Миография давления используется для оценки вазоактивности из мелких артерий, которые развиваются длительное сужение, когда под давлением. Эта рукопись содержит подробный протокол оценки в отдельных сегментах малого брыжеечных артерий от крыс, вазоактивности и влияния внутриполостной давление на сосудистой диаметре.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Оценка Миогенный ответ и вазоактивности В Сопротивление брыжеечных артерий, используя миография давления
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Мелких артерий сопротивления сужают и расширяют, соответственно, в ответ на повышенной или пониженной внутрипросветный давление; Это явление известно как миогенного ответ является ключевым регулятором локального кровотока. В изобарических условиях мелкие артерии сопротивления развиваются устойчивый сужение известный как миогенной тон (МТ), который является основным фактором, определяющим системного сосудистого сопротивления (СВР). Следовательно, экс естественных условиях под давлением препараты мелких артерий сопротивления являются основными инструментами для изучения функции микрососудов в почти физиологических состояниях. Чтобы достичь этого, свежевыделенные нетронутыми сегмент малое сопротивление артерии (диаметр ~ 260 мкм) установлен на двух небольших стеклянных канюли и давлением. Эти препараты артериальных сохранить большинство в естественных характеристик и оценки разрешения сосудистого тонуса в режиме реального времени. Здесь мы предлагаем подробный протокол для оценки вазоактивности в небольших давлением сопротивление брыжеечных артерий от крыс; эти артерии развиваютсяустойчивый вазоконстрикции - примерно 25% от максимального диаметра - при обработке давлением при 70 мм рт. Эти препараты артериальных могут быть использованы для изучения влияния исследуемых соединений на отношения между внутри-артериального давления и вазоактивности и определить изменения в функции микрососудов в животных моделях различных заболеваний.
Введение
Мелких артерий сопротивления являются основными факторами, определяющими СВР и играют важную роль в патофизиологии многих заболеваний 1,2. Условия такие, как диабет, беременность 3 4 ишемии 5, ожирение и гипертония 6,7 часто ассоциируется с измененной функции микрососудов. Сосудистая миография может не только обеспечить важную информацию в изменения функции микрососудов в различных заболеваний, но также поможет определить терапевтические цели и оценивать эффективность вазоактивных соединений. Сосудистая функция была изучена с использованием выделенных мелкие артерии в изометрических или изобарических условиях сосудов 8....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
Примеры, показанные здесь, из экспериментов, утвержденными IACUC в Грузии Риджентс университет - Протокола №: # 2011-0408
1. Подготовка реагентов
- Подготовка рассечение решение запас: Для 500 мл фондового рассечение раствора (5x), растворить 21,18 г NaCl, 0,875 г KCl, 0,739 г MgSO 4, 1,049 г швабры и 0,019 г ЭДТА в 450 мл Milli-Q воды. Регулировка рН до 7,3-7,4 с помощью 1 N NaOH. Макияж объем до 500 мл с Milli-Q воды. Исходный раствор может храниться до 7-10 дней. В таблице 1 приведен список химических веществ и их производителей. В таблице 2 концентрации в мм.
- Подготовить ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Схематическое изображение миографа типичный давление настройке показано на рисунке 1. Два конца сосуда канюлируют со стеклянной микропипетки и закрепляется швами с обеих сторон. Через трубки и открытым краном, один канюли соединен с сервоуправлением регулятора давления; с другой канюли соединен с закрытой краном. Камера перфузию PSS и сосудистой диаметра изменений, наблюдаемых с помощью инвертированного микроскопа, соединенного с ПЗС-камерой.
Артериальное давление на сегмент.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
Критические шаги, устранение неисправностей и модификации
В типичной изобарической подготовки сосуда, артерии давлением на 70 мм рт.ст. между двумя стеклянными канюли перфузии теплой (37 ° C) PSS. После 30-45 мин, артерии развивать MT, характеризуется спонтанным уменьшением диаметра, что стабилизирует в 20-30 мин. Сопротивление артерии от различных сосудистых бассейнах развивать переменной MT. Например сопротивления крыс брыжейки артерии развивать MT ~ 25% PD, в то время как cremastric артерии .......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы не имеют никаких финансовых конфликтов.
Благодарности
Сандип Хурана поддерживается NIH (K08DKO81479). Vikrant Rachakonda поддерживается (T32DK067872).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
Table 2.
td colspan="4"> Состав экспериментальных решений
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|---|
| Chemical | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Acetylcholine | Sigma Aldrich | A6625 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Хлорид кальция (CaCl2) | )Sigma Aldrich | 223506 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| D-(+)-глюкоза | Sigma Aldrich | G5767 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Этиленгликоль-бис(2-аминоэтиловый эфир)-N,N,N',N'-тетрауксусная кислота (EGTA) | Sigma Aldrich | E3889 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Этилендиамин тетрауксусная кислота (ЭДТА) | Sigma Aldrich | E9884 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| HEPES | Sigma Aldrich | H3784 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Сульфат магния (MgSO4) | Sigma Aldrich | M7506 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| MOPS | Sigma Aldrich | M5162 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Фенилэфрин | Sigma Aldrich | P6126 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Хлорид калия (KCl) | Sigma Aldrich | P3911 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Фосфат калия (KH2PO4) | Sigma Aldrich | P5655 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Бикарбонат натрия (NaHCO3 ) | Sigma Aldrich | S6014 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Sodium chloride (NaCl) | Sigma Aldrich | S7653 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Sodium hydroxide (NaOH) | Sigma Aldrich | S5881 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Нитропруссид натрия | Sigma Aldrich | 13451 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Моногидрат фосфата натрия (2PO4) | Sigma Aldrich | S9638 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Пируват натрия | Sigma Aldrich | P8574 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Table 1. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
2
| ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Equipment | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| CCD Монохромная камера | Источник изображения | DMK 21AU04 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Однолинейный нагреватель раствора | Warner Instruments | 64-0102 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Термистор | Warner Instruments | 64-0108 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Двойной автоматический регулятор температуры | Warner Instruments | TC-344B | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Пылающий/коричневый съемник микропипеток | Sutter Instruments | P-97 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Интерфейс флуоресцентной системы | IonOptix | модель FSI-700 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Щипцы и ножницы | World Precision Instruments | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Ion Wizard-Core and Analysis | IonOptix | Ion Wizard 6.0 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Лабораторная трубка | Silastic | 508-005 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Самец Sprague Dawley крыса | Harlan Laboratories | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Master flex консольный привод | Cole-parmer | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Milli-Q Plus Ultrapure Water System Millipore | ZD5211584 | |||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Офтальмологический монофиламент нейлоновый шовный материал | Ethicon | 9007G | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Фотометрический и размерный микроскоп | Motic | AE31 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Сервоконтроллер давления с перистальтическим насосом и преобразователем давления | Приборы для живых систем | PS-200 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Стереомикроскоп | Nikon Instruments Inc | SMZ660 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Камера сосуда | Живые системы Приборы | CH-1 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Диссекционная тарелка | Приборы для живых систем | DD-90-S | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Тонкостенные стеклянные капилляры | World Precision Instruments | TW120-6 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Microforge | Stoelting | 51550 | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
| Table 3. | ||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||||
Ссылки
- Christensen, K. L., Mulvany, M. J. Location of resistance arteries. J Vasc Res. 38, 1-12 (2001).
- Rietzschel, E. R. Oxidized low-density lipoprotein cholesterol is associated with decreases in cardiac function independent of vascular alterations. Hyper....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
