Прижизненные микроскопия Визуализация печени следующие Лейшмания Инфекция: оценка печеночного гемодинамики

Summary

В этой статье представлен подробный метод динамического измерения и количественной оценки скорости кровотока в отдельных кровеносных сосудах сосудистой сети печени мыши с использованием визуализации прижизненной микроскопии в сочетании со специальной методологией получения и анализа изображений.

Abstract

Прижизненные микроскопии (IVM) является мощной техникой оптических изображений, что сделало возможным визуализацию, мониторинг и количественную оценку различных биологических событий в режиме реального времени, так и в живых животных. Эта технология значительно расширили наше понимание физиологических процессов и патогенных-опосредованной явлений в конкретных органах.

В этом исследовании, IVM применяется для печени мыши и протоколы предназначены для изображения в естественных кровеносную систему печени и измерять эритроцитов (RBC) скорость в отдельных сосудах печени. Для визуализации сосудов различных подтипов, которые характеризуют орган печени и выполнять измерения скорости кровотока, мышей C57BL / 6 внутривенно вводили с флуоресцентным плазмы реагента, который маркирует печени ассоциированных сосудистую. IVM позволяет в естественных условиях, режиме реального времени, измерения скорости РБК в определенном судне интересов. Установление этой методологии сделает возможнымисследовать гемодинамику печени в физиологических и патологических условиях. В конечном счете, эта методология визуализации на основе будет иметь важное значение для изучения влияния L. donovani инфекции на печени гемодинамики.

Этот метод может быть применен к другим инфекционным моделей и органов мышей и может быть продлен до доклинических испытаний эффекта препарата на воспаление путем количественного его влияние на кровоток.

Introduction

Органоспецифические гемодинамики являются важными физиологические особенности любого органа млекопитающих. Нарушения в потоке крови может быть следствием воспаления и знак органной дисфункции ^1. Таким образом, кровоток организация, структура и функции появляются, как критические параметры для анализа в физиологических и патологических условиях. Методы, которые были широко используется для анализа потока крови в определенном органе содержит ряд ограничений, в том числе предела разрешения самой методики (например, допплерографии кровотока), емкость для измерения абсолютной кровотока только (объем крови в Блок служит орган) (например, оптиче....

Protocol

Заявление по этике: Все исследования на животных проводились в соответствии с руководящими принципами и протоколами, которые были утверждены по уходу и использованию комитета Институциональная животных в Экс-Марсель Université, Франции. Женский мышей C57BL / 6 на 8 - 10 недель были получены в промышленном и обрабатываются в соответствии с правилами декрет N ° 8 87-848, 19 октября, 1987, Париж. Все эксперименты с использованием L. donovani LD1S паразиты были проведены в соответствии с правилами биобезопасности из Франции и Европейского союза законодательства.

1. Мышь Заражение L. donovani промастиготы Паразиты

Results

Конкретных архитектурная организация синусоид в печени может быть на autofluorescent имущества этого органа (рис 1, панель B и С, зеленый), внутрибрюшинного введения Hoechst для маркировки гепатоцитов ядер визуализируются основе (рис 1B, синий) и внутривенное введение флуоресцентного BSA для окрашивания печеночной системы кровообращения (рис 1С, красный). Печень состоит из нескольких различных подтипов сосуд с различных функций и структур и размерами от 40-700 мкм в диа.......

Discussion

Недавнее развитие прижизненной микроскопии печени мыши открывает новые возможности для исследования физиологической реакции на инфекцию в естественных условиях и в режиме реального времени ^5,9,10. Орган кровотока является критическим физиологический параметр, который часто изменяется при многих заболеваниях. Тем не менее, статус гемодинамики печени в физиологических условиях и инфекционных остается плохо изученным. В этом исследовании, методы IVM основе, которые ранее были адаптированы для изучения с.......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Hoechst 33342	Sigma Aldrich	B2261
BSA-Alexa 647	Lifetechnologies	A34785
Dextran-FITC 500 моль wt	SIGMA	46947
Кетамин	PanPharma	20434
Ксилазин	Bayer	KP07KEU
Vetedine	Pharma Animal 6869029
Цианоакрилат жидкий	Cyanolit	5833300005
Coverslip рамка: Мембранное стекло для микродиссекции часть N°: 5013	Молекулярные машины	50103
Coverslip DiaPath 24x60 ep: 1,6 мм	DiaPath	61061
Конфокальный лазерный сканирующий микроскоп	Leica	Просмотрщик TCS-SP5
LAS-AF	Программное обеспечение Leica	версии 3.1.0 buid 8587