التسجيلات الزوجية عبارة عن تسجيلات متزامنة لمشبك تصحيح الخلية بأكملها من خليتين خليتين عصبيتين متصلتين متشابكيا ، مما يتيح التوصيف الفيزيولوجي الكهربي والدوائي الدقيق للمشابك بين الخلايا العصبية الفردية. نصف هنا المنهجية التفصيلية والمتطلبات لإنشاء هذه التقنية في مزارع شرائح الحصين العضوية في أي مختبر مجهز للفيزيولوجيا الكهربية.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
تقرن تسجيلات خلية كاملة في عضوي شرائح الحصين
* These authors contributed equally
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
تتضمن التسجيلات الزوجية
تسجيلات متزامنة لمشبك تصحيح الخلية بأكملها من خليتين عصبيتين متصلتين متشابكين ، مما يتيح ليس فقط التوصيف الفيزيولوجي الكهربي المباشر للوصلات المشبكية بين الخلايا العصبية الفردية ، ولكن أيضا التلاعب الدوائي إما بالخلايا العصبية قبل المشبكية أو ما بعد المشبكي. عند إجراؤها في مزارع شرائح الحصين العضوية ، يزداد احتمال اتصال خليتين عصبيتين بشكل متشابك بشكل كبير. يتيح هذا المستحضر بسهولة تحديد أنواع الخلايا ، وتحافظ الخلايا العصبية على مورفولوجيتها وخصائص الوظيفة المشبكية المشابهة لتلك الموجودة في أنسجة المخ الأصلية. تتمثل الميزة الرئيسية لتسجيلات الخلية الكاملة المزدوجة في المعلومات عالية الدقة التي يمكن أن توفرها حول خصائص الانتقال المشبكي واللدونة التي لا يمكن تحقيقها مع تقنيات أخرى أكثر بدائية تستخدم التحفيز المحوري خارج الخلية. غالبا ما ينظر إلى تسجيلات الخلية الكاملة المقترنة على أنها صعبة للغاية لأدائها. في حين أن هناك جوانب صعبة لهذه التقنية ، يمكن إجراء التسجيلات المزدوجة من قبل أي شخص مدرب على لقط رقعة الخلية بالكامل بشرط اتباع معايير محددة للأجهزة والمنهجية. يزداد احتمال الحصول على تسجيلات مزدوجة متصلة متشابك بشكل كبير مع شرائح النمط العضوي الصحية والتلاعب الدقيق المستقر مما يسمح بتحقيق مستقل لتسجيلات الخلايا الكاملة قبل وبعد المشبكي. في حين أن أزواج الخلايا الهرمية CA3-CA3 تستخدم على نطاق واسع في إعداد الحصين للشريحة العضوية ، فقد نجحت هذه التقنية أيضا في أزواج CA3-CA1 ويمكن تكييفها مع أي خلايا عصبية متصلة بشكل متشابك في نفس تحضير الشريحة. نقدم في هذه المخطوطة المنهجية والمتطلبات التفصيلية لإنشاء هذه التقنية في أي مختبر مجهز للفيزيولوجيا الكهربية.
المقدمة
مستقبلات الغلوتامات توسط غالبية انتقال متشابك مثير في نقاط الاشتباك العصبي الجهاز العصبي المركزي. الأنواع الفرعية الرئيسية اثنين من مستقبلات الغلوتامات ionotropic المحلية على رأس العمود الفقري للغشاء بعد المشبكي هي N-ميثيل مد اسبارتاتي (NMDA) وα-أمينو 3 هيدروكسي-5-methylisoxazole-4-proprionic حمض (أمبا) مستقبلات. في إمكانات غشاء يستريح، مستقبلات أمبا تحمل معظم التيار بعد المشبكي أثناء انتقال متشابك. في قرن آمون، ومستقبلات NMDA يلعب دورا رئيسيا في إحداث تغييرات في عدد مستقبلات أمبا في الغشاء بعد المشبكي: من خلال العمل ك "كاشف صدفة" 1 لبدء تغييرات في قوة متشابك 1، يشارك مستقبلات NMDA في آليات متشابك التي يعت....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
بيان أخلاقيات الحيوان:
البروتوكولات وصفها في هذه المخطوطة تتبع المبادئ التوجيهية رعاية الحيوان التي وضعتها جامعة أوكلاند وجامعة ستانفورد. الموت الرحيم كانت الفئران الوليدة P7 بواسطة قطع الرأس السريع. ثم يتم إجراء تشريح الحصين على الفور كما هو موضح أدناه.
1. الحصين عضوي النمط من الثقافة شريحة
- إعداد
- إعداد تشريح متوسط ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
اتصال متشابك هو واضح من خلال تحفيز الخلايا العصبية قبل المشبكي لإطلاق إمكانات العمل عن طريق تمرير نبض الحالي إزالة إستقطاب (عادة 20-50 السلطة الفلسطينية لمدة 20 ميللي ثانية) عبر القطب تسجيل. ثم يتم فحص التتبع الحالي بعد المشبكي عن وجود EPSC الأحادي المشبك أثار في القصير (<5 ميللي ثانية) والإختفاء متناسقة بعد ذروة إمكانات العمل قبل المشبكي (الشكل 3A). في معظم التجارب يتم اختبار الخلايا العصبية بعد المشبكي متعددة قبل أن تتمكن من الحصول على زوج المتصلة synapticall.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
هنا وصفناها متطلبات إنشاء ناجحة تسجيلات خلية كاملة مقترنة عضوي النمط الثقافات شريحة الحصين. ويمكن أيضا أن التسجيلات تقرن أن يؤديها في الاستعدادات متعددة، بما في ذلك شرائح الحادة ونظم الاستزراع فصل 26،27. في حين أن التركيز كان هنا على تحريض أشكال أطول من اللدونة متشابك (أي LTP و LTD)، فمن المهم التأكيد على أن التسجيلات خلية كاملة مقترنة عضوي النمط، شريحة الحادة وفصلها وقد وفرت الاستعدادات خلية نظرة ثاقبة حجم كمي، قصيرة اللدونة الاجل، وظيفة قبل المشبكي، وكذلك LTP و LTD
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه
شكر وتقدير
نود أن نشكر أعضاء مختبرات مونتغمري وماديسون على المناقشة المفيدة. نحن نقر بالتمويل الذي تم تلقيه من المصادر التالية في هذا البحث: NFNZ و AMRF و Marsden Fund و HRC و NIH.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| الحد الأدنى | المعالجات الدقيقة الآلية المستقرة | ||
| محلول البنسلين والستربتومايسين | الأنسجة الضحلة | ||
| HEPES الحل | DIC الكاميرا | ||
| 1 M تريس حل | مكبر للصوت | ||
| هانك s محلول ملح | مصل الحصان للكمبيوتر | ||
| طاولة عزل الاهتزاز | |||
| ملاعق مصغرة | مجهر عمودي | ||
| فرشاة | ناعمة برنامج الحصول على البيانات وتحليلها | ||
| مفرمة | للأنسجة مجتذب القطب الكهربائي | ||
| # 2 ورق | قفص فاراداي | ||
| # 5 ملقط | |||
| إدراج | |||
| CO2< / sub> حاضنة | |||
| المحرك | |||
| من الفئة الثانية |
المراجع
- Dingledine, R., Borges, K., Bowie, D., Traynelis, S. F. The glutamate receptor ion channels. Pharmacology Reviews. 51, 7-61 (1999).
- Malenka, R. C., Nicoll, R. A. Long-term potentiation - A decade of progress. Science. 285, 1870-1874 (1999).
- Bliss, T. V. P., Lomo, T.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
