיות גם מעט פחות מגודלו של הצמצם מטה הטיה.
  4. לאבטח את מתאם collimating לשולחן האופטי במרחק מספיק ממיקרוסקופ כדי לאפשר לקרן ניתוב, התרחבות, ומיקום של רכיבים רצויים אחרים. כוון את יציאת סיבים כדי להבטיח המותניים קרן עקביות על פני מרחקים דומים לנתיב קרן כללי למיקרוסקופ.
  5. התקנת מראות מצוינות באיור 1. הסר את המטרה ממיקרוסקופ ולהשתמש במראות כדי לנתב את האלומה דרך הפתח בשלב ההרכבה האובייקטיבי. אם העדיף, מיקום של dichroic המראות DM1 וDM3 ניתן להשמיט עדמאוחר יותר. DM2 וDM3 שניהם shortpass ולהעביר אור הנראה ואילו המשקף ליד IR ומעלה.
  6. זה מועיל לעלות מצביע לייזר אדום במקום האובייקטיבי, מיושר על הציר האופטי של המיקרוסקופ באופן זמני. מתאם מכאני מותאם אישית הוא הכרחי כדי להבטיח centration של מצביע לייזר. קרן גלויה ממצביע לייזר אז יכולה להיות מנותב חזרה למרכז של הצמצם של נמל הסיבים ולאחר מכן ניתן להשתמש כדי להתקין את העדשות (ראה בהמשך).
  7. התקן את 980 ננומטר קורה ההרחבה (L8 וL9) במרחק נכון מנמל הסיבים כדי לאפשר הכנסה עתידית של רכיבי היגוי (AOD או EOD) כ1 צורך. הקרן הרחיבה מעט חייבת תמלא יותר מדי את צמצם המוקד האחורי של המטרה. (הנה, עדשות עם אורכי מוקד של 125 מ"מ ו -60 מ"מ נמצאות בהסדר קפלרי להכפיל את המותניים הקרן כ). השתמש בקרן מצביע לייזר גלוי (ראה סעיף 1.6) כדי להבטיח מיקום עדשה תקין ויישור מחוספס.
  8. להתקיןl את עדשות היגוי ננומטר 980 (L2 ו L3) בהסדר טלסקופ כפי שצוינה (כאן לשניהם יש 60 מ"מ אורך מוקד) 1. L3 הוא רכוב בהמצומד מטוס למטוס בחזרה-מוקד של המטרה. הר L3 בשלב מיצוב XYZ דיוק, כדי לאפשר היגוי קורה. זה מועיל עבור שלב XYZ יש אינדיקטורים דיגיטליים עבור מיקרומטרים, המאפשר למיצוב ומיצוב מחדש של מלכודת הדיר. "מגוון 0.5 של נסיעה הוא בדרך כלל מספיק, אולם נסיעות ארוכות יותר למיצוב L3 לאורך הציר האופטי עשויות להיות מועילה. השתמשו קורה מצביע לייזר גלוי (ראה סעיף 1.6) כדי להבטיח מיקום עדשה תקין ויישור מחוספס.

2. התקנה של גלאי לייזר

  1. התקן את DM3 מראה dichroic מעל הקבל כפי שמוצג באיור 1. הר מותאם אישית נדרש בדרך כלל. Secure דיודה התמונה המרובעת (QPD) או גלאי רגיש עמדה (PSD) 8 לצד ההרכבה הקבל וENSיור ש980 ננומטר קרן לייזר משתקפת DM3 הוא להכות אותו בערך במרכז. בעת השימוש בQPD, לוודא שהוא רכוב על במה XY קטנה, כדי לאפשר מרכוז מדויק של החיישן בקרן לייזר.
  2. התקן L1 (בדרך כלל עדשת 30 מ"מ) בין DM3 והחיישן. L1 מיקום כדי למקד את אלומת האור לנקודה אחת על החיישן.
  3. התקן את המסנן ברמה הגבוהה ממש לפני L1 כדי לחסום את קרן ננומטר 1064 כמו גם כל השתקפויות אור הנראה תועות מנורת המיקרוסקופ והתאורה מפוזרת.

3. התקנה של 1,064 ננומטר אורך גל הולוגרפי מלכודת

  1. החלק הולוגרפי של ההתקנה בנוי סביב חבילת חומרה / תוכנה זמינה באופן מסחרי המראות הולוגרפית המשמשות בחבילה זו מדורגות לאירוע כוח מרבי של 5 או 10 W / 2 ס"מ. יכולות להיות שמקורו TEM00 קורות מצב יחיד בטווח כוח הזה בקלות מליזר DPSS באורך גל nm 1064.
  2. הר לייזר ננומטר 1064 על מוגבהפלטפורמה כדי להתאים את הגובה של נתיב הקרן עבור קו 980 (ראה סעיף 1) בגסות.
  3. אם לא באופן ישיר לשליטה, כוח לייזר יכול להיות מותאם באופן ידני על ידי התקנת צלחת חצי גל (HWP) ומקטב (PBS) מייד אחרי צמצם פלט לייזר. כדאי לעלות את המקטב בשלב סיבובי כדי להיות מסוגל להתאים את הדרישה למראה הולוגרפית קיטוב קורה.
  4. התקן ננומטר 1,064 קורה ההרחבה (L6 וL7). יש להרחיב את המותניים קרן לייזר כדי להתאים את גודל האלכסון של המראה הולוגרפית. להרחבת יחסים גדולים (מעל 10X) זה יכול להיות מקור לדאגה לשמור על גודלה של ההרחבה קטנה. ולכן זה עשוי להיות רצוי להשתמש בעדשות עם אורך מוקד קטן במיוחד (כאן: 16 מ"מ ו -175 מ"מ).
  5. התקן את המראות האחרות כפי שמצוין לכוון את אלומת ננומטר 1,064 דרך אובייקטיבי.
    1. Secure DM1 dichroic (45 ° זווית של שכיחות) בהר kinematic והנח את המכלול בנתיב קרן ננומטר 980, כך שהוא מאפשר לundiminisheהעברת של קרן שד.
    2. הפעל אור מצביע לייזר. מראה DM1 צריך לשקף כמות מספקת של אור הנראה למצב את מרחבי מאפנן האור (SLM) כמו שצריך בדרכה של קרן זו. SLM גם צריך להיות בזווית, כך שקרן לייזר נכנסת ויוצאת כמו קרובות ככל האפשר לשכיחות נורמלית. עם זאת זווית הפגיעה חייבת להיות גדולה מספיק כדי להבטיח שקרן לייזר לא נחתכה על ידי mounts עדשות ורכיבים אופטיים אחרים. זווית 5 מעלות צריכה להיות ברת השגה בקלות, והוא קטן מספיק. לבסוף המרחק מDM1 לSLM יש למדוד במדויק, כך שההכנסה של עדשות L4 L5 ו( ראה 3.6 להלן) יכולה להטות את מטוס מראה SLM ומטוס בחזרה-מוקד של המטרה.
    3. התקן את מראה כדי לכוון את האור מ1,064 הרחבה קרן ננומטר לSLM. ודא שהאור מצביע לייזר פוגע בצמצם ההרחבה הקרן במרכז.
  6. להתקין עדשות L4 L5 ו( כאן: עדשות עם 125 מ"מ ו -200 מ"מ בהתאמה). זוג טלסקופ זה conjugates מטוס מראה SLM למישור המוקד האחורי של המטרה וגם מקטין את המותניים הקורה רק במעט תמלא יותר מדי את הצמצם האחורי של המטרה. אנחנו בחרנו עדשות עם אורכי מוקד ארוכים למרחב SLM מDM1. זה מנקה לא רק מקום לקו לייזר השני, אלא גם נוטה לעשות יישור קל יותר.
  7. הסר את מצביע לייזר. השאר את מתאם ההרכבה לשמש צמצם יישור גס.

4. הערות התקנה ויישור של מערכת

  1. עדשת L3 וSLM חייבים להיות ממוקם באופן שיהיו אופטי מצומדת למישור המוקד האחורי של המטרה. המוקד המשותף של L4 L5 הוא אופטי ומוצמד למטוס המדגם אם הקורות ההשמנה האופטיות מוזרקות לתוך חלל האינסוף של המיקרוסקופ.
  2. לשיר IR כרטיס הצופה ליישר את קרן ננומטר 980 ללכת לאורך ציר המרכז של הצמצם במתאם מצביע לייזר.
  3. השתמש IR כרטיס To להבטיח כי קרן ננומטר 1,064 פוגעת באותו מקום כמו קרן ננומטר 980 על DM1, L2, וL3 ושקרן ננומטר 1,064 הולכת לאורך ציר המרכז של הצמצם במתאם מצביע לייזר.
  4. החלף את מתאם ההרכבה מצביע לייזר עם מטרה. מטרת שמן או מים צמצם מספרי גבוהה היא טיפוסית.
  5. יישר את מלכודת ננומטר 980 כפי שמתואר ב9 על ידי "הליכה" קרן לייזר עד שתבנית התאבכות רדיאלית סימטרית נתפס במצלמה.
  6. עם את המראה הולוגרפית (כלומר מתנהג כמו מראה פסיבית) להשתמש SLM וDM1 "ללכת" קרן 1,064 ננומטר undiffracted ליישר מלכודת ננומטר 1064.
  7. SLM מייצר קרן undiffracted משמעותית שהתוצאה במלכודת לייזר כסלע איתן חזקה בשדה הראייה. זה שימושי ליישור, אך עשוי להיות לא רצוי לניסויים. כדי לחסום את המלכודת הזאת אפשר להכניס אובייקט אטום קטן בדרכו של האור בundiffracted המצומד מיקום למטוס המדגם (לדוגמא המוקד משותף דואר של L4 L5 ו). גודלו של חוסם הנקודה המרכזי זו צריך להיות קצת יותר גדולה מקוטרו של הדיסק האוורירי לאור ממוקד (חוסם בקוטר 100-300 מיקרומטר למערכת המתוארת).
  8. djust קיטוב קרן ננומטר 1064 באמצעות המקטב כדי להתאים נטייה SLM. סובב את הצלחת חצי גל כדי לקבוע את עוצמת השידור של האלומה המועדפים.
  9. אם תרצה, להוסיף אלמנטים או AOD היגוי הקורה סוף יום לתוך קו 980 ננומטר לייזר. ודא נטיה נכונה של רכיבים אלה למטוס בחזרה-מוקד של המטרה ומחדש ליישר את המלכודת. כדאי לעלות על הגה אלמנטים על במה goniometric.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

ההתקנה מאפשרת למפעיל התאסף כדי ללכוד אובייקטים מרובים שבירה בזמן אמת ולמקם אותם בכל שלושת הממדים בתוך שדה הראייה. אנו מדגימים את היכולות הולוגרפית של המכשיר על ידי לכידת 11 microspheres (איור 2). מלכודת הכליאה כל אובייקט באופן ידני לשנות את מיקומו על כך שהשמנת ההסדר הסופי מתאר את הלוגו של אוניברסיטת יוטה שבו הניסוי הזה בוצע. פונקציה בשילוב של מלכודת הולוגרפית וקונבנציונלית מוצגת באיור 3. המלכודת הקונבנציונלית נעה מרכזי חרוז בהדרגה מהירה יותר (במהירויות מלכודת של 1.3, 10 ו 82 מיקרומטר / שנייה מוצגות), ואילו מלכודות שהוגדרו הולוגראפית להישאר נייחות. במהירות הגבוהה ביותר, כל התנועה של חרוז מתרחשת במהלך ההקלטה של ​​מסגרת אחת של וידאו ובכך מופיעה טשטוש תנועה קיצוני באותה מידה. אפשר להזיז את המלכודת הקונבנציונלית מספיק מהר שחרוזים נאלצים מפוטנציאל ההשמנה על ידי Hגרירת ydrodynamic (לא מוצג).

שימו לב שההרכבה של צורות מורכבות תוך שימוש במספר רב של microspheres עלולה להוביל למקרה שבו מספר microspheres בשדה הראייה אינו מספיק להרכבה מלאה (כפי שניתן לראות באיור 2). במקרים כאלה, למפעיל פיזי צריך כדי להזיז את שדה הראייה ביחס למדגם (כלומר למקם את הבמה המדגם במיקרוסקופ) לחשוף microspheres נוספת תוך שמירה על האובייקטים שכבר נלכדו.

איור 1
איור 1. סכמטי של מערכת מיקרוסקופ ברזולוציה הגבוהה עם שתי קורות השמנה. רכיבים שכותרת L1-L9 הם עדשות בסיסיות. רכיבים שכותרת DM1-DM3 הם מראות dichroic. עדשות L2 L3 ומשמשים להיגוי. עדשות L4 L5 ולפעול כביהמפחית מ 'וspacer. עדשות L6/L7 וL8/L9 הם זוגות מרחיבי הקורה לקרן לייזר שלהם. רכיבים ללא תווית המתוארות כמלבנים שחורים מוצקים מראות בסיסיות. רכיבים שכותרתו MC ומיזורי הם הקבל מיקרוסקופ ואובייקט, בהתאמה. רכיבים אחרים הם דיודה מרובעת תמונה (QPD), חריץ מסנן (NF), שלב בקר טמפרטורת פלטייה (PTC), חם מסנן (HF), מאפנן אור מרחבי (SLM), מטה הטיה acousto אופטית (AOD), תריסים (S1 ו S2), צלחת חצי גל (HWP) וקיטוב קרן מפצל (PBS).

איור 2
איור 2. סידור המרחבי המייצג אוניברסיטת יוטה הלוגו נעשה באמצעות 11 מפעיל מלכודות הולוגרפית מוגדרות ומבוקרות. העצמים הלכודים הם חרוזים שבירה (ראה טבלה של חומרים לdetai יותרLS) הושעה במי דה מיוננים. עיגולים אדומים וירוקים יציגו עמדות מלכודת. מסגרות (א) - (ו) מייצגים שלבים רצופים בבניית לוגו.

איור 3
איור 3. שתי שורות של מלכודות נעשות באמצעות מלכודות הולוגרפית מוגדרות ונשלטו 6 מפעיל. מלכודת קונבנציונלית נוספת מוגדרת בין שתי השורות ואת המיקום שלו מותאמת במהירויות שונות כפי שצוין. חרוז הוא עבר לעקירה המרחבי מקסימלי של 4.1 מיקרומטר ולאחר מכן חזרה למיקומו המקורי. וידאו של תנועת חרוז הוא רשם ב47 תמונות בשניות. כמו מהירות מלכודת מיצוב מחדש הוא גדל, הצעה לטשטש בהדרגה גדולה יותר נצפה בוידאו. את האובייקטים שנלכדו הם חרוזים שבירה (ראה טבלה של חומרים לפרטים נוספים) מושעים במי דה מיוננים. Frתזמוני ame מוצגים באדום. מהירות מלכודת מיצוב מחדש מוצגת עבור כל שורה. ברים בקנה מידה מתאים לגרין 5 מיקרומטר בכל כיוון.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

יש לנו נבנו מכשיר המשלב את שתי מלכודות אופטיות מסוגים שונים (איור 1) כדי לספק מתקני השמנה נפרדים למניפולצית אובייקט ומדידה. המלכודת האופטית "הקונבנציונלית" בנויה סביב 980 ננומטר דיודת לייזר. קרן זו הרחיבה, הובילה ולאחר מכן הזריקו למיקרוסקופ ההפוכה שלנו (קרן "אור האדום" באיור 1). המלכודת האופטית הולוגרפית בנויה סביב 1,064 לייזר DPSS ננומטר. הקרן היא להרחיב בכך שתתאים לגודל של מרחבי מאפנן האור (SLM), שיקף את SLM בזווית נמוכה של שכיחות, הקטין ימלא יותר מדי את צמצם המוקד האחורי של המטרה, בשילוב עם הקו השמנה "הקונבנציונלי" באמצעות מעט dichroic מראה, ולבסוף מוזרק לתוך מיקרוסקופ שלנו (קרן "אדום כהה" באיור 1). שים לב שSLM חייב להיות ממוקם במטוס אשר אופטית להטות למישור המוקד האחורי של המטרה.

בפרוטוסעיף col, אנו מתארים את שיקולי תכנון ויישור המאפשרים לנו לצמצם את טביעת רגל המרחבי של ההתקנה ועדיין מאפשר בנייה קלה יחסית. אנחנו גם לתאר את החסימה של רכיב undiffracted מיוצר על ידי SLM, אשר עשויים להיות הכרחי לחבילה מסחרית כמו המערכת המשמשת כאן, אבל במידה מסוימת הוא מאתגר ועד כה תועד היטב.

העיצוב המתואר כאן הוא להתאמה אישית. יש לנו כלל מזכיר בקצרה כמה התאמות אישיות ברמה גבוהה פופולריות למלכודות וכיצד יהיה ניתן לשלב אותם לתוך העיצוב שלנו אופטיים של. לדוגמה, ניתן לנווט מלכודת אחת במספר דרכים, כולל deflectors acousto אופטי (AOD), deflectors אלקטרו אופטי (EOD) 12, מטלטלין או מחזירי deformable או פשוט rastering היגוי העדשה (L3 בהתקנה שלנו) 1. באופן דומה, ניתן לקבוע את המיקום של אובייקט לכודים באמצעות תוכניות רבות וחיישנים. במקרים כאלה, והמיקום הטיפוסי ליישרment של מרכיבים רלוונטיים מתואר בקצרה. אנו מצפים כי עבודה זו עשויה לספק תבנית לעיצובים מורכבים יותר בעתיד.

כמה שיקולים מעשיים ומגבלות שימוש הם בלב. ראשית, לא צריכים להיות ממוקמות במלכודות האופטיות קרוב מדי זה לזה, כדי שלא להפריע לפוטנציאל אטרקטיבי שלהם לא רחוק ממרכז מלכודת. אם יש צורך במיקום הקרוב של שתי מלכודות, אז זה אפשרי להגדיר מלכודת קו המחברת בין שתי הנקודות, כך שהפוטנציאל האטרקטיבי של המלכודת משתרע לאורך כל הקו. בעיה מעשית נוספת היא שלא ניתן להעביר כל כך מהר, כי הם חווים גרירה הידרודינמית מוגזמת (הסף המדויק תלוי בכוח המלכודת) אחרת הגרירה יכולה לדחוף את האובייקטים לצאת ממלכודת העצמים הלכודים.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

המחברים אין לחשוף.

Acknowledgments

מימון ניתן על ידי אוניברסיטת יוטה. ברצוננו להודות לד"ר י שו (UC מרסד) וד"ר BJN רדי (אוניברסיטת קליפורניה) לדיונים מועילים.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Optical table Newport corporation ST-UT2-56-8 Irvine, CA
Microscope, Inverted, Eclipse Ti Nikon USA MEA53220 Melville, NY
Plan apo 100X oil objective (1.4 NA) Nikon USA MRD01901 Melville, NY
Oil condenser Lens 1.4 NA Nikon USA MEL41410 Melville, NY
EMCCD camera Andor technology USA Ixon DU897 South Windsor, CT
1/3" CCD IEEE1394 camera NET USA Inc Foculus FO124SC Highland IN
Laser, TEM00, SLM, 1,064 nm wavelength Klastech Laser Technologies Senza-1064-1000 Dortmund; Germany
laser diode, TEM00, SLM, 980 nm Axcel Photonics BF-979-0300-P5A Marlborough, MA
laser diode mount ILX Lightwave LDX-3545, LDT-5525, and LDM-4984 Bozeman, MT
adjustable fiber ports Thorlabs PAF-X-11-B Newton, NJ
holographic system Arryx HOTKIT-ADV-1064 Chicago, IL
holographic mirror Boulder Non-linear Systems this is a part of HOTKIT-ADV-1064 Lafayette, CO
Calcite polarizer Thorlabs GL10-B Newton, NJ
half-wave plate Thorlabs WPH05M-1064 Newton, NJ
Polarizer rotation mount Thorlabs PRM1 Newton, NJ
half-wave plate rotation mount Thorlabs RSP1 Newton, NJ
Shutter Thorlabs SH05 Newton, NJ
dichroic mirrors (DM2 & DM3); 45 ° AOI Chroma Technology t750spxrxt Bellows Falls, VT
dichroic mirror (DM1); 45 ° AOI Thorlabs DMSP1000R Newton, NJ
custom mechanical adapter Thorlabs SM1A11 and AD12F with enlarged inner bore Newton, NJ
notch filter Semrock FF01-850/310-25 Rochester, NY
Acousto-Optic deflector (2-axis) intraAction DTD-584CA28 Bellwood, IL
goniometric stage New Focus 9081 Santa Clara, CA
60 mm steering lenses Thorlabs LA1134-B Newton, NJ
16 mm aspherical expander lens Thorlabs AC080-016-C Newton, NJ
175 mm expander lens Thorlabs LA1229-C Newton, NJ
Spot blocker (cabron-steel sphere) Bal-Tec 0.0100" diameter Los Angeles, CA
Microspheres (Carboxyl-polystyrene) Spherotech CP-45-10 Lake Forest, IL

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Svoboda, K., Block, S. M. Biological applications of optical forces. Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 23, 247-285 (1994).
  2. Ashkin, A., Schutze, K., Dziedzic, J. M., Euteneuer, U., Schliwa, M. Force generation of organelle transport measured in vivo by an infrared laser trap. Nature. 348, 346-348 (1990).
  3. Shubeita, G. T., Tran, S. L., et al. Consequences of motor copy number on the intracellular transport of kinesin-1-driven lipid droplets. Cell. 135, 1098-1107 (2008).
  4. Polin, M., Ladavac, K., Lee, S. H., Roichman, Y., Grier, D. Optimized holographic optical traps. Opt Express. 13, 5831-5845 (2005).
  5. Sun, B., Roichman, Y., Grier, D. G. Theory of holographic optical trapping. Opt. Express. 16, 15765-15776 (2008).
  6. Moffitt, J. R., Chemla, Y. R., Smith, S. B., Bustamante, C. Recent advances in optical tweezers. Annu. Rev. Biochem. 77, 205-228 (2008).
  7. Grier, D. G. A revolution in optical manipulation. Nature. 424, 810-816 (2003).
  8. Neuman, K. C., Block, S. M. Optical trapping. Rev. Sci. Instrum. 75, 2787-2809 (2004).
  9. Sheetz, M. P. Laser tweezers in cell biology. Introduction. Methods Cell Biol. 55, xi-xii (1998).
  10. Spudich, J. A., Rice, S. E., Rock, R. S., Purcell, T. J., Warrick, H. M. Optical traps to study properties of molecular motors. Cold Spring Harb. Protoc. 2011, 1305-1318 (2011).
  11. Visscher, K., Gross, S. P., Block, S. M. Construction of multiple-beam optical traps with nanometer-resolution position sensing. Selected Topics in Quantum Electronics. IEEE Journal of. 2, 1066-1076 (1996).
  12. Valentine, M. T., Guydosh, N. R., et al. Precision steering of an optical trap by electro-optic deflection. Opt Lett. 33, 599-601 (2008).

Tags

פיסיקה גיליון 74 ביולוגיה מולקולרית אופטיקה שבירה (אופטיקה) מלכודות אופטיות מנועים מולקולריים Microtubules תנועתיות מראה הולוגרפית אורך גל מלכודות כפולות מיקרוסקופיה הדמיה
בנייה של מיקרוסקופ ברזולוציה גבוה עם יכולות קונבנציונליות והשמנה אופטיות הולוגרפי
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Butterfield, J., Hong, W., Mershon,More

Butterfield, J., Hong, W., Mershon, L., Vershinin, M. Construction of a High Resolution Microscope with Conventional and Holographic Optical Trapping Capabilities. J. Vis. Exp. (74), e50481, doi:10.3791/50481 (2013).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter