Summary
드 노보 지방 생성 및 β - 지방산 산화는 간세포의 주요 대사 경로, 지방간 질환 등 여러 가지 대사 장애에 교란되는 경로를 구성한다. 여기에서 우리는 마우스 차 간세포의 분리를 보여와 β-지방산 산화 및 지방 생성의 정량화를 설명합니다.
Protocol
모든 동물 실험은 지역 및 연방 규정에 따라 및 기관 IACUC 및 방사선 안전 관리의 승인을 수행해야한다.
1. 준비
- 몇 일 전에 분석에, 간 다이제스트 중간 (LDM)의 500㎖의 병을 해동하고 50 ML 원뿔 튜브 ~ 35 mL를 분취을 재 냉동. 필요할 때까지 -20 ℃에서 보관하십시오.
- 어느 날 이전의 분석에, 오토 클레이브에 의해 깨끗한 해부 도구를 미리 소독.
- 분석 당일, 콜라겐 24- 웰 배양 플레이트의 필요량을 치료.
- PBS의 50 부를 3 ㎎ / ㎖ 래트 꼬리 콜라겐 1 부를 섞는다. 24 웰 플레이트의 각 웰에 약 500 μl를 추가하고 실온에서 3 ~ 5 분 (RT) 동안 품어. 콜라겐을 제거하고 판은 후드에서 공기 건조 할 수 있습니다. 적어도 하나의 추가 시간을 반복합니다.
참고 : 콜라겐 코팅이 광고에 일주까지 수행 할 수 있습니다밴스와 플레이트는 플라스틱 포장에 밀봉 4 ℃에서 보관.
- PBS의 50 부를 3 ㎎ / ㎖ 래트 꼬리 콜라겐 1 부를 섞는다. 24 웰 플레이트의 각 웰에 약 500 μl를 추가하고 실온에서 3 ~ 5 분 (RT) 동안 품어. 콜라겐을 제거하고 판은 후드에서 공기 건조 할 수 있습니다. 적어도 하나의 추가 시간을 반복합니다.
- 37 ° C로 해동 LDM 및 따뜻하고 1 N KOH를 사용하여 7.4으로 산도를 조정합니다 분석을 위해 LDM을 준비합니다. 순환 42 ° C의 물을 욕조에 0.2 μm의 주사기 필터와 장소를 사용하여 필터.
- 물 목욕을 순환 42 ° C까지 간 관류 중간의 따뜻한 25 ml의.
- 폴리 비닐 피 롤리 돈의 용액으로 코팅 90 % 콜로 이달 실리카를 준비 : 폴리 비닐 피 롤리 돈으로 코팅 된 콜로 이달 실리카의 9 ml의 10 배 DPBS의 1 ML을 추가합니다. 0.1 N 염산을 사용하여 pH 7.4까지를 조정합니다. 멸균 0.2 μm의 주사기 필터로 필터링. 실온에서 보관하십시오.
- 37 ° C의 따뜻한 도금 중간.
기본 마우스 간세포 2. 분리
- 연동 펌프, 튜브 및 해부 테이블을 설정 : 멸균 물 10ml에 의해 증류수에 5 ml의 70 % 에탄올로 세척하여 튜브를 소독. 채우기 위해 간 관류 중간에 튜브 및 실행 펌프를 배치튜브의 전체 길이.
- 제도적으로 승인 된 방법으로 마우스를 희생.
- 복강을 오픈 해부 : 70 % 에탄올로 자유롭게 마우스 복부를 스프레이. 무딘 엔드 가위를 사용하여 진피를 통해 복부의 길이를 중간 선 절개를하고 옆으로 반영합니다. 내장을 노출 복막에 비슷한 절개를합니다.
- 부드럽게 장을 대체, 둔기를 사용하면 복부 혈관이 복부 하대 정맥 (IVC)을 찾아 신장 정맥에 말초 혈관 아래에 봉합을 배치 노출
- 말초 봉합사로 봉합의 수준을 넘어 그것을 발전, IVC에 바늘과 카테터를 배치합니다. 아직도 그 자리에 바늘로, 제자리에 고정하기 위해 카테터 주위의 봉합을 묶어. 조심스럽게 바늘을 제거합니다. 경우는 카테터를 통해 흐름을 제대로 혈액을 수행.
- 피펫을 사용하여, 보장, 관류 매체와 카테터의 나머지 영역을 채우아무 공기는 존재하지 않는다. 큰 관심과 함께, 카테터에 튜브를 연결합니다.
- 폐의 구멍을 개방 해부 : 부드럽게 다이어프램을 노출 우수한 간 로브를 반영합니다. 조심스럽게 다음, 날카로운 팁 가위로 진동판에 구멍 담낭 및 흉막 혈관을 피하기 위해주의하면서, 흉강을 노출하는 측면 절개를합니다. 간정맥 단지 근위 흉부 하대 정맥 주위 불독 클램프를 놓습니다.
- 포털 정맥을 잘라 3에서 펌프를 켜십시오 - / 분 4 ml의. 관류 매체의 약 20 ㎖을 사용하여 5 분 간 관류 매체 간을 관류.
참고 : 간은 즉시 갈색 / 회색 빨간색에서 변경해야합니다. 간 부를 레드 남아 있으면,이 가능성이 불량한 관류를 나타내며, 성공적인 분리의 가능성이 크게 감소된다. 관류하는 동안 밖으로 실행되지 않습니다 매체를 보장하기 위해주의와 기포가 튜브를 입력 없다. - 5 분 배양을 따르면, 중지펌프 및 간 다이제스트 중간에 튜브를 전송합니다. (매체가 소진 될 때까지) 15 분 - 펌프를 다시 시작하고 또 다른 10 간을 관류.
- 관류 펌프를 멈춘다. 간은 분홍빛이 도는 색상이 다소 확대 나타납니다. 주의 절개하여 간을 절제. 담낭을 제거하고 10cm 조직 배양 접시에 간장을 전송합니다.
- 바이오 안전성 캐비닛에서 간으로 도금 중간 10 ㎖ (표 1)를 추가합니다. 조심스럽게 간세포를 제거하거나 집게 또는 메스를 사용하여 간을 긁어. 50 ㎖ 원뿔형 튜브에 100 ㎛ 세포 스트레이너 및 전달을 이용하여 현탁액을 필터. 50 ML 원뿔 튜브에 추가로 10 도금 중간 ㎖의 풀과 접시를 씻으십시오.
- 350 XG, 4 ° C에서 5 분 동안 원심 분리하여 세포 펠렛.
- 90 % 콜로이드 실리카 10ml를 PO 코팅 대기음 매체 도금 10 ml의 배지에 재현 탁 펠릿 및 추가lyvinylpyrrolidone. 단계 2.11에서와 같이 부드럽게 원심 분리기 섞는다. 생균이 아래쪽으로 펠렛 것이다 동안 원심 분리 후, 사균의 층은, 혼합물의 상부에 부유한다.
- 기음 죽은 세포와 매체. 도금 중간, 2.11에서와 같이 원심 분리기 20 ㎖로 2 회 반복한다.
- 도금 중간 10ml에 재현 탁 세포. 혈구와 세포를 계산하고 콜라겐 처리 된 24 웰 배양 접시에 9 × 104 세포 / 웰 놓습니다. 2 시간 동안 37 ° C 조직 문화 인큐베이터에서 품어. 각 플레이트는 지방산 산화 분석 OR 지방 생성 분석법 중 하나에 사용될 수있다.
- 선택적으로, 37 ° C에서 유지 보수 매체 (표 1)과 문화에 우물을 변경합니다. 분석 결과에 영향을주지 않으면 서 3 일 - 2 세포를 배양 할 수있다.
3. 지방산 산화 분석
경고 : 방사능의 사용은 위험 할 수 있습니다. 모든 구매, 저장, 취급, 및 디방사성 물질의 폐기에이 기관, 주, 연방 정부의 규정 및 지침에 따라 수행되어야한다.
- 16-20 시간 이전에 분석에, 따뜻한 PBS로 세포를 2 회 반복한다. 20 나노 글루카곤과 혈청 혈청 기아 중간 (표 1)에 세포를 변경하고 하룻밤에 37 ° C를 품어.
참고 : 소 태아 혈청이 신진 대사 호르몬의 알 수없는 농도 (예를 들면 인슐린, 글루카곤)가 포함되어 있기 때문에, 혈청이 분석에 가질 수있는 혼란 효과를 제거하기 위해 세포를 굶어. 세포는> 24 시간 동안 혈청 기아 배지에서 생존이다. 글루카곤 처리는 간세포에서 지방산 산화를 자극하는 데 사용된다. - 분석의 아침, 사전 인큐베이션 미디어를 준비 : 10 분 동안 70 ℃로 100 mM의 용액 및 열을 초순수 팔미틴산 나트륨 적당량 재현 탁. 한편, 필요한 양 (24- 웰 플레이트의 웰 당 0.5 ml)로 준비25 mM의 HEPES, 1 % BSA 분수 V, 20 nM의 글루카곤과 DMEM의. 37 ° C까지 가열한다.
- 가용화 후, 배지를 250 μM의 최종 농도 팔미 테이트를 추가한다. 중간 배양을 사전 2 시간 동안 37 ° C에서 부화하는 간세포를 변경합니다. 나중에 사용하기 위해 37 ° C에서 일부 사전 부화 매체를 보유합니다.
- 배양 중에, 질소 가스 하에서 증발에 의해 14 C-팔미틴산 적당량 (0.5 μCi를 / 웰)을 건조.
- 예를 들어, 24 웰 플레이트에 24 샘플을 측정하는 1.5 ㎖의 튜브에 0.1 μCi를 / ml의 14 C-팔미틴산 120 μL를 전송. 천천히 흄 후드 3-5 cm의 거리에서 솔루션을 통해 질소 가스를 불어 에탄올 용매를 증발. 상기 튜브의 하단에 건식 14 C-팔미두고 40 분 - 용매 약 30 증발한다.
- 약 15 분의 배양이 종료되기 전에, 14 재현 탁0.1 N 수산화 나트륨의 C-팔미 테이트 (12.5 μL / μCi를). 10 분 동안 70 ℃에서 배양한다. 따뜻한 사전 부화 중간의 세 권을 추가로 pipetting 아래로 섞는다.
- 희석 (14) C-팔미 테이트의 25 μL 잘 각 스파이크. 부드럽게 판을 흔들어 혼합하고 90 분 동안 37 ° C에서 품어. 이것은 분석 플레이트이다.
- 배양하는 동안, 필터 종이 접시 (그림 1)을 준비합니다.
- 멸균 24 웰 플레이트에서 커버를 제거합니다. 각 웰의 바닥에 종이 필터 중 하나 2cm X 2cm 조각을 놓습니다. 4 "X 7"파라 필름의 조각으로 접시를 오버레이.
- 이러한 micropipettor 팁 박스로, 큰 직사각형의 물체를 사용하여, 웰 구멍에 관통하고 파라 필름을 플레이트의 나머지 위에 시일을 만들 웰에 파라 필름을 발라. 이제 우물을 덮고 파라 필름의 천공 원을 제거합니다. 플레이트는 지금 단단히 잘 O를 제외한 모든 지역에서 파라 필름으로 덮여해야한다penings.
- 10 분 배양이 끝나기 전에, 여과지 모든 액체를 흡수 확인한 여과지 플레이트의 각 웰을 3 N NaOH를 200 μL를 추가한다.
- 동결에 선택적으로 이전, 새로운 24 웰 플레이트에 매체를 전송합니다. PBS로 한번 세척 한 후, 0.1 N 염산의 나머지 세포 용균 및 BCA 분석으로 단백질 함량을 계산한다.
- 인큐베이션의 끝에, 액체 질소에서 플레이트 분석법 스냅 동결. 완전히 진행하기 전에 동결은 물론 각 보장하기 위해주의해야합니다.
- 분석 플레이트의 각 웰에 70 % 과염소산 100 ㎕를 추가한다. 즉시 필터 종이 접시 커버. 2 시간 동안 실온에서 80 RPM의 궤도 속도로 궤도 흔드는과 바위에 판을 놓습니다.
- 배양 후, 샘플 처리 :
- 섬광에 4 ㎖의 액체 섬광 유체 여과지 사각형을 전송, CO 2 분획을 측정유리 병 및 측정 (14) C 신호.
- , 산 용해성 물질을 측정 1.5 mL의 미세 원심 분리 튜브에 매체의 400 μl를 전송합니다. 10 분 동안 최대 속도로 원심 분리기. 간단히 1 클로로포름 - 메탄올 (V / V)와 소용돌이 : 2의 500 μL에 상층 액 100 μl를 추가합니다.
- 다시 혼합물에 물을 250 μl를 추가하고, 소용돌이. 3,000 X g에서 10 분 동안 원심 분리기 샘플. 전사 섬광 바이알에 4 ㎖의 액체 섬광 유체 상에 상부 200 ㎕의 14 및 C 신호를 측정한다.
4. 지방 생성 분석
- 저녁 전에 분석을 시작으로, 따뜻한 PBS로 세포를 2 회 반복한다. 100 nM의 인슐린과 혈청 기아 중간에 간세포를 변경합니다. 37 ° C에서 밤새 품어.
참고 : 소 태아 혈청이 신진 대사 호르몬의 알 수없는 농도 (예를 들면 인슐린가 포함되어 있기 때문에, 글루카곤을), 혈청이 검정에 가질 수있는 교란의 효과를 제거하기 위해 세포를 굶. 세포는> 24 시간 동안 혈청 기아 배지에서 생존이다. 인슐린 지방 형성을 촉진하기 위해이 분석에서 사용된다. - 100 nM의 인슐린, 10 μm의 차가운 아세테이트 0.5 μCi를 3 H-아세테이트 당 잘 혈청 기아 매체 : 지방 생성 중간합니다. 지방 생성 중간에 세포를 변경하고 2 시간 동안 37 ° C에서 품어. 관심의 화합물을 테스트 할 포함합니다.
- 잠복기 후, PBS로 세포를 2 회 반복한다. 0.1 N 염산 120 μL에 긁어를 Lyse 세포. 보호구 10 단백질 분석 용 μL (BCA 분석으로 평가) 및 전송 1.5ml의 미세 원심 분리 튜브에 100 μL.
- (2) 500 μL를 첨가하여 추출 지질 : 1 클로로포름 - 메탄올 (v / v)로. 소용돌이는 간단히 5 분 동안 실온에서 품어. 물, 소용돌이의 250 μl를 추가하고 추가로 5 분 동안 실온에서 품어. 샘플을 원심 분리기 3000 XG, RT에서 10 분. 주의하여섬광 유리 병에 4 ml의 액체 섬광 유체에 낮은 위상을 전송하고 3 H 활성을 측정한다.
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Representative Results
3 × 10 7 총 세포 - 간세포 아이솔레이션는 일반적으로 1을 초래한다. 밤새 배양 한 후, 세포는 (그림 2) 이핵됩니다 많은 육각형를 나타납니다. 건강한 세포는 세포 죽음을 나타내는 있습니다 과립 또는 소포,없는해야한다.
일반적으로, 지방산 산화 분석은 시험 화합물 당 3-4 회 반복 실행됩니다. CO 2 샘플 카운트 산 용해성 물질 유래의 약 1/5이다. 우리는 일반적으로 (즉, 시트르산 회로를 통해 산화 량이다) 완전 산화의 척도로서 산 용해성 물질에 CO 2의 비율을 계산한다. 이러한 카르 보닐 시안화 -4- (트리 플루오 로메 톡시) 페닐 (FCCP)로서 세포 호흡을 촉진 물질, TCA 사이클을 통해보다 산화를 나타내는, CO 2 방향이 비율을 이동한다. 호흡 사슬의 억제는 전체에 산화를 감소합니다(그림 3). 이 분석을 조종 할 때, 절차는 세포 특이 적 활성을 생산 검증없이 셀 제어를 포함하는 것이 최상이다.
지방 생성 분석은 대부분 제로 평가시기 제어 (즉시 수확하기 전에 기판 처리 된 세포)와 비교된다. 분석은 배양 최소한 네 시간 통해 시간 대 선형해야한다. 이러한 oligomycin 같은 FCCP 같이, 지방산 산화를 강화, 또는 ATP 합성을 감소 화합물은, 지방을 생성 활동 (도 4)을 감소시킬 것이다.
그림 1 : 단계 3.6에 설명 된대로 필터 플레이트를 준비하는 필터 플레이트의 제조, 멸균 24 웰 플레이트에서 덮개를 제거합니다. 물론 각각의 기지에서 필터 종이의 2cm X 2cm 조각을 놓습니다. 파라의 7 "× 4"조각으로 전체 판을 오버레이필름과 밀접 웰의 상단을 밀봉하도록 플레이트를 문질러. 이것은 제거해야 잘 개구부를 통해 파라 필름의 천공 원을 생성합니다. 단계 3.9에서 과염소산 첨가 한 후, 도장을 생산하기 위해 분석 접시 위에 단단히 필터 종이 접시를 놓습니다.
그림 2 : 문화 단계에 차 간세포 16 시간 콜라겐 코팅 된 24 웰 플레이트에 도금 후 건강하고 건강에 해로운 기본 마우스 간세포의 이미지를 대조. 스케일 바, 200 μm의. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3 : 차에 의해 지방산 산화 배양 14의 (A) 이산화탄소, (B) 산 용해성 물질, 및 (C) 차량 FCCP 또는 oligomycin 일차 배양 간세포에서 산 가용성 물질 CO 2의 비율 - C 팔미 테이트 산화 마우스 간세포. 데이터는 ± SEM의 평균입니다. * P <0.05, 하나의 꼬리 학생의 t-test를하여 차량 대 ** P <0.01. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4 : 지방 생성 교양의 기본 마우스 간세포 (A) 3 H-아세테이트 및 차량, oligomycin, 또는 FCCP의 존재 (B) 지방을 생성 활동으로 치료 차 간세포 시간 대 지방을 생성 활동. 데이터는 ± SEM의 평균입니다. *** P <한 꼬리 학생의 t-test를 0.001 대 차량.
| 표 1 | |||
| 문화 미디어 | |||
| 도금 중간 | |||
| DMEM | 500 ml의 | ||
| FBS | 10 % | ||
| 피루브산 나트륨 | 2 밀리미터 | ||
| 펜 / 연쇄상 | 2 % | ||
| 덱사메타손 | 1 μm의 | ||
| 인슐린 | 0.1 μM | ||
| 유지 보수 매체 | |||
| DMEM | 500 ml의 | BSA 분수 V | 0.2 % |
| 피루브산 나트륨 | 2 밀리미터 | ||
| 펜 / 연쇄상 | 2 % | ||
| 덱사메타손 | 0.1 μM | ||
| 인슐린 | 1 nM의 | ||
| 기아 중형 | |||
| DMEM | 500 ml의 | ||
| BSA 분수 V | 0.2 % | ||
| 피루브산 나트륨 | 2 밀리미터 | ||
| 펜 / 연쇄상 | 2 % | ||
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Discussion
관류에 희생에서 시간은 이상적인 관류 및 간 콜라게나 소화 미만 3 분이어야합니다. 관류 매체 관류가 시작되면, 간은 즉시 빨간색은 엷은에서에 모양을 변경해야합니다. LDM과 부화의 약 10 분 후, 간은 부어 핑크 나타납니다. 관류이 불충분하다는 경우, 간은 이러한 변화를 나타내지 않으며, 이는 일반적으로 낮은 수율 간세포 초래할 것이다.
세척 단계 후, 절연 간세포 전에 도금을 빙냉 현탁액에 몇 시간 동안 저장 될 수있다. 도금 후, 배양 간세포 준수하고 확산하기 위해 몇 시간을 필요로한다. 도금 배지에서 배양 2 시간에 따라, 간세포는 작고 둥근 유지됩니다. 하룻밤 배양 후, 간세포는 이핵됩니다 많은 것이 더 특징적인 육각형 모양에 걸립니다. 제제가 비정상 인 경우, CELL 학생은 세포의 죽음을 나타내는 수많은 과립 및 비정기에 blebbing을 전시 할 예정이다. 가장 배양 생존을 유지하기 위해, 매체는 24 시간마다 교환해야 공기를 열 노출을 최소화하는 데 걸리는 케어.
소듐 팔미 테이트가 완전히 용해해야 70 ℃에서 배양 한 후, 그러나, 실온에서 물에 불용이다. RT에 노출 따라서 신속하게 작동하는 것이 필수적이며, 지질이 빠르게 응고의 원인이됩니다. 팔미 테이트가 사전 인큐베이션 매질에 용해 된 후에는 지질 용해성을 유지하기 위하여 37 ℃에서 매체를 유지하는 것이 중요하다.
전술 한 바와 같이, 지방산 산화 분석에서 정확한 결과를 보장하기 위해, 매체는, 액체 질소에 완전히 고정되어야한다. 이는 웰에 과염소산의 첨가 중에 CO 2 항 탈출을 방지한다. 즉시 냉동 샘플 과염소산 첨가 한 후, 분석 플레이트 단단히 C이어야필터 종이 접시에 의해 overed, 우물 사이의 가스 전송에 판을 정렬해야하고. 여과지 NaOH를 과량 침지되어 있기 때문에, 반응의 화학량 론의 NaHCO3로 방출 CO 2를 캡처 할 수있다. 이 프로토콜을 이하의 실험은 일반적인 복제 갖는 %의 CV와, 재현 가능한 결과를 생성 한 ≤ 필요한 경우 10. 지방산 산화 분석법 또는 지방 생성 분석에서 세포 용 해물로부터 산 용해성 물질은 -80 ℃에서 저장 및 처리 될 수있는 나중에 결과에 대한 상당한 효과없이. 위에서 설명한 분석은 마우스의 간에서 분리 된 주요 간세포의 지질 대사를 평가하는 비교적 간단하고 시간 효율적인 메커니즘을 허용. 생체 외 배양을 이용하여, 이러한 방법은 지방산 산화 및 지방 생성의 여러 조건의 효과를 테스트 할 수 있습니다. 이 프로토콜은 이러한 proce을 유전 적 변형에의 역할을 평가하기 위해 적응 될 수있다SSES 그러나, 간세포의 분리는 시간 제한이며, 따라서 생체 내에서 특정 유전자 변형 동물 모델을 조사하기위한 더 적합 할 수있다 분석한다. 여러 간세포 제제의 분석이 필요하다면 선택적 단계 3.7.1에서 설명 및 정규화에 사용되는 바와 같이, 단백질 수준에 대한 분석 값의 정규화를 행할 수있다. 우리는 여러 준비 수행 분석이 적절한 제어에 비해 상대적으로 변화에 따라 비교하는 것이 좋습니다.
마지막으로, 우리는 더 긴 배양 기간의 옵션을 탐구되지 않은 그러나, 간세포 배양 며칠 후에 대사 동등한 특성을 나타낼 수있다. 약간의 변형으로,이 프로토콜은 지질 대사 화합물의 효과를 평가하기 전에 몇 일 치료를 허용하도록 구성 될 수있다.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Liver Perfusion Medium | Life Technologies | 17701038 | |
| Liver Digest Medium | Life Technologies | 17703034 | Aliquot and store at -20 °C |
| PBS | Corning | 21-040-CV | |
| 10X DPBS | Corning | 46-013-CM | |
| DMEM | Corning | 10-017-CV | |
| FBS | Life Technologies | 26140079 | |
| Collagen | Life Technologies | A1048301 | |
| Colloidal silica coated with polyvinylpyrrolidone | GE Life Sciences | 17-0891-01 | |
| Sodium Pyruvate | Cellgro | 25-000-CI | |
| Penicillin / Streptomycin | Cellgro | 30-001-CI | |
| Insulin | Sigma | I0516-5ML | |
| Dexamethasone | Sigma | D2915-100MG | |
| Albumin (BSA), Fraction V | MP Biomedicals | 103703 | |
| 24-Well Culture Dish | Corning Falcon | 353047 | |
| Tygon S3 Tubing | Cole Parmer | 06460-34 | |
| Male Leur Lock to 200 Barb Connectors | Cole Parmer | 45518-00 | |
| 24 G x 3/4" Catheter | SurFlo | SROX2419CA | |
| Perma-Hand Silk Suture | Ethicon | 683G | |
| Cell Strainer | Corning Falcon | 08-771-2 | |
| IsoTemp 3013HD Recirculating Water Bath | Fisher | 13-874-3 | |
| MasterFlex C/L Peristaltic Pump | MasterFlex | HV-77122-24 | |
| Microclamp | Roboz | RS-7438 | Pre-sterilize in autoclave |
| 5” Straight, Blunt-Blunt Operating Scissors | Roboz | RS-6810 | Pre-sterilize in autoclave |
| 24 mm Blade Straight, Sharp-point Microdissecting Scissors | Roboz | RS-5912 | Pre-sterilize in autoclave |
| 4” 0.8 mm Tip Microdissecting Forceps | Roboz | RS-5130 | Pre-sterilize in autoclave |
| 4” 0.8 mm Tip Full Curve Microdissecting Forceps | Roboz | RS-5137 | Pre-sterilize in autoclave |
| 60 ml Syringe | Becton Dickinson | 309653 | |
| 50 ml conical tubes | Corning Falcon | 352070 | |
| BCA Protein Assay | Thermo Scientific | 23225 | |
| Biosafety Cabinet | |||
| CO2 Incubator | |||
| Serological pipets | |||
| 1,000, 200, 20 μl pipet and tips |
References
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- Angulo, P.
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- Feldstein, A. E., et al. Hepatocyte apoptosis and fas expression are prominent features of human nonalcoholic steatohepatitis. Gastroenterology. 125, 437-443 (2003).
- Day, C. P., James, O. F. Steatohepatitis: a tale of two 'hits'. Gastroenterology. 114, 842-845 (1998).
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- Goncalves, L. A., Vigario, A. M., Penha-Goncalves, C. Improved isolation of murine hepatocytes for in vitro malaria liver stage studies. Malaria journal. 6, 169 (2007).
