وقد وصفت متعددة البروتوكولات وقوع اضرار طفيفة للتلف خلايا مستقبلة للضوء وبالتالي تحفز على استجابة التجدد الشبكية في الزرد الكبار. يصف هذا البروتوكول وسيلة المحسنة التي يمكن استخدامها في الحيوانات المصطبغة وهذا يدمر الغالبية العظمى من قضيب مبصرات مخروط وعبر شبكية العين بأكملها.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
رواية ضوء بارادايم ضرر للاستخدام في دراسات التجديد الشبكية في اسماك الزرد الكبار
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
يستخدم تنكس الشبكية الناجم عن الضوء (LIRD) عادة في كل من القوارض والزرد إلى قضيب الضرر ومبصرات مخروط. في الزرد الكبار، تنكس مبصرة يؤدي الخلايا الدبقية مولر إلى إعادة إدخال دورة الخلية وإنتاج الأسلاف عابر تضخيم. تستمر هذه الأسلاف لتتكاثر كما تهاجر إلى المنطقة المتضررة، حيث أنها تعطي في نهاية المطاف إلى نشوء خلايا مستقبلة للضوء جديد. حاليا، هناك نوعان من النماذج المستخدمة على نطاق واسع LIRD، كل منها يؤدي إلى درجات متفاوتة من فقدان مبصرة والاختلافات المناظرة في استجابة التجدد. كما هي أدوات أكثر الوراثية والدوائية المتاحة لاختبار دور الجينات الفردية من الفائدة خلال التجديد، هناك حاجة إلى تطوير نموذج LIRD قوية. نحن هنا وصف بروتوكول LIRD أن يؤدي إلى خسارة على نطاق واسع وثابت من كل قضيب ومخروط خلايا مستقبلة للضوء الذي جمعنا بين استخدام اثنين من التقنيات LIRD المحددة سابقا. علاوة على ذلك، ويمكن تمديد هذا البروتوكول للاستخدام في الحيوانات المصطبغة، مما يلغي الحاجة للحفاظ على خطوط المعدلة وراثيا من الفائدة على خلفية البيضاء للدراسات LIRD.
المقدمة
يستخدم تنكس الشبكية الناجم عن الضوء (LIRD) عادة في كل من القوارض والزرد إلى قضيب الضرر ومبصرات مخروط. في الزرد الكبار، تنكس مبصرة يؤدي الخلايا الدبقية مولر إلى إعادة إدخال دورة الخلية وإنتاج الأسلاف عابر تضخيم. تستمر هذه الأسلاف لتتكاثر كما تهاجر إلى المنطقة المتضررة، حيث أنها تعطي في نهاية المطاف إلى نشوء خلايا مستقبلة للضوء جديد. حاليا، هناك نوعان من النماذج المستخدمة على نطاق واسع LIRD، كل منها يؤدي إلى درجات متفاوتة من فقدان مبصرة والاختلافات المناظرة في استجابة التجدد. كما هي أدوات أكثر الوراثية والدوائية المتاحة لاختبار دور الجينات الفردية من الفائدة خلال التجديد، هناك حاجة إلى تطوير نموذج LIRD قوية. نحن هنا وصف بروتوكول ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
وقد وافق جميع الإجراءات الموضحة في هذا البروتوكول من قبل لجنة استخدام الحيوانات في مدرسة جامعة واين ستيت في كلية الطب.
1. التكيف مع الظلام
- نقل ~ 10 الكبار الأسماك البيضاء أو المصطبغة من نظام الإسكان العادي في العلبة المظلمة. إذا كانت متوفرة، استخدام العلبة المظلمة التي بنيت في وحدة سكنية الزرد، والذي يسمح لتدفق المياه الطبيعية من خلال الخزان. (إذا كان مثل هذا النظام غير متوفر، ووضع حوض للأسماك في الضميمة مظلمة تماما، والتأكد من أن يهوي السمك مع الأكسجين). <....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
تمت مقارنة نظام العلاج ضوء المذكورة حتى الآن إلى كل أسلوب الفردية من LIRD. في الحيوانات البيضاء الكبار المعالجة غامق (الشكلان 3-5)، أدى ضوء العلاجات الفردية في خسارة كبيرة من قضيب (الشكل 3) ومخروط (الشكل 4) خلايا مستقبلة للضوء. ومع ذلك، كل العلاجات الفردية تلف في المقام الأول المستقبلات الضوئية في النصف الظهري من شبكية العين، وترك شبكية العين بطني محمية نسبيا من العلاجات الخفيفة (الشكلان 3 و 4).
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا تبين لنا أن الجمع بين التعرض للأشعة فوق البنفسجية قصيرة مع استمرار التعرض للضوء الساطع النتائج في فقدان مبصرة على نطاق واسع واستجابة التجدد قوية. مقارنة مع الأساليب LIRD الفردية، وهذه الطريقة مجتمعة هو أيضا على البروتوكول الأكثر فعالية لإتلاف كلا قضبان ومخاريط في كل شطر من شبكية العين. الأهم من ذلك، من فعالية هذا العلاج في الحيوانات المصطبغة وكذلك الحيوانات البيضاء.
على الرغم من أننا تقديم الدليل على.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
الكتاب ليس لديهم ما يكشف.
شكر وتقدير
فإن الكتاب أود أن أشكر شيشيا لوه لتربية الأسماك الممتازة والدعم التقني. وقد تم تمويل هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة منح R21EY019401 (RT) وP30EY04068 (RT)، وبدء الأموال لRT، بما في ذلك منحة غير مقيد من البحوث للوقاية من العمى في جامعة واين ستيت، قسم طب وجراحة العيون. كان مدعوما من قبل JT توماس C. الدمدمة الزمالة التي تقدمها مدرسة جامعة واين ستيت العليا.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| مصدر ضوء الأشعة فوق البنفسجية | Leica | EL600 | |
| صحن بتري زجاجي (150 × 20 مم) | دورق زجاجي سيجما ألدريتش / بيركس | CLS3160152BO | |
| 250 مل دورق زجاجي | سيجما ألدريتش / بيركس | CLS1000250 | |
| 4 لتر كوب زجاجي | سيجما ألدريتش / بيركس | CLS10004L | |
| فيشر | 01-213-105 | ||
| 250 واط هالوجين مصابيح | القوى العاملة | 265-669 | |
| خزانات أكريليك شفافة سعة 1.8 لتر | Aquaneering | ZT180T | |
| 1.8 لتر أغطية خزان أكريليك شفافة مروحة | Aquaneering | ZT180LCL | |
| Honeywell | HT-900 | ||
| مهوية | Tetra | 77853-900 | |
| حرارة | Cole-Parmer | YO-08008-58 | |
| عازمة ملقط (5/45) | أدوات الدقة العالمية | 504155 |
المراجع
- Bernardos, R. L., Barthel, L. K., Meyers, J. R., Raymond, P. A. Late-stage neuronal progenitors in the retina are radial Muller glia that function as retinal stem cells. J. Neurosci. 27, 7028-7040 (2007).
- Fausett, B. V., Goldman, D.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
