Summary
Fôrings krets i Drosophila melanogaster larver serverer et enkelt men kraftig modell som gjør at endringer i fôring rate å være korrelert med endringer i stomatogastric nevrale kretser. Denne kretsen består av sentrale serotonerge neuroner som sender anslag til munningen kroker samt forutgående.
Abstract
Det serotonerge matekretsen i Drosophila melanogaster larver kan brukes til å undersøke nevronale substrater av kritisk betydning under utviklingen av kretsen. Ved hjelp av den funksjonelle utgangen av kretsen, foring, endringer i neuronal arkitekturen av stomatogastric system kan visualiseres. Mate problemet kan bli registrert ved å observere graden av tilbaketrekkingen av munn kroker, som mottar innervasjon fra hjernen. Bevegelsesatferd anvendes som en fysiologisk kontroll for foring, siden larver bruker sine munn kroker for å krysse over et agar-substrat. Endringer i fôring atferd kan være korrelert med den axonal arkitekturen av neurites innervating tarmen. Ved hjelp av immunohistokjemi er det mulig å visualisere og kvantifisere disse endringene. Feil håndtering av larvene under atferds paradigmer kan endre data som de er svært følsomme for manipulasjoner. Riktig avbildning av neurite arkitektur innervatingtarmen er kritisk for nøyaktig kvantifisering av antallet og størrelsen av åreknuter, så vel som omfanget av grennoder. Analyse av de kretser tillater bare for visualisering av neurite arkitektur eller atferdsmessige effekter, men gjør det mulig for denne modellen en å korrelere den funksjonelle utgangen av kretsen med svekkelser i neuronal arkitektur.
Introduction
Drosophila er et ekstremt kraftig modellsystem for å studere neural kretsutvikling på grunn av rask generasjonstid, lav eksperimentelt kostnad og evne til å manipulere og kontrollere genetiske og miljømessige faktorer. Neurogenesis, neuronal Sti finne og synaptogenesis er bevart mellom mennesker og Drosophila, derfor mekanismene i å skape, vedlikeholde og modifisere nevrale kretser er bevart også.
Klassiske neurotransmittere, slik som serotonin (5-hydroksytryptamin eller 5-HT) kan tjene som vekstfaktorer før bruk deres rolle som signalmolekyler i den modne nevrale kretsen 1-3 Tidligere studier har vist at opprørt nivåer av 5-HT under embryogenese endre tilkobling av modne nevroner fire. Andre har vist at ektopisk anvendelse av 5-HT til dyrkede neuroner Helisoma undertrykke neurite utvekst samt synaptogenesis 5-7. I Drosophila, er utviklings 5-HT-nivåer inverst relatert til åreknute antall og størrelse, så vel som graden av aborization, langs lengden av neurites rager til forutgående fra CNS 8..
Serotonerg neurotransmisjon har vist seg å modulere foringsoppførsel i forskjellige arter, inkludert Drosophila 8-9. Matekrets i Drosophila er en forholdsvis enkel krets som kan brukes som en modell for å korrelere den funksjonelle utgang (foring) med forandringer i utviklingen av de aksonale projeksjoner fra hjernen til den forutgående. Schoofs et al. har vist at Drosophila larve fôring er regulert av sentrale mønstergeneratorer som påvirker muskulaturen 10. Mens den spesifikke muskel anatomi er ikke helt forstått, har det vist seg at antennal nerve, maxillary nerve, og prothoracic tilbehøret nerve er ansvarlig for de muskuløse målene som er involvert ifôring atferd. De fleste data som involverer muskulaturen og nerve anatomi av virvelløse fôring er begrenset til Calliphora larver.
Den tilførselshastighet på annen instar larver kan vurderes ved tilbaketrekning av cephalopharyngeal sclerites (munn kroker), og er reproduserbar og høy gjennomstrømning. De cephalopharyngeal platene er innervert av fibre fra sentrale 5-HT-neuroner via frontpartiet nerve. Den proventriculus, eller forutgående, er innervert av serotonerge fibre (recurrens nerven) som fasciculate i mellomtarmen og som er ansvarlig for sammentrekninger av forutgående (Figur 1) 11-12. Endringer i aksonal forgrening, og antallet og størrelsen av åreknuter langs neurite lengde, kan kvantifiseres ved hjelp av immunhistokjemiske teknikker. Manipulering av neuronal 5-HT under utvikling, enten direkte eller indirekte kan endre den funksjonelle resultatet av denne matekrets, som kan vurderes og korrelert med forandringer i morphology av neurite arkitektur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
En. Vedlikehold av befolkningen Cages
- Oppretthold populasjons bur ved 25 ° C på en 12 timers lys-mørke-syklus. Så lenge kontroll-og forsøksgruppene er utsatt for de samme belysningsforhold, da denne teknikken kan utføres i en standard laboratorie-omgivelser.
- Tillate kvinner å legge egg over natten på eplesaft-agar plater.
- Samle nyklekkede larver ved å opprettholde platene med nylig avsatte egg ved 25 ° C i 24 timer. Plasser en liten porsjon av gjær i midten av platen for å tiltrekke skravert larver.
- Samle en st stadiums larver som har migrert inn i gjær lime i midten av eplejuice plate. Bruk en metallspatel for å overføre den til en fersk eplejuice plate. Ekstra gjær lim kan legges for å sikre at det er tilstrekkelig mat til de analysene er utført. Drue juice plater kan også brukes i stedet for eplejuice plater.
- Skaffe sent 2 nd-tidlig 3. instar larvae ved at en st instars til alder for 40-48 hr. Innenfor dette området fôring priser er konstant 13. Alder kan bekreftes ved undersøkelse av munnen kroker som det er tydelige endringer i denne strukturen med hver larve molt.
- Late 2 nd-tidlig 3. stadiums larver er samlet for atferds analyser ved forsiktig og grundig vask eplejuice plater med vann og samle larvene på en maskefilteret. Larvene blir deretter overført til en agar-plate.
- Alle analysene er utført i parallell ved hjelp av kontroll-og forsøksdyrene.
2. Behavioral Paradigm - Locomotion
- Plasser ett enkelt 3. instar larve på en 2% agar underlaget i en 100 mm vev kultur fatet og la larven å akklimatisere seg i 30 sek. Larver bruke sine cephalopharyngeal sclerites (munn kroker) for å drive sine organer over overflaten av agar underlaget. Dette gjøres på en separat plate fordi jegt er vanskeligere å visualisere kropps sammentrekninger i gjærløsning som dyret er nesten den samme farge som gjær.
- Observere og registrere hver posterior til anterior bevegelse over substratet i en periode på 1 min. n = 20 for hver genotype. Ikke mer enn 10 dyr skal analyseres per plate.
Tre. Behavior Paradigm - Fôring
- Ved hjelp av butt Inox # 5 pinsett, omhyggelig overføre 3. instar larve fra bevegelses agarplate til sentrum av en agar-fylte plate belagt med 5 ml av 2% aktivert bakegjær løsning. Sørg for at løsningen er homogen som gjæren kan synke over tid. Når du er i gjær løsning, vil larver i stor grad forbli på plass og fôr, tilrettelegging observasjon av atferd. Frekvensen av munn krok sammentrekninger korrelerer direkte med mengden mat inge 14.
- Tillat larve å akklimatisere seg i 30 sek.
- Observere og registrere antallmunn krok sammentrekninger for en periode på 1 min. n = 20 for hver genotype.
4. Larve Gut Disseksjoner
- Foreta en 4% EM-grade formaldehydfikseringsløsning i 1x fosfat-bufret saltvann (PBS) og plasseres i en 3-brønns flekk glass.
- Nøye dissekere ut vandrende sent 3. Instar larve guts i en 3-vel glassfat ved hjelp 1x PBS løsning, noe som gjør at hver gang at proventriculus er igjen intakt. Med ett forcep, holder den bakre enden, og med den andre, holder munnen kroker. Mens du holder bakre enden immobile, trekk forsiktig i munnen kroker for å få tilgang til de guts. Fjern eventuelle tilknyttede vev (spyttkjertler, hjerne, fett kroppen, osv.), og deretter overføre hver gut til 3-brønnen fatet inneholder formaldehyd fix. Vandrende 3. instar larve blir brukt fordi på dette stadiet av utviklingen, larven opphøre fôring i forberedelse til pupariation, og proventriculus er ryddet for gjær. <li> innvoller Inkuber ved 4 ° C over natten i en ugjennomsiktig vevskultur-boksen.
- Før du fjerner formaldehyd fikseringsløsning fra brønner, fjerne mage caeca og klippet midgut ~ 150 mikrometer 2 fra proventriculus slik at anslag kan tydelig sees uten hinder.
- Fjern formaldehyd fastsette fra brønnen og erstatte med 1x PBT (1 x PBS, 0,1% protease-fritt okseserum-albumin, 0,1% Triton X-100) bufferoppløsning. Grundig vask guts 6x for 10 min i 1x PBT. Plasser vevsprøver på en mekanisk rotator mens du gjør vasker.
- Inkuber ved 4 ° C i 1 time i 10 -6 M 5-HT for å øke serotonin signalering. Grundig vask guts 6x for 10 min i 1x PBT. Tidligere studier har vist at denne konsentrasjonen av eksogen 5-HT har ingen innvirkning på neuronal arkitektur eller åreknute tetthet i immunhistokjemiske analyser og bare forbedrer signal-til-støy-forhold 15-16.
- Inkuber ved 4 &# 176; C over natten i anti-serotonin primær antistoff (monoklonalt oppvokst i mus eller polyklonale oppvokst i kanin). Grundig vask guts 6x for 10 min i 1x PBT. Plasser vevsprøver på en mekanisk rotator mens du gjør vasker.
- Inkuber ved 4 ° C i 90 min i sekundært antistoff (Alexa Fluor 568 geit anti-mus eller anti-kanin IgG, 1:400 fortynning). Grundig vask guts 6x for 10 min i 1x PBT. Plasser vevsprøver på en mekanisk rotator mens du gjør vasker.
- Inkuber i 4 mM natrium-karbonat i 10 min på en mekanisk rotator, deretter montere i 4% n-propyl gallate/20 mM natriumkarbonat, og visning i henhold til fluorescens. Natriumkarbonat er brukt for å konvertere prøvene til bufferen og pH anvendes i mountant media.
- Ta bilder av immunfargete vevsprøver på 400X forstørrelse for analyse.
5. Analyse av nevrale kretser
- Neurite fibre ble kvantifisert (antall og størrelse av åreknuterog grad av forgrening) bruker Neuroleucida og Neuroexplorer. Men dette kan også gjøres manuelt eller ved hjelp av Simple neurite Tracer (et gratis program som kan lastes ned på nettet).
- Spore de enkelte fiber anslag fra hjernen til proventriculus og kvantifisere åreknute nummer, grener og antall store åreknuter per lengdeenhet. De aksonale fibre utstikk fra hjernen er samlet inn i recurrens nerve og er ikke tilgjengelige for analyse før de når proventriculus der de separate og fasciculate.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Det serotonerge matekretsen i Drosophila larven kan tjene som en ekstremt effektiv modell for å observere påvirkning av spesielle faktorer på nervesystemet utvikling. Ved kvantifisering mating hastighet, er det mulig å forbinde aksonal arkitekturen av foringskretsen med dets funksjonelle utgang (figur 1). Den lokomotoriske assay anvendes som en fysiologisk kontroll for retraksjon av munn kroker, siden larver bruker sine munn kroker til å drive seg selv på tvers av overflaten av agaren. Det bør ikke være noen forskjell i bevegelsesapparatet respons mellom kontroll og mutante genotyper hvis mutasjonene bare påvirke fôring krets 8 (Figur 2A). Hvis signifikante forskjeller forekommer, er det mulig larve atferd ble kompromittert av feil håndtering. Dersom larvene stopp under analysen for å forsøke å grave gjennom agar underlaget, kan de være for gammel, og er trolig overgangen til vandrende instars.Det er også mulig agar underlaget kan være for hardt, og dermed gjør det vanskelig for larve munnen kroker for å ta tak i agar underlaget, og dette kan løses ved å fukte agar overflaten.
Denne analysen kan brukes til å vurdere hvorvidt Drosophila stammer med neuronal anatomiske defekter påvirke utviklingen av serotonerge matekretsen. Mutant ellipsoid legeme åpent (ebo 3) har en strukturell feil i ellipsoiden delen av den sentrale kompleks. Sammenligning med villtype foreldre Canton-S belastning, CS wu, avslører at disse anatomiske defekter i hjernens utvikling resultere i deprimerte foring, mens bevegelse er upåvirket (figur 2B).
De anatomiske defekter i ebo 3 mutanter synes å endre utviklingen av neurite arkitektur i tarmen. Figur 3 viser endringene i fiber arkitektur i ebo tre larver selskaperrød med CS wu, og disse larver viser en økning i forgrening, så vel som en økning i antallet av både små og store åreknuter langs neurite lengde. Legg merke til avdelings noder (piler), åreknuter (pilspisser), og store åreknuter (skjult). Figur 4 representerer kvantifisering av disse bildene.
Riktig kvantifisering av aksonal arkitektur krever at bildene være svært tydelig. Figur 5A representerer et bilde egnet for analyse. Bilder av dårligere kvalitet vil gjøre det vanskelig å skille mellom fiberen og varicosities (figur 5B). Ved fotografering av fiber-arkitektur, unngå å ta bilder som omfatter fremspringene på den fremre av proventriculus, siden fibrene er buntet tett, og er skilt fra hverandre, og kan opptre som om de er forgrenet. Flere bakre fibre innenfor midgut er mer forgrenet fordi de fasciculate når de en re i løpet av dette vevet. Kvantitering av grenen og åreknute antall og størrelse av åreknuter, kan analyseres manuelt eller via et program utviklet for det formål å studere neurite morfologi, slik som Neuroleucida. Så lenge proventriculus ikke er skadet under immunhistokjemiske protokollen, og bildet er i fokus, vil forberedelsene være akseptabelt for bildebehandling og analyse. Hvis fiberen arkitekturen er klart skjelnes fra bakgrunnen, og hvis enkelte varicosities kan identifiseres langs neurite lengde, er preparatet egnet for analyse. Likeledes, hvis enkelte varicosities kan identifiseres fra resten av fiberen, er dette også en annen indikator på en bildekvalitet for analyse. Alle fibre er analysert med unntak av de som utenfor rekkevidden av fokus (i noen tilfeller fibrene vil kurven mellom flere plan av fokus).
es/ftp_upload/51062/51062fig1.jpg "width =" 500px "/>
Figur 1. Den larveforingskretsen. Kilsveiset en av 3. instar larve viser hjerne-og tarmvevet (A). Gut vev dissekert fra 3. instar larver ble immunostained med et antistoff dannet mot Drosophila neuronal tryptofan hydroksylase (DTRH, B) eller 5-HT ( C). A, B. E, spiserør, Mh, munn kroker, Pr, proventriculus, Br, hjernen (merk mønsteret av 5-HT-neuroner). Arrowhead betegner frontal nerve, arrow, det recurrens nerve C.. proventriculus viser aksonale fibre (pilspisser). Scale bar = 20 mikrometer. Klikk her for å se større bilde .
<br /> Figur 2. Anatomiske defekter i hjernens utvikling resulterer i deprimerte forings oppførsel. Dyrene ble analysert med hensyn på lokomotorisk (A) og foringsvirkemåter (B). Locomotion var upåvirket. n = 20 for hver atferdsanalyse, 2-3 uavhengige eksperimenter. **** P <0,0001, uparet t-test. Linjer over grafen skildre standard feil av gjennomsnittet. Klikk her for å se større bilde .
Figur 3. Anatomiske defekter under utvikling av CNS resultater i aberrasjon i tarmen fiber arkitektur. Gut vev dissekert fra 3 rd stadiums larver og immunostained med anti-5-HT. Arrow betegner gren node. Arrowhead betegner en liten åreknute. Asterisk debemerker stor åreknute. Scale bar = 40 mikrometer. Klikk her for å se større bilde .
Figur 4. Anatomiske defekter i hjernens utvikling resultere i avvikende gut fiber-arkitektur. Analysis of Proventricular vev fra 3. instar larver dissekert og inkubert med anti-5-HT. Neurite forgrening (B), antall totale varicosities per 0,1 mm neurite lengde (B), og antall store åreknuter (> 1/iM 2) per 0,1 mm lengde (C). CS wu, 20 fibre fra 17 guts fra to uavhengige eksperimenter, ebo 3, 20 fibre fra 18 guts fra tre uavhengige eksperimenter. **** P <0,0001, ** p <0.01, * p <0,05, uparet ttest Lines over grafen skildre standard feil av gjennomsnittet. Klikk her for å se større bilde .
Figur 5. Kvalitet av bilder som er viktig for riktig kvantifisering av tarmen fiber-arkitektur. Gut vev dissekert fra CS wu tredje instar larver og immunostained med anti-5-HT. (A). God kvalitet. (B). Dårlig kvalitet. Scale bar = 40 mikrometer. Klikk her for å se større bilde .
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Avvikende utvikling av serotonerge stomatogastric krets, som oppstår under sent embryogenese, vil påvirke sin modne funksjon. Endringer i neurite arkitekturen innervating tarmen kan være korrelert med den funksjonelle utgangen av kretsen, som mates hastighet (målt ved munn krok sammentrekninger i en gjæroppløsning) (figur 1). Bruken av UAS-Gal4 todelt system i Drosophila gjør det mulig å spesifikt målrette opp-eller ned-regulert ekspresjon av et bestemt transkript til et bestemt vev, endringer i ekspresjonen av et gitt protein kan nettopp kvantifiseres gis de passende verktøy. Denne teknikken kan brukes til å belyse de områder av hjernen, og selv neuronal undergrupper som er nødvendige for utviklingen av en spesifikk neural krets.
Den lokomotoriske assay brukes for å bekrefte at larvene ikke på andre måter fysiologisk kompromittert, og derfor larver med 40 kroppsvegg sammentrekninger eller mindre should bli ekskludert fra analysene (figur 2a). Dette kan skje enten fordi genotype forårsaker fysiske abnormiteter, eller fordi enkelte dyr har blitt skadet under håndtering. I tillegg må temperaturen i rommet hvor analysen er utført for å bli styrt, siden kjøle eller høyere temperaturer kan påvirke dataene. Det anbefales å utføre denne atferden analysen mellom 24-26 ° C. På dagene når temperaturen i testrommet er kjøligere, agar har den en tendens til å stivne, og derfor vil gjenfukting av agar plate blir nødvendig etter hvert lokomotiv assay blir utført for å sikre at den er tilstrekkelig myk agar. Det er viktig å holde agar plate for bevegelse fuktig (ikke våt), for å tillate at larvene til å bevege seg langs overflaten og for å hindre dem fra å grave. Kjøligere temperaturer påvirker også ytelsen av larver på agar-substrat, som larver har en tendens til å reise langs fortrinns temperaturer (24-26 ° C) 17-18. No mer enn ti dyr skal analyseres per plate, og kast en plate med punkteringer i agar underlaget.
Ved utførelse av forings analysen, er det viktig å være klar over at den gjærsuspensjonen vil synke med tiden, virvlende av gjær på tallerkenen sørger for gjæren forblir homogene i løpet av analysen. Redusert synligheten av munn kroker kan oppstå hvis gjær-løsningen blir for konsentrert. Healthy larver plasseres i gjærmedier kontrakt sine munn kroker omtrent 150 til 170 ganger per min, redusert fødeinntak kan være så lav som 120, og den øvre grense er 210.
Når du utfører immunhistokjemiske protokollen, er det lurt å immunostain både kontroll og eksperimentelle vevsprøver i parallell for å sikre lik kvalitet på vevsprøver. Immunfluorescens av neurite arkitektur innervating tarmen kan bli styrket ved inkubasjon vevsprøver i primær antistoff natten ved 4 ° C. Inkubasjonstiden of antistoff ved 4 ° C forbedrer signal-til-støy-forhold (figur 5). Kvaliteten av bildene er meget viktig, da dette er kritisk for nøyaktig kvantifisering av fiber-arkitektur (figur 3) for å avdekke endringer i forgrening og åreknute antall og størrelse (figur 4). Kvaliteten på vevsprøver kan bli ødelagt dersom den rotator benyttes under vaskeperiodene varmes opp på et punkt av konstant bruk. Mens bildebehandling vevsprøver være sikker på ikke å forlate prøvene under mikroskopet lys for lenge, da dette vil redusere immunfluorescens av prøvene, ikke bare den ene som er under fokus, men omkringliggende prøvene også. Analyse av fiber arkitektur kan lett gjennomføres ved hjelp av programvare, men fortsatt kan også utføres manuelt. Klassifisering av små og store åreknuter refererer til området av åreknuter, åreknuter måle større enn 1 mikrometer 2 er klassifisert som store åreknuter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Vi har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Forfatterne ønsker å takke presidentens Forskningsfond fra Saint Louis University tildelt WSN
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Eclipse E-800 Microscope | Nikon Instruments | ||
| Neuroleucida | MBF Biosciences | NL-15 | Used to analyze gut fiber architecture, not necessary to have |
| Northern Eclipse | Empix Inc | Imaging software | |
| G-2E/C TRITC EX 528-553 | Nikon Instruments | 96312 | Filter for specific secondary antibody |
| N.A. 0.75; W.D. 0.72 mm; DIC Prism: 40xI, 40x I-C; Spring loaded | Nikon Instruments | MRH00400 | Objective used for imaging |
| Simple Neurite Tracer | NIH Image J | http://fiji.sc/Simple_Neurite_Tracer |
References
- Weiss, E., Maness, P., Lauder, J. Why do neurotransmitters act like growth factors? Perspect Dev Neurobiol. 5, 323-335 Forthcoming.
- Herlenius, E., Lagercrantz, H. Neurotransmitters and neuromodulators during early human development. Early Hum. Dev. 65, 21-37 Forthcoming.
- Budnik, V., Wu, C., White, K. Altered branching of serotonin-containing neurons in Drosophila mutants unable to synthesize serotonin and dopamine. J. Neurosci. 9, 2866-2877 (1989).
- Sodhi, M., Sanders-Bush, E.
- Goldberg, J., Kater, S. Expression and function of the neurotransmitter serotonin during development of the Helisoma nervous system. Dev. Biol. 131, 483-495 (1989).
- Goldberg, J. Serotonin regulation of neurite outgrowth in identified neurons from mature and embryonic Helisoma triyolvis. Perspect Dev Neurobiol. 5, 373-387 (1998).
- Haydon, P., McCobb, P., Kater, S. Serotonin selectively inhibits growth cone motility and synaptogenesis of specific identified neurons. Sci. 226, 561-564 (1984).
- Neckameyer, W. S. A trophic role for serotonin in the development of a simple feeding circuit. Dev. Neurosci. 32, 217-237 Forthcoming.
- De Vry, J., Schreiber, R. Effects of selected serotonin 5-HT 1 and 5-HT 2 receptor agonists on feeding behavior: possible mechanisms of action. Neurosci. Biobehav. Rev. 24, 341-353 (2000).
- Schoofs, A., Niederegger, S., van Ooyen, A., Heinzel, H., Spieß, R. The brain can eat: Establishing the existence of a central pattern generator for feeding in third instar larvae of Drosophila virilis and Drosophila melanogaster. J. Insect Physiol. 56, 695-705 (2010).
- Spieß, R., Schoofs, A., Heinzel, H. Anatomy of the stomatogastric nervous system associated with the foregut in Drosophila melanogaster and Calliphora vicin third instar larvae. J. Morphol. 269, 272-282 (2008).
- Neckameyer, W. S., Bhatt, P. Neurotrophic actions of dopamine on the development of a serotonergic feeding circuit in Drosophila melanogaster. Biomed Cent NeuroSci. 13, 26 (2012).
- Sewall, D., Burnet, B., Connolly, K. Genetic analysis of larval feeding behavior in Drosophila melanogaste. Genet. Res. 24, 163-173 (1975).
- Joshi, A., Mueller, L. Evolution of higher feeding rate in Drosophila due to density-dependent natural selection. Evolution. 42, 1090-1093 (1988).
- Budnik, V., Wu, C., White, K. Altered branching of serotonin-containing neurons in Drosophila mutants unable to synthesize serotonin and dopamine. J. Neurosci. 9, 2866-2877 (1989).
- Sykes, P., Condron, B. Development and sensitivity to serotonin of Drosophila varicosities in the central nervous system. Dev. Biol. 286, 207-216 (2005).
- Garrity, P. A., Goodman, M. B., Samuel, A. D., Sengupta, P. Running hot and cold: behavioral strategies, neural circuits, and the molecular machinery for thermotaxis inC. elegansand Drosophila. Genes Dev. 24, 2365-2382 (2010).
- McKemy, D. D.
