Здесь мы представляем протокол совместного культивирования в трех измерениях, который полезен для исследования многоклеточных взаимодействий и внеклеточной матрикс-зависимой модуляции поведения раковых клеток. В этой экспериментальной модели раковые клетки культивируются на коллагеновых гелях, встроенных в фибробласты, ассоциированные с раком человека.
Для просмотра этого контента требуется подписка на JoVE. Войдите или начните свой бесплатный пробный период.
Методическая статья
Трехмерная Co-культура Модель опухолью стромы взаимодействия
В этой статье
Краткое содержание
Аннотация
Прогрессирование рака (инициация, рост, инвазия и метастазирование) происходит в результате взаимодействия между злокачественными клетками и окружающими опухолевыми стромальными клетками. Микроокружение опухоли состоит из различных типов клеток, таких как фибробласты, иммунные клетки, эндотелиальные клетки сосудов, перициты и клетки, полученные из костного мозга, встроенные во внеклеточный матрикс (ВКМ). Ассоциированные с раком фибробласты (КАФ) играют проопухолевую роль за счет секреции растворимых факторов, ангиогенеза и ремоделирования ВКМ. Экспериментальные модели выживания, пролиферации, миграции и инвазии раковых клеток в основном опирались на двумерные одноклеточные и монослойные культуры тканей или анализы в камере Бойдена. Однако эти эксперименты не точно отражают физиологические или патологические условия в больном органе. Чтобы лучше понять стромальные взаимодействия опухоли или опухолевого матрикса, многоклеточные и трехмерные культуры предоставляют более мощные инструменты для исследования межклеточной коммуникации и ЭКМ-зависимой модуляции поведения раковых клеток. В качестве платформы для такого рода исследований мы представляем экспериментальную модель, в которой раковые клетки культивируются на коллагеновых гелях со встроенными первичными культурами CAF.
Введение
Раковая ткань может восприниматься как тип органа, который развивается в результате тесного взаимодействия между раком и микроокружением стромы опухоли, состоящим из ассоциированных с раком фибробластов (CAF), иммунных клеток, опухолевых сосудов и внеклеточного матрикса (ECM). CAF являются основным источником растворимых факторов (цитокинов, факторов роста и хемокинов), которые оказывают митогенное, промиграционное и проинвазивное действие на раковые клетки. Они также стимулируют образование опухолевых сосудов и рекрутируют клетки-предшественники, такие как клетки, полученные из костного мозга (BMDC). Активированные CAF участвуют в производстве и ремоделировании ВКМ, ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Протокол
ПРИМЕЧАНИЕ: Это исследование было одобрено соответствующими комитетами по этике.
1. Первичная культура легких человека фибробластов
- Коллекция легочной ткани:
- Получить образцы легочной ткани человека из хирургической операционной напрямую. Сбор около 1 см 3 кварталах от раковой и не раковая легочной ткани, с нераковая собранных образцов так далеко от опухоли, как это возможно.
- Приостановка образцы в среде Игла в модификации Игла (DMEM) с добавлением 100 ед / мл пенициллина, 100 мкг / мл стрептомицина и 0,25 мкг / мл амфотерицина В (бессывороточной среде). Поддержание взвешенные образцы в стерильных ....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Результаты
Этот метод совместного культивирования, подражая микросреды опухоли, является полезным инструментом для изучения взаимодействия между раковыми клетками и фибробластами встроенные в коллагена гелей. В предыдущем исследовании, три параметра были оценены в этой экспериментальной модели: сокращение коллагеновый гель, вторжение раковых клеток и морфологических изменений. Распространение раковых клеток оценивалась также с помощью Ki67 иммуноокрашивания 4. Образцы ткани легкого были собраны из раковых и не раковых р.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Обсуждение
CAFS образуют основной компонент ECM окружающей раковые клетки и не только обеспечивают каркас для опухоли, но и активно участвовать в развитии опухоли 7. Накопленные данные распутывает влияние CAFS или их родственных молекул на конечную прогноза, подчеркнув критическое значение роли CAF-опосредованной опухолевой прогрессии 8.
В предыдущем исследовании мы использовали нарост метод, чтобы изолировать CAFS легких 4. В этом эксперименте содержание раздела тканей.......
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Раскрытие информации
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Благодарности
Эта работа была поддержана Grants-in-Aid for Scientific Research (KAKENHI) (26461185 и 25460137).
....Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Материалы
| Имя | Компания | Каталожный номер | Комментарии |
|---|---|---|---|
| DMEM | Sigma-Aldrich | D5796 | |
| FBS | GIBCO | 10437 | |
| Коллаген типа IA | Nitta желатин Inc. | CELL-1A | |
| Восстанавливающий буфер | Nitta желатин Inc. | ||
| Защитное стекло | NUNC | 174934 | |
| Силиконовая смазка | Dow Corning Toray | Высоковакуумная смазка | |
| Dispase I | WAKO | 386-02271 | |
| 6-луночная пластина | BD Falcon | 353046 | |
| Фильтр для ячеек (70 μ m) | BD Falcon | 352350 |
Ссылки
- Strell, C., Rundqvist, H., Ostman, A. Fibroblasts-a key host cell type in tumor initiation, progression, and metastasis. Ups. J. Med. Sci. 117 (2), 187-195 (2012).
- Augsten, M., Hägglöf, C., Peña, C., Ostman, A. A digest on the role of the tumo....
Доступ ограничен. Войдите в систему или начните пробный период, чтобы просмотреть этот контент.
Перепечатки и разрешения
