Hier beschreiben wir ein Verfahren zum schnellen und genauen Messung der Flugleistung in Drosophila, was eine Hochdurchsatz-Screening.
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Methodenartikel
Ein verbessertes Verfahren für genaue und schnelle Messung der Flugleistung in
In diesem Artikel
Zusammenfassung
Zusammenfassung
Drosophila hat sich als ein nützliches Modellsystem für die Analyse des Verhaltens, einschließlich der Flug sein. Die ersten Flug Tester beteiligt Drop fliegt in eine Öl-beschichtet Messzylinder; Landehöhe ein Maß für die Flugleistung durch die Beurteilung, wie weit entfernt fallen wird vor der Herstellung genug Schub, um den Kontakt mit der Wand des Zylinders zu machen. Hier beschreiben wir eine aktualisierte Version der Flug-Tester mit vier großen Verbesserungen. Zuerst haben wir eine "Fallrohr", um sicherzustellen, dass alle Fliegen geben Sie die Flug Zylinder bei einer ähnlichen Geschwindigkeit zwischen Studien, wodurch die Variabilität zwischen den Nutzern. Zweitens, die Ölschicht ersetzt wir mit herausnehmbaren Kunststoffplatten in Tangle-Falle, einem Klebstoff entwickelt, um lebende Insekten einzufangen beschichtet. Drittens verwenden wir einen Zylinder mehr, um genauere Unterscheidung der Flugfähigkeit zu ermöglichen. Vierte verwenden wir eine Digitalkamera und Bildbearbeitungssoftware, um die Scoring der Flugleistung zu automatisieren. Diese Verbesserungen ermöglichen die Rap-id, quantitative Bewertung der Flugverhalten, nützlich für große Datenmengen und große genetische Bildschirme.
Einleitung
Drosophila ist seit langem verwendet, um die genetischen Grundlagen von Verhalten 1 zu studieren, und Forscher haben eine Reihe von Möglichkeiten, um verschiedene Arten von Verhalten analysieren 2-6 entwickelt. Fliegen haben sich als besonders nützlich, um nützliche Modelle von neuromuskulären Erkrankungen 7 gewesen. Ein gemeinsamer Test verwendet, um Bewegungsverhalten zu studieren, ist Flugleistung. Die ursprünglichen Flug Tester ist nützlich für die Identifizierung Flug Mutanten und quantitative Bewertung der Flugfähigkeit ein, aber es hat einige Mängel, die seine Anwendung für Hochdurchsatz-Screening zu begrenz....
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Protokoll
1. Montieren Flug Tester
- Sichere Flug Zylinder Ring Stand 1 mit Spannketten. (Lassen Sie ca. 3 cm unterhalb des Zylinders für wiegen Gericht.)
(Anmerkung: Der Flug Zylinder wir benutzen, ist 90 cm lang, mit einem Durchmesser von 13,5 cm.) - Legen Sie wiegen Schale mit einer dünnen Schicht von Mineralöl unter der Flug Zylinder.
- Sichere Trichter Ring Stand 2 mit einem Klemmring und Klauenklemme. Einstellen der Höhe des Trichters, so daß der Boden des Trichters ist bündig mit der Oberseite des Luftzylinders. (Anmerkung: der Spitzendurchmesser des Trichters muß kleiner als der Außendurchmesser der Röhrchen in die Fallrohre angeordnet, ....
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Ergebnisse
1A zeigt eine schematische Darstellung des aktuellen Flug Tester Montage. 1B zeigt die Spur Design ermöglichen die Kamera zu einem Panoramabild, ohne dabei das Sichtfeld zu nehmen. Repräsentative Ergebnisse sind in Abbildung 2, wo die Flugleistung der Langweiler mutierten Fliegen, die eine bekannte Flug Defekt 8-10 haben, werden zu Wildtyp-Canton-S fliegt Vergleich gezeigt. Kontrolle fliegt konsequent landen in der Nähe der Oberseite d.......
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Diskussion
Mit den hier beschriebenen Methoden haben wir in der Lage, schnell zu beurteilen Flugleistung aus einer großen Anzahl von Drosophila-Mutanten, die Bereitstellung effizienter als bisher möglich. Für unsere Experimente haben wir routinemäßig zu trennen Männer und Frauen, und heben Sie sie bei geringer Dichte (weniger als 20 Fliegen / Fläschchen), um Aggression, die Flügel Schaden zu begrenzen. Ein weiterer wichtiger Aspekt ist für die Unterschiede in der Flugleistung wegen der unterschiedlichen genetischen Hinter.......
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Offenlegungen
Die Autoren haben keine Interessenkonflikte offen zu legen.
Danksagungen
Diese Arbeit wurde vom National Institutes of Health gewährt F32 NS078958 (DTB) und R01 AG033620 (BG).
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Materialien
| Name | Unternehmen | Katalognummer | Kommentare |
|---|---|---|---|
| Spachtel | Home Depot | 630147 | www.homedepot.com |
| Kiefern-Rückenbandleiste (2x) | Home Depot | 156469 | www.homedepot.com |
| Furring Strip Board | Home Depot | 164704 | www.homedepot.com |
| Tangle-Trap Insektenfallen-Beschichtung | BioControl Network | 268941 | www.biconet.com |
| Laptop Computer | Apple | www.apple.com/mac/ | |
| Mineralöl | Fisher Scientific | BP26291 | www.fishersci.com |
| Weiße Plakatwand | Staples | 247403 | www.staples.com |
| Wiegeschale aus Polystyrol | Fisher Scientific | S67091A | www.fishersci.com |
| ImageJ Software | National Institutes of Health | http://rsb.info.nih.gov/ij/ | |
| Digitalkamera | Sony | DSC-TX7 | www.store.sony.com |
| Feine Pinzette | Fine Science Tools | www.finescience.com | |
| Zylinder aus Polycarbonat (Fallrohr) | McMaster-Carr | 8585K62< | a href="http://www.mcmaster.com">www.mcmaster.com |
| Flugzylinder (Acryl) | McMaster-Carr | 8486K943 | www.mcmaster.com |
| Polycarbonatplatten | McMaster-Carr | 85585K25 | www.mcmaster.com |
| Ringständer (2x) | Fisher Scientific | S47808 | www.fishersci.com |
| Ringhalterung | Fisher Scientific | S47791 | www.fishersci.com |
| Dreipolige Verlängerungsklemmen (x2) | Fisher Scientific | 05-769-7Q | www.fishersci.com |
| Trichter | Fisher Scientific | 10-500-3 | www.fishersci.com |
| Kettenklemmen (2x) | VWR | 21573-275 | www.vwr.com |
| Glasfläschchen | VWR | 66020-198 | www.vwr.com |
Referenzen
- Benzer, S. Genetic dissection of behavior. Sci. Am. 229, 24-37 (1973).
- Ali, Y. O., Escala, W., Ruan, K., Zhai, R. G. Assaying locomotor, learning, and memory deficits in Drosophila models of neurodegeneration. J. Vis. Exp. , e2504(2011).
- de Vries, S. E., Clandinin, T.
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Nachdrucke und Genehmigungen
