Summary
För att förbättra vår kunskap om cellulära och molekylära neotissue bildning, var en musmodell av TEVG nyligen utvecklats. Grafterna implanterades som infrarenala hålvenen inskjutning transplantat i C57BL / 6 möss. Denna modell uppnår liknande resultat som de uppnått i vår kliniska undersökningar, men över en mycket kortare tid-kurs.
Abstract
Biologiskt nedbrytbara ställningar sådda med benmärgsmononukleära celler (BMCs) används ofta för rekonstruktiv kirurgi för att behandla medfödda hjärt anomalier. De långsiktiga kliniska resultaten visade utmärkta öppna kärl, dock med betydande förekomst av stenos. För att undersöka de cellulära och molekylära mekanismer av vaskulär neotissue bildning och förhindra stenos utveckling inom vävnadstekniska vaskulära transplantat (TEVGs) utvecklade vi en musmodell av transplantatet med ca 1 mm innerdiameter. Först var de TEVGs sammansatta av biologiskt nedbrytbara rörformiga ställningar tillverkade av en polyglykolsyra nonwoven filt mesh belagd med ε-kaprolakton och L-laktidsampolymer. Ställningarna placerades sedan i en lyofiliseringsanordning, sugits för 24 tim, och lagrades i en exsickator tills cellsådd. För det andra, var benmärgs insamlats från donatormöss och mononukleära celler isolerades genom densitetsgradientcentrifugering. För det tredje, ungefär en miljon celler varympades på en byggnadsställning och inkuberades O / N. Slutligen tillsattes de sådda ställningar implanterades sedan såsom infrarenala hålvenen inskjutning transplantat i C57BL / 6 möss. De implanterade transplantat visat utmärkt öppenhet (> 90%) utan tecken på tromboemboliska komplikationer eller aneurysmal bildning. Denna musmodell kommer att hjälpa oss att förstå och kvantifiera de cellulära och molekylära mekanismer av neotissue bildning i TEVG.
Introduction
Medfödda hjärtfel är allvarliga tillstånd som påverkar nästan 8% av levande födda i USA. Cirka 25% av dessa barn med medfödda hjärtfel eller 2,4 per 1.000 levande födda, kräver invasiv behandling i det första året av sitt liv 1. Den mest effektiva behandlingen för medfödd hjärtsjukdom är rekonstruktiv kirurgi. Tyvärr, komplikationer uppstår vid användningen av dagens kärl ledningar är den viktigaste orsaken till postoperativ morbiditet och mortalitet.
För att lösa detta problem har vi utvecklat de första vävnadstekniska kärlimplantat (TEVGs) för klinisk användning 2. TEVGs konstruerades från biologiskt nedbrytbara polyesterrör sådda med autolog benmärgs härrör-mononukleära celler (BM-MNC) och implanteras som venösa ledningar för medfödda hjärtoperation. Resultaten visade utmärkta öppna kärl vid 1-3 års uppföljning, men med betydande förekomst av stenos
Den murina IVC mellanliggande modell troget rekapituleras processen för neovessel bildning som förekommer i stora djur och människor, men under en mycket kortare tidsförlopp 6-9. Här, ett detaljerat protokoll för småskalig graft tillverkning med hjälp av biologiskt nedbrytbara ställningar, var BM-MNC skörd och isolering, BM-MNC seeding på schavotten, och graft implantation i en musmodell som beskrivs.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OBS: Alla animaliska förfaranden godkändes av Nationwide barnsjukhuset Institutional Animal Care och användning kommittén.
1. Graft Manufacturing
- Gör ε-kaprolakton och L-laktidsampolymer P (LA / CL)-lösning genom att tillsätta 100 mg P (LA / CL) i 2 ml dioxan under en huv. Placera lösningen på en vortex och blanda kontinuerligt under 1-1,5 timme för fullständig upplösning.
- Under tiden, ta ett blad av polyglykolsyra (PGA) kände från frysen och klipp ut flera 5 x 8 mm sektioner. Också avskurna spetsen av en 0,1-10 l pipett precis ovanför filtret.
- Sätt en 19 G nål (1,5 längd) i den distala änden av en pipett spets och linda PGA kände runt nålen med hjälp av mikro pincett.
- Tryck försiktigt filten till den distala änden av pipettspetsen, där hålrummet är rakare än den proximala delen med hjälp av en trubbig 18 G nål, medan den 19 G-nål sätts in i den.
- Pipett40 | il P (CL / LA)-lösning in i pipettspetsen från toppen. Mätta PGA kände med lösningen. Tryck sedan luftbubblor med hjälp av en pipett dispenser. Upprepa processen om det behövs.
- Placera transplantat i en 50 ml tub och placera den i en -80 ° C frys i 20 min. Se till att chefen för nålar inför nedåt.
- Överför röret i en lyofilisator och vakuum under 24 timmar. Se till att öppna locket på röret för att få luftflöde.
- Ta ut transplantaten och ta bort dem från barren. Kapa båda ändar av transplantatet som lämnar en mm avsnitt ~ 5 och lägg tillbaka dem på nålar för att behålla sin form. Håll transplantat i en torkapparat.
- Placera ställningen under UV-ljus i en biosäkerhet huva O / N innan cellsådd.
2. Benmärgsmononukleära celler Skörd och Isolering
- Euthanize mössen med ketamin / xylazin överdosering (ketamin, 200 mg / kg och xylazin, 20 mg / kg).
- Ta bort ben (lårben end skenben) från 3 möss för 10 transplantat implantationer och lägg i en petriskål med 10 cc RPMI. Skär båda ändarna av ben och spola benmärg med hjälp av en spruta med en 25 G nål i en ny petriskål med 3 ml RPMI. Samla benmärg och RPMI lösning i en 15 ml tub och tvätta petriskål med ytterligare 2 cc RPMI att samla resten av BM.
- Ta prov (5-10 l) och räkna celler med hjälp av en automatiserad cellräknare eller hemocytometer. Anteckna resultatet.
- Sätt 5 cc Ficoll i en 15 cc centrifugrör och tillsätt benmärg och RPMI lösning. Lägg lösningen mycket försiktigt så att den inte blandas med Ficoll.
- Centrifugera vid 528 x g under 30 min med "NEJ BRAKE" vid 24 ° C.
- Ta bort den övre rosa lagret. Samla mitten klart skikt Figur 1, som är den MNC-skiktet och späda ut det med PBS 1:01.
- Centrifugera den utspädda MNC lösningen vid 528 xg under 10 minuter vid 24 ° C.
- Avlägsna supernatanten och dilute pelleten med 5 ml PBS.
- Centrifugera pelleten lösningen vid 528 x g under 10 min vid 24 ° C.
- Avlägsna supernatanten. Späd pelleten med lämplig volym av RPMI (~ 200 l).
- Ta ett 5 till 10 | il prov och räkna cellerna med hjälp av en automatiserad cellräknare eller hemocytometer. Anteckna resultatet. Upprepa cellräkning en mer tid och beräkna den genomsnittliga cellantalet.
- Späd cellkoncentrationen till 1.000.000 celler/10 pl använda RPMI.
3. Cell Seeding
- Prewet scaffold genom tillsats av 5 | il RPMI luminally under 5 minuter, därefter avlägsna RPMI.
- Addera 10 pl benmärg härledda mononukleära celler i RPMI från steg 2,12 till ställningslumen och vänta 10 min för att tillåta cellerna att fästa på ställningen.
- Skär en 19 G-nål till en cm längd och placera nålen i lumen av byggnadsställning för att hålla formen på byggnadsställningen. Placera provet i en 24-brunnar. </ Li>
- Lägg 1000 il RPMI till varje brunn och inkubera O / N i en inkubator.
4. Graft implantation
- Autoklavera alla kirurgiska verktyg innan operationen: 1x fina saxar, 3x mikro pincett, 2x mikrokärlklämmor, 1x klämma tillämpar pincett, 1x micro nål, 1x våren sax, 1x upprullningsdon.
- 6-8 veckor gamla kvinnliga C57BL / 6 används som vävnadstekniska kärltransplantat mottagare. Ta bort musen från sin bur och väga det, då söva genom en intraperitoneal injektion i den nedre högra kvadranten av buken med en ketamin / xylazin cocktail (ketamin, 100 mg / kg och xylazin, 10 mg / kg). Ketoprofen (5 mg / kg, IP) används som en pre-anestesi smärtstillande.
- Kontrollera nivån på sedering av sagan klämmande, sedan klippa buken håret. Smörj ögonen med steril oftalmologiska salva, och placera musen i en ryggbakåtlutad kroppsställning ställning på ett block. Desinficera buken med Betadine och spritsuddar. Cover musen med en steril duk och exponera snittet enda område.
- Gör en mittlinjen laparotomi snitt underifrån xyphoid till suprapubisk regionen, och sätt ett själv behålla upprullningsdon. Linda tarmarna i saltlösning fuktad gasväv. Rakt på sak definiera den infrarenala aortan och hålvenen.
- Placera två mikrokärlklämmor på både proximala och distala sidorna av aorta och vena cava sedan rakt på sak separera aorta från vena cava transekt hålvenen. Om det behövs, underbinda de buk-aortic grenarna med en 10-0 monofilamentsuturer på koniska nålar.
- Implantera en nedre hålvenen inter transplantat med proximala och distala ändan till anastomoser med en steril 10-0 sutur. Trimma transplantat, vanligen 1-2 mm, beroende av anatomin hos musen. Säkra transplantat med en söm på både proximala och distala ändar och börjar sutur kontinuerligt med 4-5 stygn från den andra sidan av transplantatet. Efter avslutad framsidan, vänd klämmorna och transplantattill den andra sidan och sutur baksidan av transplantatet. Under implantation, spola transplantatet med heparinlösning ofta för att förhindra akut trombos.
- Ta bort den proximala klämman och kontrollera blödning genom att tillämpa en aktuell absorber steril hemostat agent. När blödningen stoppas helt, ta bort den distala klämman och kontrollera blödning på samma sätt. Se till att blodet flyter genom transplantatet.
- Stäng bukmuskulaturen och huden i två lager med hjälp av en 6-0 svart polyamid monofilamentsutur med inkluderade gängad nål.
- Injicera 0,5 ml koksaltlösning subkutant och placera musen i en återhämtning bur på en uppvärmning pad tills musen är helt mobil. Vid återhämtning, tillbaka musen till en ny bur med papper strö. Ge smärtstillande (Ibuprofen, 30 mg / kg, dricksvattnet) under 48 timmar.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
En schematisk bild av TEVG implantering visas i figur 1. Ades Benmärg skördas från en donator mus och mononukleära celler isolerades med användning av densitetscentrifugering och sedan sås på en bionedbrytbar ställningen. De seedade byggnadsställningar inkuberades O / N och implanteras till en mottagare mus som en nedre hålvenen inter transplantat.
Figur 2 illustrerar den svepelektronmikroskopi av PGA-P (CL / LA) scaffold. Den inre diametern var ca 1 mm och väggtjocklek var ca 0,17 mm. Total porositet var 78,5% och den genomsnittliga porstorlekar var 45,4 ± 17,6 | im.
Brutto bild av en TEVG inskjuten in i IVC av C57BL / 6 möss visas i Figur 3. Direkt efter implantation (A) och 2 veckor efter implantation (B). (C) visar brutto bilden av en infödd IVC i jämförelse. Det är uppenbart attgraft fylldes med neotissue emellertid hålls det fortfarande formen av det ursprungliga transplantatet. Vår tidigare resultat visade att total nedbrytning graft tar upp till 12 veckor 10.
Ultraljuds B-mode och färgdopplerbild av en 2 veckors implanterade TEVG Figurerna 4A-B för att visa öppenhet för de implanterade transplantat. En infödd IVC bilden lades för jämförelse (Figur 4, C). Cell seeding förbättrad patency av transplantatet avsevärt patencies på två veckor för oympade och ympade transplantat är 65% och 91%, respektive (p <0,05, Fischers exakta test).
Figur 5 visar den cellinfiltration och extracellulär matrisdeposition i TEVG efter två veckor efter implantation. Explanterade transplantat färgade med H & E-färgning visade neotissue bildning hela transplantatet och rester av scaffold material (A). Harts och Masson trikrom fläck visade nedfall av elastin i inTIMAL skiktet (B) och kollagen i den mediala skiktet (C). Endothelial cellfoder observerades under hela den intimala skiktet (D) och konfluenta glatta muskelcellerna var närvarande i hela TEVG, speciellt under den EG slemhinnan (E) såsom visas av CD31 och αSMA färgning, respektive. Genom den andra veckan efter implantation, var makrofaginfiltration uppenbar, såsom anges med F4/80 färgning (F).
Figur 1. Schematisk bild av TEVG implantation. Benmärgsmono nukleära celler skördades från en donator mus, sås på en biologiskt nedbrytbar klätterställning, och sedan implanteras som en IVC inter transplantat till en mottagare mus.
tunn-page = "alltid"> 
Figur 2. Svepelektronmikroskopi bilder av en byggnadsställning. Den genomsnittliga ytterdiameter var 1,45 mm, luminala diameter var 1,1 mm och längd var 3 mm.
Figur 3. Implanted TEVG efter två veckor och nativt IVC. A) omedelbart efter implantation, B) två veckor efter implantation, och C) nativt IVC för jämförelse.
fig4.jpg "/>
Figur 4. Ultraljuds bilder 2 veckor och infödda IVC. A) B-läge och B) färgdopplerbild av TEVG efter 2 veckor. C) Infödd IVC för jämförelse.
Figur 5. Bilderna av de 2 veckor efter operativa TEVG. A) H & E (inre lumen), B) Harts (rosa = elastin), C) Massion trikrom (blå = kollagen), D) CD31 (brun = endotelceller), E) αSMA (brun = glatta muskelceller), och F ) F4/80 (brunt = makrofager).
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Den musmodell av TEVG är ett värdefullt verktyg för att studera cellulära och molekylära mekanismer av neotissue bildning och utveckling av stenos. Den ympade BM-MNC visades i både histologiska och SEM-bilder av de sådda cellerna i transplantatet 11. Cell seeding effektivitet visades också med användning av en DNA-analys 7. Med användning av detta modellsystem visade vi att cellsådd minskar förekomsten av utvecklingen av TEVG stenos, vilket var det främsta läget för fel i vår humana kliniska försök 3. De seedade celler försvann snabbt från TEVG, vilket tyder på att de utövar sin effekt via en parakrin mekanism 8,12. Det visades också att neovessel bildning är en immunmedierad regenerativ process och att neovessel uppstår från inväxning av vaskulära celler (EC-och SMC) från intilliggande kärlväggen längs den luminala ytan av ställningen. Dessutom är normalt makrofaginfiltration väsentlig för vaskulär neotissue bildning,men när denna process är överdriven det leder till utveckling av TEVG stenos 7,8. Dessa resultat visar betydelsen av denna musmodell för mänskliga sjukdomar. De mikrokirurgisk teknik kan anpassas till andra kärl-tillämpningar, inklusive arteriella transplantat 13 och artär till venös fistel.
Vi är verksamma över 1.000 IVC inter graft implantationer varje år och dödligheten är mindre än 1%. För en lyckad graft implantation, finns det flera viktiga saker att nämna.
Först injicerbar anestesi dras för denna operation, eftersom det är nödvändigt att stänga av musen runt flera gånger under anastomos. Effekten av anestesi vanligtvis varar cirka en timme och hela operationen tid för en skicklig mikro kirurg är ca 30-45 min, som ger tillräckligt med tid för att slutföra operationen. Om djuret vaknar under operationen, kan 0,05-0,1 ml av en anestesi cocktail injiceras intramuscularly.
För det andra, de flesta av de små aorta grenar behövde ligeras för att förhindra överskott blodförlust samtidigt separera IVC och aorta från buken. Tänk också på att inte skada IVC när den är skild från aorta.
För det tredje, när transplantatet suturerades, de första två suturer på båda sidor är de viktigaste stegen i hela processen. När de inte är placerade försiktigt, är det svårt att skilja de främre och bakre lager av IVC. Om lagren inte är tydligt identifierade, det finns en större chans att misstag sy ihop dem. Medan suturering av IVC till transplantatet, är det viktigt att inte över sträcka IVC, vilket kan orsaka bristningar. Se också till att inte skära av för mycket IVC att ersätta samma längd av transplantatet. Vanligtvis cirka 1 till 2 mm från IVC avlägsnades för att ersätta en 3 till 5 mm transplantat på grund av den längsgående spänningen i IVC. Om samma längden av IVC tas bort, gör det anastomosis extremt utmanande.
För det fjärde finns det betydande stam till stam variationer med avseende på TEVG bildning och stenos utveckling. Exempelvis oympade C57BL / 6 möss (vildtyp) visade en mycket högre hastighet av stenos än SCID / BG-möss (möss med immunbrist) 8,12. Dessutom, från vår erfarenhet, SCID / BG-möss är mycket lättare att använda i jämförelse med C57BL / 6 möss som på grund av sin styvare IVC vägg 14. Ha det i åtanke när man arbetar på en ny stam av möss.
Transplantatet tillverkning, BM-MNC skörd, och cell seeding processer är rakt fram, det finns bara ett par processer för att vara medveten om. För det första, för transplantatet tillverkning, är det mycket viktigt att inte "gäng" filten samtidigt pressa den med 18 G trubbig nål. Vi har provat olika metoder för att trycka filten ned till den distala änden av pipettspetsar. Pushing transplantatet med en trubbig nål visade det bästa resultatet, överlägset. Den inrediametern på den trubbiga nålen är något större än den yttre diametern hos den nål som filten lindas runt. Därför kan mindre nål tätt glider in i den större trubbig nål och filten kan därefter tryckas ned med lika mängder av kraft över hela omkretsen av filten, vilket förhindrar ihopklumpning av filten. Vi konstaterade tidigare att knippen transplantat uppvisade lägre öppenhet på 2 veckor. Dessutom är det viktigt att ta bort alla bubblor eftersom bubblor kommer att orsaka hål på scaffold yta och blod kommer att läcka genom hålet efter implantering. För det andra, när benen är separerade för BM-MNC skörd, se till att rengöra benet så mycket som möjligt så att de inte innehåller för mycket muskler eller hår. Vid behov är det rekommenderat att använda en vävnad sil innan densitetscentrifugering processen.
Denna modell av TEVG fungerat bra på venösa cirkulationen, vilket är ett lågt tryck och hög flödessystemet. Emellertid i arteriella cirkulationen, enhögt tryck och hög flödessystem, vi observerade höga brytning med PGA transplantat på grund av dess karakteristiska snabb nedbrytning. Vilket innebär att transplantatet förlorar sin strukturella styrka innan neotissue vinner tillräcklig styrka för att stå emot det arteriella trycket. Vi har använt polymjölksyra (PLA) ympkvistar tidigare, men visade hög förekomst av aneurysmbildning. Också det tar mer än två år för att helt bryta ned PLA in vivo, vilket är mer än livslängden hos möss. För en framtida tillämpning i arteriella cirkulationen transplantat tillverkningstekniker, till exempel, är en electrospun transplantat under utveckling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Detta arbete stöddes delvis av ett anslag från NIH (RO1 HL098228) till CKB.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polyglycolic acid (PGA) felt | Biomedical Structures | Custome ordered | |
| Pipet tip, 0.1-10 μl | Fisher Sientific | 02-707-456 | |
| Lyophilizer | Labconco | 7070020 | |
| RPMI medium 1604 | Gibco | 11875-093 | |
| Petri dish | BD | 353003 | |
| 24-well plate | Corning | 3526 | |
| 15 cc tube | BD | 352096 | |
| Ficoll | Sigma | 10831-100ml | Also called 'Histopaque' |
| DPBS | Gibco | 14190-144 | |
| Littauer bone cutter 4.5" Straight | Roboz | RS-8480 | For BM harvesting |
| Forceps 4.5" | Roboz | RS-8120 | For BM harvesting |
| Scissors 4.5" | Roboz | RS-5912 | For BM harvesting |
| Microscope | Leica | M80 | |
| C57BL/6J (H-2b), Female | Jackson Laboratories | 664 | 8-12 weeks |
| Ketamine hydrochloride injection | Hospira Inc. | NDC 0409-2053 | |
| Xylazine sterile solution | Akorn Inc. | NADA# 139-236 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | NDC 0856-4396-01 | |
| Ibuprofen | PrecisionDose | NDC 68094-494-59 | |
| Heparin sodium | Sagent Pharmaceticals | NDC 25021-400 | |
| Saline solution (sterile 0.9% sodium chloride) | Hospira Inc. | NDC 0409-0138-22 | |
| 0.9% Sodium chloride injection | Hospira Inc. | NDC 0409-4888-10 | |
| Petrolatum ophthalmic ointment | Dechra Veterinary Products | NDC 17033-211-38 | |
| Iodine prep pads | Triad Disposables, Inc. | NDC 50730-3201-1 | |
| Alcohol prep pads | McKesson Corp. | NDC 68599-5805-1 | |
| Cotton tipped applicators | Fisher Scientific | 23-400-118 | |
| Fine scissor | FST | 14028-10 | |
| Micro-adson forcep | FST | 11018-12 | |
| Clamp applying forcep | FST | 00072-14 | |
| S&T Vascular clamp | FST | 00396-01 | |
| Spring scissors | FST | 15008-08 | |
| Colibri retractors | FST | 17000-04 | |
| Dumont #5 forcep | FST | 11251-20 | |
| Dumont #7 - fine forceps | FST | 11274-20 | |
| Dumont #5/45 forceps | FST | 11251-35 | |
| Tish needle holder/forceps | Micrins | MI1540 | |
| Black polyamide monofilament suture, 10-0 | AROSurgical Instruments Corporation | TI638402 | For suturing the graft |
| Black polyamide monofilament suture, 6-0 | AROSurgical Instruments | SN-1956 | For musculature and skin closure |
| Non-woven sponges | McKesson Corp. | 94442000 | |
| Absorbable hemostat | Ethicon | 1961 | |
| 1 ml Syringe | BD | 309659 | |
| 3 ml Syringe | BD | 309657 | |
| 10 ml Syringe | BD | 309604 | |
| 18 G 1.5 in, Needle | BD | 305190 | |
| 25 G 1 in, Needle | BD | 305125 | |
| 30 G 1 in, Needle | BD | 305106 | |
| Warm water recirculator | Gaymar | TP-700 | |
| Warming pad | Gaymar | TP-22G | |
| Trimmer | Wahl | 9854-500 |
References
- Heart Association, A. merican Heart Disease and Stroke Statistics—2012 Update. Circulation. 125, (2012).
- Shinoka, T., et al. Creation Of Viable Pulmonary Artery Autografts Through Tissue Engineering. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 115, 536-546 (1998).
- Hibino, N., et al. Late-term results of tissue-engineered vascular grafts in humans. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 139, 431-436 (2010).
- Shin'oka, T., et al. Midterm clinical result of tissue-engineered vascular autografts seeded with autologous bone marrow cells. The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 129, 1330-1338 (2005).
- Brennan, M. P., et al. Tissue-engineered vascular grafts demonstrate evidence of growth and development when implanted in a juvenile animal model. Ann Surg. 248, 370-377 (2008).
- Roh, J. D., et al. Construction of an autologous tissue-engineered venous conduit from bone marrow-derived vascular cells: optimization of cell harvest and seeding techniques. Journal of Pediatric Surgery. 42, 198-202 (2007).
- Hibino, N., et al. Tissue-engineered vascular grafts form neovessels that arise from regeneration of the adjacent blood vessel. The FASEB Journal. 25, 2731-2739 (2011).
- Hibino, N., et al. A critical role for macrophages in neovessel formation and the development of stenosis in tissue-engineered vascular grafts. The FASEB Journal. 25, 4253-4263 (2011).
- Naito, Y., et al. Characterization of the Natural History of Extracellular Matrix Production in Tissue-Engineered Vascular Grafts during Neovessel Formation. Cells Tissues Organs. 195, 60-72 (2012).
- Naito, Y., et al. Beyond Burst Pressure: Initial Evaluation of the Natural History of the Biaxial Mechanical Properties of Tissue Engineered Vascular Grafts in the Venous Circulation Using a Murine Model. Tissue Eng. Part A. 20, (2013).
- Mirensky, T. L., et al. Tissue-engineered vascular grafts: does cell seeding matter. Journal of Pediatric Surgery. 45, 1299-1305 (2010).
- Roh, J. D., et al. Tissue-engineered vascular grafts transform into mature blood vessels via an inflammation-mediated process of vascular remodeling. Proceedings of the National Academy of Sciences. 107, 4669-4674 (2010).
- Mirensky, T. L., et al. Tissue-engineered arterial grafts: long-term results after implantation in a small animal model. Journal of Pediatric Surgery. 44, 1127-1133 (2009).
- Lee, Y. U., Naito, Y., Kurobe, H., Breuer, C. K., Humphrey, J. D. Biaxial mechanical properties of the inferior vena cava in C57BL/6 and CB-17 SCID/bg mice. Journal of Biomechanics. 46, 2277-2282 (2013).
