Summary
Microdialysis तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान के क्षेत्र में एक सामान्य तकनीक का इस्तेमाल किया है। इसलिए वाणिज्यिक जांच महान demand.In में एक जांच विधानसभा कम से कम $ 10 के लिए एक विश्वसनीय, गाढ़ा, कस्टम निर्मित MICRODIALYSIS जांच का निर्माण करने के बारे में विस्तार से समझाया गया है इस काम कर रहे हैं।
Abstract
Microdialysis तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान के क्षेत्र में एक सामान्य तकनीक का इस्तेमाल किया है। इसलिए वाणिज्यिक जांच मस्तिष्कमेरु द्रव में, शारीरिक औषधीय और रोग परिवर्तन पर नजर रखने के लिए महान मांग में हैं। दुर्भाग्य से, वाणिज्यिक जांच सार्वजनिक संस्थानों में अनुसंधान समूहों के लिए महंगे हैं। इस काम में, एक जांच विधानसभा कम से कम $ 10 के लिए एक विश्वसनीय, गाढ़ा, कस्टम निर्मित MICRODIALYSIS जांच का निर्माण करने के बारे में विस्तार से समझाया गया है। MICRODIALYSIS जांच 30 केडीए के एक आणविक कट ऑफ के साथ एक polysulfone झिल्ली के होते हैं। जांच के लिए इन विट्रो (100-1,600 दा की रेंज में) अलग आणविक वजन और विभिन्न भौतिक गुणों के साथ पदार्थों की वसूलियां तुलना कर रहे हैं। जांच छोटे यौगिकों ग्लूकोज, लैक्टेट, एसीटाइलकोलीन और एटीपी के लिए लगभग 20% की एक में इन विट्रो वसूली अर्जित करता है। 2-6% से 1,000-1,600 दा राशि के बीच एक आणविक वजन के साथ neuropeptides के लिए इन विट्रो वसूलियां। इस प्रकार, उच्च आणविक डब्ल्यू जबकिneuropeptides के आठ, इन विट्रो वसूली मूल्यों में आणविक वजन का कम रेंज (अप करने के लिए 500 डीए) में यौगिकों के डायलिसिस के लिए इन विट्रो वसूली दर पर कोई बड़ा असर पड़ता है कम। वर्तमान पद्धति अन्य कट-ऑफ मूल्य और झिल्ली सामग्री के साथ एक डायलिसिस झिल्ली के उपयोग की अनुमति देता है। इसलिए, इस कस्टम बनाया जांच विधानसभा एक व्यापक आणविक वजन सीमा में पदार्थों dialyze करने के लिए पर्याप्त लचीलापन का लाभ दिया है। यहाँ, हम माउस और चूहे के मस्तिष्क क्षेत्रों में MICRODIALYSIS के लिए लागू है, जो 2 मिमी की एक मुद्रा की लंबाई के साथ एक MICRODIALYSIS जांच शुरू। हालांकि, जांच के आयामों को आसानी से बड़े जानवरों में इस्तेमाल किया जा करने के लिए बड़ा विनिमय लंबाई के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
Introduction
Microdialysis तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान के क्षेत्र में एक सामान्य तकनीक का इस्तेमाल किया है। पिछले 50 वर्षों के दौरान, न्यूनतम इनवेसिव MICRODIALYSIS तकनीक लगातार बाह्य अंतरिक्ष में छोटे आणविक भार यौगिकों के स्थानीय सांद्रता की निगरानी के लिए एक अच्छी तरह से स्थापित विधि बनने के लिए सुधार किया गया है। लगभग हर मध्य ऊतक तरल पदार्थ स्वतंत्र रूप से चलती जानवरों में जांच की जा सकती है।
Gaddum 1960 के दशक में धक्का खींच तकनीक की शुरुआत की। उन्होंने कहा कि फेल्डबर्ग एट अल से एक दृष्टिकोण को संशोधित किया। जिसमें tubocurarine एक प्रवेशनी पार्श्व वेंट्रिकल में समाप्त होने और एक प्रवेशनी 1 के माध्यम से भी प्रवाह का संग्रह के माध्यम से perfused किया गया था। Gaddum एक साथ 2 टिप आसपास के न्यूरॉन्स से जारी न्यूरोट्रांसमीटर हटाने के दौरान दो गाढ़ा इस्पात सुइयों से मिलकर प्रवेशनी एक समाधान से अलग मस्तिष्क क्षेत्रों में प्रत्यारोपित और perfused किया गया था, जिसमें धक्का खींच तकनीक विकसित की है। दुर्भाग्य से, ऊतक दामाटिप के आसपास प्रवेशनी की वजह से जीई इस विधि के आवेदन सीमित है। इस पद्धति का एक और उन्नति के रूप में, Bito और सहकर्मियों एकत्र समाधान के लिए एक डायलिसिस झिल्ली से आसपास के ऊतकों से अलग हो गया था, जिसमें एक डायलिसिस बैग विधि की शुरुआत की। वे कुत्ते गर्दन के चमड़े के नीचे ऊतक में एक डायलिसिस थैली प्रत्यारोपित किया। डायलिसिस बैग की सामग्री प्रोटीन से मुक्त है और आयनों और अमीनो एसिड 3 के लिए कई सप्ताह बाद विश्लेषण किया जा सकता है। अगले विकास dialytrode, मूल रूप से 1972 में 4 डेलगाडो द्वारा वर्णित किया गया था, जो एक आदिम MICRODIALYSIS जांच की थी। यह छोटी थी और कम ऊतक 5 विस्थापित इतना है कि अंत में, Ungerstedt और उनके सहयोगियों MICRODIALYSIS जांच के डिजाइन में सुधार हुआ।
एक गाढ़ा MICRODIALYSIS जांच एक रक्त केशिका को इसी तरह से व्यवहार करता है। प्रणाली लगातार ब्याज की विश्लेष्य की कमी है, जबकि आसपास के ऊतक तरल पदार्थ की आयनिक रचना की विशेषता एक समाधान द्वारा perfused है। गुबाहरी समाधान या ऊतक के संपर्क में ई डायलिसिस झिल्ली अर्द्ध पारगम्य है। यह उनकी एकाग्रता ढाल 6 के साथ जांच में पदार्थों के निष्क्रिय प्रसार परमिट। पारगम्यता ऐसे आणविक वजन, आकार, प्रभारी और परिसर के पीएच के रूप में कई चर पर निर्भर है। झिल्ली सामग्री के गुणों के लिए, झिल्ली के आकार ताकना और दर 7 प्रवाह के कारण यह भी सीमित है।
1 आंकड़े और 2 एक गाढ़ा MICRODIALYSIS जांच दिखा। छिड़काव तरल पदार्थ जुड़े सिलिका चारों ओर से घेरे है, जो धातु आस्तीन में एक इनलेट टयूबिंग के माध्यम से प्रवेश करती है। धातु आस्तीन के अंदर, यह जुड़े सिलिका के साथ नीचे नदियों और उसके सिरे पर छोड़ देता है। डायलिसिस झिल्ली और polytetrafluoroethylene (PTFE) (जैसे Teflon के रूप में) -tubing के बीच अंतरिक्ष में छिड़काव तरल पदार्थ तो ऊपर की ओर बहती है। इधर, ऊतक से पदार्थों के प्रसार झिल्ली के चारों ओर जो होता है। अपोहित PTF के माध्यम से जांच के पत्तेट्यूबिंग आउटलेट से जुड़ा हुआ है और एकत्र किया जा सकता है जो ई-ट्यूबिंग,।
MICRODIALYSIS तकनीक विवो तकनीक में दूसरे के सापेक्ष कई फायदे हैं। जांच अपोहित कोई एंजाइम या सेल शामिल हैं कि परिणाम के साथ एक शारीरिक बाधा का गठन किया। इसलिए, वहाँ विश्लेषण करने से पहले eluate की शुद्धि के लिए कोई ज़रूरत नहीं है, और analytes की कोई enzymatic गिरावट जगह लेता है। ऑक्सीडेटिव गिरावट ट्यूबिंग में analytes के पारित होने के दौरान हो सकता है, लेकिन इस बार perfusate के लिए एक एंटीऑक्सीडेंट (जैसे एस्कॉर्बिक एसिड) जोड़ने से रोका जा सकता है। वैकल्पिक रूप से, neuropeptides को oxidative नुकसान, उदाहरण के लिए, कुशलता अपोहित 8 इकट्ठा करने के लिए एक टिप के साथ आउटलेट टयूबिंग जगह से दबा दिया गया था। अपोहित विश्लेषणात्मक पद्धति के लगभग किसी भी प्रकार के साथ सीधे जांच की जा सकता है और कई analytes एक साथ एकत्र किया जा सकता है। इस प्रणाली के जाग पशुओं में इस्तेमाल किया जा सकता है, और लगभग सभी मस्तिष्क क्षेत्रों किया जा सकता हैजांच की। इसके अलावा, जांच के माध्यम से दवाओं की जान फूंकना संभव (retrodialysis) है। हालांकि, यह भी MICRODIALYSIS तकनीक की सीमाएं हैं। कुछ हद तक कम समय संकल्प न्यूरोट्रांसमीटर परिवर्तन के बारे में वास्तविक समय की जानकारी प्रदान नहीं करता है। यह एक आक्रामक तकनीक है, क्योंकि जांच के आरोपण के इस कदम 7,9,10 के दौरान आवश्यक है न्यूरोट्रांसमीटर सांद्रता प्रभावित कर सकते हैं, जो शल्य आघात और संज्ञाहरण, का कारण बनता है।
अपोहित में यौगिक एकाग्रता बाह्य तरल पदार्थ में वास्तविक यौगिक एकाग्रता का केवल एक छोटी राशि शामिल है। बाह्य तरल पदार्थ में अज्ञात यौगिक एकाग्रता की गणना के लिए, रिश्तेदार इन विट्रो वसूली की गणना की जानी है। व्यक्ति हर जांच के लिए इन विट्रो वसूलियां में रिश्तेदार और हर यौगिक के निर्धारण में विवो प्रयोग शुरू करने से पहले आवश्यक है। इस प्रयोजन के लिए जांच युक्त समाधान में डूबा हुआ हैछिड़काव तरल पदार्थ जबकि ब्याज की विश्लेष्य ब्याज की विश्लेष्य कमी एक ही समाधान है। अपोहित में यौगिक सांद्रता के निर्धारण के बाद, इस डेटा आसपास के तरल पदार्थ में उनकी एकाग्रता के लिए भेजा जाना है। कई पदार्थों की इन विट्रो वसूली निर्धारण एक साथ 9 से लागू किया जा सकता है।
कई तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान समूहों अलग मस्तिष्क क्षेत्रों के बाह्य अंतरिक्ष में न्यूरोट्रांसमीटर और चयापचयों की जांच के लिए MICRODIALYSIS तकनीक का उपयोग करें। इस प्रकार, वाणिज्यिक जांच तंत्रिका विज्ञान अनुसंधान के माहौल में काफी मांग कर रहे हैं। व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जांच का एक बड़ा लाभ यह है कि उच्च कार्यात्मक विश्वसनीयता है। वाणिज्यिक जांच के लिए प्रयोगात्मक सेट अप अच्छी तरह से स्थापित और कई जाने-माने न्यूरोट्रांसमीटर और चयापचयों के लिए मान्य है। हालांकि, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध MICRODIALYSIS उपकरण महंगा है और वें में, आवेदन 11 में कम लचीलापन है, जबकिकिसी भी आवेदन के लिए अनुकूलित किया जा सकता है और कम से कम $ 10 के लिए निर्मित किया जा सकता है, जो एक MICRODIALYSIS जांच विधानसभा में विस्तार से प्रस्तुत किया है काम है। यह कस्टम बनाया जांच मस्तिष्क के विभिन्न क्षेत्रों 8 में जांच के लिए परीक्षण एक गाढ़ा MICRODIALYSIS जांच है।
अलग आणविक वजन (100-1,600 दा की रेंज) और साथ साथ पदार्थों के इन विट्रो जांच वसूली में विभिन्न भौतिक गुणों की तुलना कर रहे हैं। एक आणविक वजन के साथ एक आणविक वजन कम से कम 200 दा, एटीपी के साथ ग्लूकोज, लैक्टेट और acetylcholine के इन विट्रो वसूली दृढ़ संकल्प के लगभग 500 दा और neuropeptides एंजियोटेनसिन द्वितीय, 1000 दा के ऊपर एक आणविक वजन के साथ पदार्थ पी और सोमेटोस्टैटिन किया जाता है।
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Protocol
1. तैयार कर रहा है, PTFE-ट्यूबिंग
- 2.5 सेमी टुकड़ा में PTFE-ट्यूबिंग छोटा। भौतिक आयाम का अनुमान लगाने के पैमाने कागज का प्रयोग करें। (चित्रा 3A देखें)
- आउटलेट टयूबिंग की जोड़ने की सुविधा के लिए एक कोण पर एक को समाप्त काटें। (चित्रा 3A देखें)
- Sandpaper का उपयोग करके मोटा हो जाना PTFE-ट्यूबिंग epoxy गोंद का पालन अनुमति देने के लिए।
2. जुड़े सिलिका की तैयारी
- 2.25 सेमी टुकड़े में जुड़े सिलिका छोटा। (चित्रा 3A देखें)
3. PTFE-ट्यूबिंग में जुड़े सिलिका डालने
- फ्लैट अंत से 1 सेमी की दूरी पर यह पियर्स खोखले PTFE फाइबर में एक 30 ग्राम प्रवेशनी डालें। प्रक्रिया को सरल करने के लिए PTFE-ट्यूबिंग झुको। (चित्रा 3 बी देखें)
- मार्गदर्शन के रूप में प्रवेशनी का उपयोग कर PTFE-ट्यूबिंग में जुड़े सिलिका डालें। (चित्रा -3 सी देखें)
- धीरे प्रवेशनी हटाने और जुड़े सिलिका सुरक्षित। (देखेंचित्रा 3 डी)
- जुड़े सिलिका फ्लैट अंत में 5 मिमी परियोजना के लिए माना जाता है। (3E चित्रा देखें)
- Cyanoacrylate गोंद से पंचर साइट पर जगह में जुड़े सिलिका गोंद और इसे रात में कड़ा करने के लिए अनुमति देते हैं। (3E चित्रा देखें)
4. की तैयारी epoxy गोंद (दो घटक गोंद)
- एक ठीक सुई की मदद से काला epoxy गोंद का 70 भागों के लिए पीले रंग hardener के 30 भागों को जोड़ने और धीरे मिश्रण। यह सीधे उपयोग करने के लिए तैयार है।
5. झिल्ली (सभी आगे कदम माइक्रोस्कोप के तहत किया जाना चाहिए और पैमाने पेपर भौतिक आयाम अनुमान किया जाता है) लागू
- फिर से PTFE-ट्यूबिंग में झिल्ली खींच, ध्यान से जुड़े सिलिका से अधिक polysulfone झिल्ली खींचो और एक तेज स्केलपेल का उपयोग 5.5 मिमी के लिए झिल्ली को समायोजित। (चित्रा 3F देखें)
- 2 मिमी के आदान-प्रदान की लंबाई को परिभाषित करने के लिए एक ठीक कलम के साथ झिल्ली पर एक अंकन बिंदु निर्धारितझिल्ली के अंत से।
- एक ठीक सुई की मदद से झिल्ली की नोक कवर करने के लिए epoxy गोंद की एक छोटी राशि लागू करें। (चित्रा 3 जी देखें)
- Epoxy गोंद के साथ कदम 5.3 में इस्तेमाल किया वही ठीक सुई) की मदद से डायलिसिस झिल्ली और PTFE फाइबर के बीच संयुक्त बंद को बंद करें। (चित्रा 3 जी देखें)
- 2 मिमी की एक मुद्रा लंबाई सुनिश्चित करने के लिए अंकन बिंदु तक झिल्ली पर पर्याप्त epoxy गोंद जोड़ें। यह रात में कड़ा करने की अनुमति दें। विनिमय लंबाई के निर्धारण से पहले (चित्रा 3 जी देखें), झिल्ली 5.5 मिमी है। झिल्ली पर epoxy गोंद लगाने के बाद, झिल्ली के केवल 2 मिमी प्रसार के लिए उपलब्ध है।
6. धातु आस्तीन लागू करना
- एक झुकने सरौता की मदद से 1 सेमी धातु आस्तीन टुकड़ों में एक 25 जी सुई काटें।
- जुड़े सिलिका के शेष भाग पर 1 सेमी धातु आस्तीन (25 जी) खींचो। धातु आस्तीन बाद में MICRODIA के साथ प्रवेश ट्यूबिंग के कनेक्शन के लिए सक्षम बनाता हैसेल की जांच। (चित्रा 3h देखें)
- शेष epoxy गोंद के साथ धातु आस्तीन और PTFE-ट्यूबिंग के बीच संयुक्त सील। यह कम से कम 24 घंटे के लिए कड़ा करने की अनुमति दें। (चित्रा 3 आई देखें)
- अतिरिक्त निर्धारण और स्थिरीकरण के लिए जांच के विभाजन के आसपास गर्म गोंद लागू।
नोट: जांच के इनलेट आंतरिक मात्रा 0.045 μl और आउटलेट आंतरिक मात्रा 2.5 μl है। इसलिए, 1 μl के प्रवाह की दर के साथ / मिनट, यह अपोहित का संग्रह शुरू करने के लिए इनलेट ट्यूब जोड़ने के बाद लगभग 2.5 मिनट लगते हैं। वर्तमान प्रोटोकॉल के साथ, जांच विधानसभा की प्रक्रिया 95% विश्वसनीय हैं कि MICRODIALYSIS जांच अर्जित करता है।
इन विट्रो रिकवरी प्रयोगों के 7. प्रदर्शन
- 100 युक्त एक सीएसएफ में, 30 केडीए की कट-ऑफ और aCSF एक अलग प्रयोग में 1 मिमी ग्लूकोज और 1 मिमी लैक्टेट और, जिसमें से बना एक शेयर के समाधान में 2 मिमी की एक मुद्रा लंबाई के साथ जांच डुबकीएनएम एटीपी और 100 एनएम एसीटाइलकोलीन।
- ACSF के साथ जांच छिड़कना। 1 μl / मिनट प्रवाह दर निर्धारित और कमरे के तापमान (22 डिग्री सेल्सियस) पर प्रयोगों से बाहर ले जाने के लिए। जांच के शेयर समाधान में 1 घंटे के लिए संतुलित, और माप जब तक -80 डिग्री सेल्सियस के नमूने हर 30 मिनट के बाद में और दुकान को इकट्ठा करने की अनुमति दें।
- इन विट्रो वसूली की गणना के लिए, शेयर समाधान में जाना जाता विश्लेष्य सांद्रता के साथ dialysates में analytes की सांद्रता की तुलना करें। शेयर समाधान बनाम अपोहित में पदार्थ एकाग्रता के प्रतिशत के रूप में परिणाम व्यक्त करें।
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Representative Results
गाढ़ा कस्टम बनाया MICRODIALYSIS जांच 30 केडीए के एक आणविक कट ऑफ के साथ एक polysulfone झिल्ली के होते हैं। जांच विधानसभा चित्रा 3 में सचित्र है।
यह क्रमश: 19.10 ± 1.2% और 21.2 ± 1.6% की छोटी ऊर्जा चयापचयों ग्लूकोज (180.16 डीए) और लैक्टेट (112.06 डीए) के लिए इन विट्रो वसूली का प्रदर्शन किया। 181.66 दा की आणविक वजन के साथ सकारात्मक आरोप लगाया एसीटाइलकोलीन के लिए, यह 22.6 ± 1.4% की इन विट्रो वसूली मूल्य दिखाया। 551.62 दा और तीन नकारात्मक आरोप लगाया फॉस्फेट अवशेषों की एक आणविक वजन के साथ एटीपी एक तुलनीय हद तक (22.4 ± 0.7%) करने के लिए इन विट्रो वसूली दे दी है। छोटे अणुओं की इन विट्रो वसूलियां चित्रा -4 ए में दिखाए जाते हैं।
छोटे अणुओं (<500 दा) की तुलना में जब 1,000 दा के ऊपर एक आणविक वजन के साथ neuropeptides इन विट्रो वसूली में कम से पता चला है (फाई देखना gure 4 बी)। जांच की neuropeptides के अलावा, एंजियोटेनसिन द्वितीय (1,046.18 डीए) में 8 अमीनो एसिड के साथ सबसे छोटे पेप्टाइड है। यह 6.1 ± 0.3% की एक में इन विट्रो वसूली का प्रदर्शन किया। 11 एमिनो एसिड अवशेषों पदार्थ पी (1,347.63 डीए) और 14 एमिनो एसिड सोमेटोस्टैटिन (1,637.88 डीए) में क्रमश: 2.2 ± 0.3% और 2.3 ± 0.1% की इन विट्रो वसूली मूल्यों में लगभग बराबर दिखाया। हमारे 30 केडीए जांच की इन विट्रो वसूलियां व्यावसायिक रूप से उपलब्ध MICRODIALYSIS जांच के लिए इन विट्रो वसूलियां (सीएमए microdialysis, स्टॉकहोम, स्वीडन) के लिए तुलनीय, उदा। 23% लैक्टेट और 13% ग्लूकोज (आवेदन नहीं नोट देखते हैं। 1)
चित्रा 1: एक कस्टम बनाया जांच की तस्वीर।
8 / 53048fig2.jpg "/>
चित्रा 2: (। Elsevier से अनुमति के साथ से Lietsche एट अल, 2014, पुनर्प्रकाशित) एक MICRODIALYSIS जांच के योजनाबद्ध छवि।
चित्रा 3: एक जांच विधानसभा की योजनाबद्ध छवि; विवरण (Elsevier से अनुमति के साथ से Lietsche एट अल।, 2014, पुनर्प्रकाशित) प्रोटोकॉल को देखने के लिए कदम एअर इंडिया।
चित्रा 4: छोटे अणुओं और neuropeptides वसूलियां (ए) ग्लूकोज, लैक्टेट, एसीटाइलकोलीन और एटीपी की इन विट्रो वसूलियां।। शेयर समाधान वैकल्पिक रूप से 1 ग्लूकोज और लैक्टेट का मिमी और 100 एनएम एटीपी और प्रत्येक प्रयोगात्मक हालत के लिए 100 एनएम एसीटाइलकोलीन निहित। परिणाम पदार्थ conce के प्रतिशत के रूप में व्यक्त कर रहे हैंअपोहित / शेयर समाधान में ntration। परीक्षण पदार्थों के मूल्यों एटीपी के लिए acetylcholine और एन = 13 के लिए एन = ग्लूकोज के लिए 22, एन = 22 लैक्टेट के लिए, एन = 11 के एसडी ± साधन हैं। (बी) neuropeptides एंजियोटेनसिन द्वितीय, पदार्थ पी और सोमेटोस्टैटिन की इन विट्रो वसूलियां। शेयर समाधान प्रत्येक प्रयोगात्मक हालत के लिए 100 एनएम एंजियोटेनसिन द्वितीय, पदार्थ पी और सोमेटोस्टैटिन निहित। परिणाम अपोहित / शेयर समाधान में पदार्थ एकाग्रता के प्रतिशत के रूप में व्यक्त कर रहे हैं। स्तंभों की मान प्रत्येक जांच के लिए N = 6 के एसडी ± साधन हैं।
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Discussion
चित्रा 3 एक अनुकरणीय जांच विधानसभा से पता चलता है। सही भीतरी और बाहरी व्यास आयाम बारीकी ट्यूबिंग के लिए मनाया जा चुके हैं (आयुध डिपो 1.6 मिमी, आईडी 350 माइक्रोन), जुड़े सिलिका (आयुध डिपो के 105 माइक्रोन; माइक्रोन आईडी 40) और डायलिसिस झिल्ली (आयुध डिपो 245 माइक्रोन; आईडी 210 माइक्रोन)। यह झिल्ली और (105 माइक्रोन) की और झिल्ली और के रूप में अच्छी तरह से ट्यूबिंग (105 माइक्रोन) के बीच जुड़े सिलिका बीच में एक जगह रखने के लिए भी महत्वपूर्ण है। मूल्यों भिन्न है, जांच में दबाव में वृद्धि और झिल्ली का रिसाव हो सकता है।
यहाँ हम माउस मस्तिष्क क्षेत्रों में MICRODIALYSIS के लिए लागू है, जो 2 मिमी की एक मुद्रा की लंबाई के साथ एक MICRODIALYSIS जांच शुरू। हालांकि, आयाम आसानी से बड़े जानवरों में इस्तेमाल किया जा करने के लिए बड़ा विनिमय लंबाई के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।
विधानसभा के कुछ भागों में बदला जा सकता है। उदाहरण के लिए, यह PTFE-ट्यूबिंग उपयोग करने के लिए आवश्यक नहीं है। पॉलीथीन टयूबिंग के आवेदन भी समान बाहरी और सराय के साथ संभव हैव्यास आयाम एर। एक PTFE-ट्यूबिंग का उपयोग करते समय ट्यूबिंग के roughening केवल आवश्यक है। डायलिसिस झिल्ली के एक प्रतिस्थापन भी संभव है। वर्तमान जांच विधानसभा के लिए, एक 30 केडीए कट-ऑफ झिल्ली प्रयोग किया जाता है, लेकिन किसी भी अन्य डायलिसिस झिल्ली समान आयामों के साथ इस्तेमाल किया जा सकता है। इसलिए, हमारे कस्टम बनाया जांच विधानसभा एक व्यापक आणविक वजन सीमा के साथ पदार्थों dialyze महान लचीलेपन का फायदा है; dialyzed किया जा सकता है जो पदार्थ के आणविक भार जितना अधिक होगा, आणविक वजन कट ऑफ अधिक है। इन विट्रो वसूलियां आमतौर पर डायलिसिस झिल्ली की आणविक वजन कट ऑफ के साथ वृद्धि हुई है।
झिल्ली की नोक को कवर करने के लिए, epoxy गोंद डायलिसिस झिल्ली और PTFE-ट्यूबिंग के बीच संयुक्त बंद बंद करने के लिए और विनिमय लंबाई निर्धारित करने के लिए आवश्यक है। यह डायलिसिस झिल्ली को प्रभावित करता है और रिसाव की ओर जाता है, क्योंकि cyanoacrylate चिपकने वाला लागू है, इस चरण में संभव नहीं है। एक cyanoacrylate चिपकने वाला pl के गोंद के लिएastic पंचर साइट पर जगह में टयूबिंग के साथ जुड़े सिलिका के निर्धारण के लिए लागू किया जाना चाहिए।
यह इस जांच डिजाइन गाइड cannulas के साथ परीक्षण नहीं किया गया है कि ध्यान दिया जाना चाहिए। हमारी प्रयोगशाला astrogliosis जांच की खराबी का कारण बनता है इससे पहले कि हम प्रयोगात्मक समय की 48-72 घंटा है, जिसमें तीव्र प्रयोगों के लिए कम व्यास जांच समाविष्ट करने के लिए पसंद करते हैं। गाइड cannulas बड़े होते हैं और अधिक ऊतकों को नुकसान का कारण है क्योंकि इस प्रकार के परीक्षण के लिए, एक गाइड प्रवेशनी एक लाभ प्रदान नहीं करता है। इसके अलावा, यहां तक कि जगह में एक गाइड प्रवेशनी के साथ जांच हमेशा डायलिसिस के क्षेत्र में तीव्र क्षति के कारण, स्वस्थ मस्तिष्क के ऊतकों में डाला जाना है। बार-बार प्रविष्टि और गाइड cannulas के माध्यम से जांच के हटाने यानी तीव्र प्रविष्टि दोहराया क्षति, एक बार करने से बचा जाता है जो एक स्थिति है, का कारण बनता है। रक्त मस्तिष्क बाधा आरोपण 12 के बाद बरकरार कुछ घंटों होना दिखाया गया था। गाइड cannulas, फिर भी, जब धारावाहिक माप ज बेहतर कर रहे हैंएवेन्यू कई दिनों या हफ्तों तक किया जाना है। इंजेक्शन संवेदनाहारी दवाओं 1-2 दिनों के लिए बाद के प्रयोगों के साथ हस्तक्षेप क्योंकि अंत में, अस्थिर एनेस्थेटिक्स जांच आरोपण के लिए इस्तेमाल किया जाना चाहिए।
ग्लूकोज, लैक्टेट, एसीटाइलकोलीन और एटीपी के लिए इन विट्रो वसूली में सभी छोटे आणविक वजन पदार्थों का परीक्षण IE के लिए, लगभग 20% कर रहे हैं, इन विट्रो वसूली लगभग बराबर है। जाहिर है, कम रेंज (500 डीए) में आणविक वजन में इन विट्रो वसूली दर पर कोई बड़ा प्रभाव पड़ता है। 30 केडीए की आणविक वजन कट ऑफ भी neuropeptides dialyze करने के लिए सक्षम बनाता है। कारण neuropeptides के उच्च आणविक वजन करने के लिए, इन विट्रो वसूली मूल्य कम है। पदार्थ पी (1,348 डीए) और सोमेटोस्टैटिन (1638 डीए) 2-3% की इन विट्रो वसूली मूल्यों के साथ उसी हद तक dialyzed जा सकता है। दोनों पेप्टाइड्स लगभग 300 दा के एक बड़े पैमाने पर बदलाव किया है हालांकि, इन विट्रो वसूलियां ही रहते हैं। दोनों substमंजूरी पी और सोमेटोस्टैटिन सकारात्मक जलीय घोल में चार्ज किया जाता है और इसी तरह के भौतिक गुणों का प्रदर्शन कर सकते हैं। 1046 दा की आणविक वजन के साथ Angiotensin द्वितीय अन्य दो neuropeptides साथ की तुलना में तीन गुना बड़ा है जो 6%, के लिए एक उच्च इन विट्रो वसूली का पता चलता है। इसलिए, 500 दा से ऊपर आणविक भार स्पष्ट रूप से भी पदार्थ जलीय घोल में तटस्थ चार्ज किया जाता है जब, तो इन विट्रो वसूली प्रभावित करते हैं। इस मामले में, इन विट्रो वसूली dialyzed पदार्थों के आरोप से प्रभावित नहीं है। हालांकि, अन्य झिल्ली सामग्री के उपयोग के साथ आरोप लगाया यौगिकों की वसूलियां 8 प्रभावित हो सकते हैं।
अंत में, एक कस्टम बनाया MICRODIALYSIS जांच के विधानसभा वाणिज्यिक जांच करने के लिए एक स्वीकार्य विकल्प है। हमारे स्वयं बनाया जांच, मजबूत कर रहे हैं उच्च विश्वसनीयता और अच्छा reproducibility के लिए है।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Epoxy glue | SunChrom GmbH, Fiedrichsdorf, Germany | ||
| Fused silica ID 40 µm OD 105 µm | Ziemer-Chromatographie, Mannheim, Germany | Art. No: 6.040105 | |
| Polysulfone membrane (haemodialysis filter FX Cor Diax 600) | Fresenius Medical Care AG & Co. KGaA, Bad Homburg, Germany | REF: F00001593 | |
| Cyanacrylate glue (Pattex® superglue plastic) | Henkel AG&Co. KGaA, Düsseldorf, Germany | ||
| TEFLON-tubing 1.6 x 0.35 mm | SunChrom® GmbH, Friedberg, Germany | Art. No: 969-195.219 | |
| Scalpel (Feather® Surgical Blade No. 10) | pfm medical ag, cologne, Germany | Art. No: 07310 | |
| Microscope | MEIJI Techno | EMZ-8TR | |
| 30 G x 11" (0.3 x 25 mm) cannula Sterican® Z | B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | REF: 9324500 | |
| 25 G x 11/2" (0.5 x 40 mm) cannula 100 Sterican® | B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | REF: 9186166 | |
| Fine pen (Stabilo point 88 fine 0.4) | Schwan-STABILO Schwanhäußer GmbH & Co. KG | Art. No: 88/36 | |
| Hot glue (Glue sticks ULTRA Power x 11 mm) | Steinel® GmbH, Herzebrock-Clarholz, Germany | Art. No: 4007841046910 | |
| Sandpaper P60 230 x 280 | Robert Bosch GmbH, Gerlingen-Schillerhöhe, Germany | Catalog Number: 2608605397 |
References
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- Gaddum, J. H.
- Bito, L., Davson, H., Levin, E., Murray, M., Snider, N. The concentrations of free amino acids and other electrolytes in cerebrospinal fluid, in vivo dialysate of brain, and blood plasma of the dog. J Neurochem. 13 (11), 1057-1067 (1966).
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