Summary
Microdialysis היא טכניקה נפוץ במחקר מדעי מוח. לכן בדיקות מסחריות נמצאות בdemand.In הגדול עבודה זו הרכבה בדיקה הוא הסבירה בפירוט לבנות חללית אמינה, קונצנטריים, מחוייט microdialysis פחות מ 10 $.
Abstract
Microdialysis היא טכניקה נפוץ במחקר מדעי מוח. לכן בדיקות מסחריות יש ביקוש גדול לעקוב אחר שינויים פיסיולוגיים, תרופתיים ופתולוגיים בנוזל השדרתי. למרבה הצער, בדיקות מסחריות יקרות לקבוצות מחקר במוסדות ציבור. בעבודה זו, הרכבה בדיקה הוא הסביר בפירוט לבנות חללית אמינה, קונצנטריים, מחוייט microdialysis פחות מ 10 $. הבדיקה microdialysis מורכבת מקרום polysulfone עם חתך מולקולרי של 30 kDa. בדיקה במבחנה החלמה של חומרים עם משקל מולקולרי שונה (בטווח של 100-1,600 Da) ומאפייני physicochemical שונים בהשוואה. הבדיקה תשואות התאוששות במבחנה של כ -20% לרמת הסוכר בתרכובות קטנות, חומצת החלב, אצטילכולין ו- ATP. החלמה במבחנה לנוירו עם משקל מולקולרי בין 1,000-1,600 סכום דה ל2-6%. וכך, בעוד w המולקולרי גבוה יותרשמונה של נוירו הורידו בערכי התאוששות מבחנה, דיאליזה של תרכובות בטווח הנמוך (עד 500 Da) של משקולות מולקולריות אין השפעה גדולה על במבחנה קצב ההתאוששות. השיטה הנוכחית מאפשרת ניצול של קרום דיאליזה עם ערך חתך אחר וחומר קרום. לכן, יש הרכבה בדיקה מותאמת אישית זה היתרון של גמישות מספיק כדי דיאליזת חומרים במגוון רחב משקל מולקולרי. הנה, אנחנו מציגים בדיקה microdialysis עם אורך חליפין של 2 מ"מ, אשר ישים עבור microdialysis באזורים במוח עכבר וחולדה. עם זאת, ממדים של החללית יכולים בקלות להיות מותאמים לאורכי תמורה גדולים יותר לשימוש בבעלי חיים גדולים יותר.
Introduction
Microdialysis היא טכניקה נפוץ במחקר מדעי מוח. במהלך 50 השנים האחרונות, טכניקת microdialysis המינימלית פולשנית שופרה ברציפות להפוך לשיטה מבוססת היטב כדי לפקח על ריכוזים מקומיים של תרכובות משקל מולקולריות קטנות במרחב החוץ תאי. כמעט בכל ביניים נוזל רקמה יכול להיחקר בבעלי חיים לנוע בחופשיות.
Gaddum הציג טכניקת שכיבות למשוך ב -1960. הוא שונה מגישת et al פלדברג. בי tubocurarine היה perfused דרך צינורית המסתיימת בחדר לרוחב ואיסוף השפכים גם באמצעות צינורית 1. Gaddum פיתח את טכניקת דחיפה-המשיכה שבו צינורית המורכבת משתי מחטי פלדה קונצנטריים הושתלה באזורי המוח שונים וperfused ידי פתרון תוך הסרת בו זמנית נוירוטרנסמיטורים שוחררו מהנוירונים המקיפים את הקצה 2. למרבה הצער, Dama רקמהGE נגרמים על ידי הצינורית סביב הקצה מוגבל היישום של שיטה זו. כהתקדמות נוספת של שיטה זו, Bito ועמיתים לעבודה הציגו שיטת שקית דיאליזה שבפתרון שנאסף הופרד מהרקמה הסובבת על ידי קרום דיאליזה. הם מושתלים שק דיאליזה לרקמה התת עורית של צוואר כלב. התוכן של שקית הדיאליזה הוא ללא חלבון ויכול להיות מנותח שבועות רבים לאחר מכן ליונים וחומצות אמינו 3. הפיתוח הבא היה dialytrode, בדיקה microdialysis פרימיטיבית, אשר במקור היה שתוארה על ידי דלגאדו בשנת 1972 4. לבסוף, Ungerstedt ועמיתים שיפרו את העיצוב של חללית microdialysis כך שהוא היה קטן ועקורים פחות רקמה 5.
בדיקה microdialysis קונצנטריים מתנהגת באופן דומה לנימי דם. מערכת perfused ללא הרף על ידי פתרון שמציעה את ההרכב היוני של נוזל הרקמה הסובב תוך חסר אנליטי של עניין. הקרום הדיאליזה דואר נחשף לפתרון או הרקמה החיצוני הוא חדיר למחצה. היא מאפשרת דיפוזיה פסיבית של חומרים לבדיקה לאורך מפל הריכוזים שלהם 6. החדירות תלויה במשתנים רבים כגון משקל מולקולרי, צורה, תשלום ו- pH של המתחם. כמו כן הוא מוגבל בשל תכונות חומר הקרום, נקבובית גודל של הקרום וקצב זרימת 7.
איורים 1 ו -2 להראות בדיקה microdialysis קונצנטריים. נוזל זלוף נכנס דרך צינורות כניסה לתוך שרוול המתכת, המקיף את סיליקה התמזגה. בתוך שרוול המתכת, זה זרמים למטה לאורך סיליקה התמזגה ומשאיר אותו על הקצה שלה. במרחב שבין קרום הדיאליזה וpolytetrafluoroethylene (PTFE) -tubing (כגון טפלון) נוזל זלוף אז זורם כלפי מעלה. כאן, דיפוזיה של חומרים מרקמות מתרחשת המקיפה את הקרום. Dialysate עוזב את הבדיקה דרך PTFE-צינורות, אשר מחובר לשקע צינורות וניתן לאסוף.
יש טכניקת microdialysis כמה יתרונות יחסי לאחרים בטכניקות vivo. הבדיקה מהווה מחסום פיזי וכתוצאה מכך dialysate אינו מכיל אנזימים או תאים. לכן, אין צורך בטיהור של eluate לפני הניתוח, ולא השפלה האנזימטית של analytes מתרחשת. השפלה חמצוני יכולה להתרחש במהלך המעבר של analytes בצינורות, אבל זה לעתים קרובות ניתן למנוע על ידי הוספת נוגדי חמצון (לדוגמא חומצה אסקורבית) לperfusate. לחלופין, נזק חמצוני לנוירו, למשל, דוכא ביעילות על ידי החלפת הצינור לשקע עם קצה לאסוף dialysate 8. Dialysate ניתן לחקור ישירות עם כמעט כל סוג של שיטה אנליטית ויכול להיות שנאסף analytes מרובה בו זמנית. מערכת זו יכולה לשמש בבעלי חיים ער, וכמעט כל האזורים במוח יכולים להיותבדק. יתר על כן, עירוי של תרופות דרך הבדיקה אפשרי (retrodialysis). עם זאת, יש גם מגבלות של טכניקת microdialysis. הרזולוציה הזמן מעט הנמוכה אינה מספקת מידע בזמן אמת בנוגע לשינויים עצביים. בגלל זה הוא טכניקה פולשנית, השתלת בדיקה גורמת טראומה ניתוחית והרדמה, אשר יכול להשפיע על ריכוזים עצביים, נדרש במהלך שלב זה 7,9,10.
ריכוז המתחם בdialysate כולל רק כמות קטנה של ריכוז המתחם בפועל בנוזל החוץ תאי. לחישוב ריכוז המתחם ידוע בנוזל החוץ תאי, התאוששות היחסית במבחנה יש להיות מחושבת. קביעת ביחס אישי בהחלמת מבחנה לכל בדיקה וכל מתחם היא הכרחית לפני תחילת ניסוי in vivo. לצורך כך, הבדיקה הוא טבל תמיסה המכילהאנליטי של עניין ואילו נוזל זלוף הוא אותו הפתרון החסר אנליטי של עניין. לאחר קביעת ריכוזי מתחם בdialysate, הנתונים אלה יש התייחסו לריכוזם בנוזל המקיף. קביעות התאוששות במבחנה של כמה חומרים יכולות להיות מיושמות בו זמנית 9.
קבוצות מחקר במדעי מוח רבות משתמשות בטכניקת microdialysis לחקור נוירוטרנסמיטורים ומטבוליטים במרחב החוץ תאי של אזורי מוח שונים. לפיכך, בדיקות מסחריות יש ביקוש גדול בסביבת מחקר מדעי המוח. יתרון גדול של בדיקות זמינות מסחרי הוא האמינות הפונקציונלית הגבוהה. ניסיוני ההגדרה לבדיקות מסחריות מבוססת היטב ומאומתים על נוירוטרנסמיטרים ומטבוליטים ידועים רבים. עם זאת, בעוד שציוד microdialysis זמין המסחרית הוא יקר ויש פחות גמישות ביישום 11, בההוא לעבוד הרכבה בדיקה microdialysis מוצגת בפירוט, אשר ניתן להתאים לכל יישום ויכול להיות מיוצר עבור פחות מ 10 $. בדיקה מותאמת אישית זה בדיקה microdialysis קונצנטריים נבדקה לחקירות באזורי מוח שונים 8.
בהחלמת בדיקה מבחנה של חומרים עם משקל מולקולרי שונה (טווח של 100-1,600 Da) ועם מאפייני physicochemical שונים בהשוואה. התאוששות נחישות במבחנה של גלוקוז, חומצת החלב ואצטילכולין עם משקל מולקולרי פחות מ -200 דא, ATP עם משקל מולקולרי של כ -500 דה ואנגיוטנסין II נוירו, חומר P וסומטוסטטין עם משקל מולקולרי מעל 1,000 דה מבוצע.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. PTFE-צינורות הכנה
- לקצר PTFE-צינורות לתוך חתיכת 2.5 סנטימטר. השתמש בנייר בקנה מידה להעריך ממדים פיזיים. (ראה איור 3 א)
- חותך סוף אחד בזווית כדי להקל על חיבור של צינורות חשמל. (ראה איור 3 א)
- PTFE-צינורות לחספס על ידי שימוש בנייר הזכוכית כדי לאפשר דבקות של דבק אפוקסי.
2. הכנה התמזגו סיליקה
- לקצר סיליקה התמזגה לתוך חתיכת 2.25 סנטימטר. (ראה איור 3 א)
3. הכנסת סיליקה התמזגו לתוך PTFE-צינורות
- הכנס צינורית G 30 לסיבים החלולים PTFE לנקב אותו במרחק של 1 סנטימטר מהקצה השטוח. לכופף את PTFE-צינורות כדי לפשט את התהליך. (ראה איור 3 ב)
- הכנס את סיליקה התמזגה לתוך PTFE-צינורות באמצעות הצינורית כמו הדרכה. (ראה איור 3 ג)
- הוצא בעדינות את הצינורית ולאבטח את סיליקה התמזגה. (ראה3D איור)
- סיליקה התמזגה אמורה להקרין 5 מ"מ בסוף השטוח. (ראה איור 3E)
- דבק סיליקה התמזגה במקום באתר לנקב על ידי דבק cyanoacrylate ולאפשר לו להקשיח במשך הלילה. (ראה איור 3E)
4. אפוקסי דבק הכנה (שני רכיבי דבק)
- הוסף 30 חלקי מקשה צהובה ל -70 חלקים של דבק אפוקסי שחור על ידי עזרה של מחט דקה ומערבבים אותו בעדינות. זה ישירות מוכן לשימוש.
5. מריחת ממברנה (כל צעדים נוספים יש לבצע מתחת למיקרוסקופ ונייר בקנה מידה המשמש להערכת ממדים פיסיים)
- משוך את קרום polysulfone על סיליקה התמזגה בזהירות, ואז למשוך את הקרום לPTFE-צינורות ולהתאים את הקרום 5.5 מ"מ באמצעות אזמל חד. (ראה איור 3F)
- להגדיר נקודה על קרום סימון עם עט דק להגדיר את אורך החליפין של 2 מ"ממהקצה של הקרום.
- למרוח כמות קטנה של דבק אפוקסי כדי לכסות את הקצה של הקרום בעזרת מחט דקה. (ראה איור 3G)
- סגור את משותף בין קרום הדיאליזה וPTFE סיבים על ידי עזרה של אותה מחט דקה המשמשת בשלב 5.3) עם דבק אפוקסי. (ראה איור 3G)
- הוסף מספיק דבק אפוקסי על הממברנה עד לנקודת הסימון כדי להבטיח אורך חליפין של 2 מ"מ. לאפשר לו להקשיח במשך הלילה. (ראה איור 3G) לפני קביעת אורך החליפין, הקרום הוא 5.5 מ"מ. לאחר החלת דבק אפוקסי על הקרום, רק 2 מ"מ של הקרום זמין עבור דיפוזיה.
6. יישום שרוול המתכת
- חותך מחט 25 G לחתיכות שרוול מתכת 1 סנטימטר על ידי עזרה של צבת כיפוף.
- משוך את שרוול מתכת 1 סנטימטר (25 G) על החלק הנותר של סיליקה התמזגה. שרוול המתכת מאוחר יותר מאפשר חיבור של צינורות היניקה עם microdiaהבדיקה תמוגה. (ראה איור 3H)
- לאטום משותף בין שרוול המתכת וPTFE-צינורות עם דבק אפוקסי שנותר. לאפשר לו להקשיח לפחות 24 שעות. (ראה איור 3i)
- מריחת דבק חם סביב ההסתעפות של החללית לקיבוע וייצוב נוספים.
הערה: הנפח הפנימי הכניסה של החללית היא 0.045 μl והנפח הפנימי לשקע הוא 2.5 μl. לכן, עם קצב זרימה של μl 1 / דקה, זה לוקח כ 2.5 דקות לאחר חיבור צינור הכניסה להתחיל האוסף של dialysate. עם הפרוטוקול הנוכחי, הליך ההרכבה הבדיקה מניב בדיקות microdialysis כי הם 95% אמינות.
7. ביצוע ניסויים שחזור חוץ גופית ב
- טובלים את הבדיקה עם חתך של 30 kDa ואורך חליפין של 2 מ"מ לפתרון מניות המורכב מaCSF מכיל גלוקוז 1 מ"מ וחומצת חלב 1 מ"מ ו, בניסוי נפרד, לCSF המכיל 100ATP ננומטר ו -100 ננומטר אצטילכולין.
- Perfuse הבדיקות עם aCSF. הגדר קצב זרימה לμl / דקה 1 ולבצע ניסויים בטמפרטורת חדר (22 מעלות צלזיוס). לאפשר הבדיקות לאזן עבור שעה 1 בפתרון המניות, ולאסוף הדגימות כל 30 דקות לאחר מכן ולאחסן ב -80 ° C עד מדידה.
- לחישוב החזרים במבחנה, להשוות את הריכוזים של analytes בdialysates עם ריכוזי אנליטי הידועים בפתרון המניות. הגעה תוצאות באחוזים של ריכוז חומר בdialysate לעומת פתרון מניות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
הבדיקה microdialysis מחוייט קונצנטריים מורכבת מקרום polysulfone עם חתך מולקולרי של 30 kDa. ההרכבה הבדיקה מתוארת באיור 3.
זה הציג התאוששות במבחנה לגלוקוז מטבוליטים אנרגיה הקטנה (180.16 Da) וחומצת החלב (112.06 Da) של 19.10 ± 1.2% ושל 21.2 ± 1.6%, בהתאמה. לאצטילכולין הטעון חיובי עם משקל מולקולרי של 181.66 דא, זה הראה במבחנה התאוששות ערך של 22.6 ± 1.4%. ATP עם משקל מולקולרי של 551.62 דה ושלוש שאריות פוספט טעונות שלילי נתן התאוששות במבחנה במידה דומה (22.4 ± 0.7%). החלמה במבחנה של מולקולות קטנות שמוצגת באיור 4 א.
נוירו עם משקל מולקולרי מעל 1,000 דה הראה נמוך בהחלמת מבחנה בהשוואה למולקולות קטנות יותר (<500 Da) (ראה Fi איור 4 ב). בין נוירו נבדק, אנגיוטנסין II (1,046.18 Da) הוא פפטיד הקטן עם 8 חומצות אמינו. זה הציג התאוששות במבחנה של 6.1 ± 0.3%. P 11 אמין חומר שאריות חומצה (1,347.63 Da) וסומטוסטטין 14 חומצות אמינו (1,637.88 Da) הראו כ שווים בערכי התאוששות מבחנה של 2.2 ± 0.3% ושל 2.3 ± 0.1%, בהתאמה. החלמה במבחנה של 30 הבדיקה kDa דומה להחלמה במבחנה של בדיקות microdialysis זמינות מסחרי (CMA microdialysis, שטוקהולם, שוודיה), למשל. לקטט 23% וגלוקוז 13% (ראה יישום לב לא. 1)
איור 1: תצלום של בדיקה מותאמת אישית.
8 / 53048fig2.jpg "/>
איור 2: תמונה סכמטי של בדיקה microdialysis (הודפס מחדש מLietsche et al, 2014, באישור Elsevier.).
איור 3: תמונה סכמטי של הרכבה בדיקה; צעד ai לפרטים ראו פרוטוקול (הודפס מחדש מLietsche et al., 2014, באישור Elsevier).
איור 4: שחזורים של מולקולות קטנות ונוירו (א) במבחנה החלמה של גלוקוז, חומצת החלב, אצטילכולין ו- ATP.. פתרון המניות כלול 1 מ"מ של גלוקוז וחומצת חלב ו, לחלופין, 100 ATP ננומטר ו -100 ננומטר אצטילכולין לכל תנאי ניסוי. תוצאות באות לידי ביטוי כאחוז conce חומרntration בפתרון dialysate / מניות. ערכים של חומרי בדיקה הם אמצעי ± SD של n = 22 לגלוקוז, n = 22 לקטט, n = 11 לאצטילכולין וn = 13 ל- ATP. (ב) במבחנה החלמה של אנגיוטנסין II נוירו, חומר P וסומטוסטטין. פתרון המניות כלול 100 אנגיוטנסין II ננומטר, חומר P וסומטוסטטין לכל תנאי ניסוי. התוצאות באות לידי ביטוי באחוזים של ריכוז חומר בתמיסת dialysate / מניות. ערכים של עמודות אמצעי ± SD של n = 6 עבור כל בדיקה.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
איור 3 מראה הרכבה בדיקה למופת. ממדי קוטר פנימיים וחיצוניים נכונים שכדי לצפות מקרוב לצינורות (OD 1.6 מ"מ; מזהה 350 מיקרומטר), סיליקה התמזגה (OD 105 מיקרומטר; מזהה 40 מיקרומטר) וקרום דיאליזה (OD 245 מיקרומטר; מזהה 210 מיקרומטר). כמו כן, חשוב לשמור על מרחב שבין הקרום וסיליקה התמזגה של (105 מיקרומטר) ובין הקרום וצינורות (105 מיקרומטר) גם כן. אם הערכים שונים, לחץ בבדיקה יכול לעלות ולגרום לדליפה של הקרום.
כאן אנחנו מציגים בדיקה microdialysis עם אורך חליפין של 2 מ"מ, אשר ישים עבור microdialysis באזורים במוח עכבר. עם זאת, יכולים בקלות להיות מותאמים לממדים גדולים יותר אורכי תמורה לשימוש בבעלי חיים גדולים יותר.
חלקים מסוימים של ההרכבה יכולים להיות מוחלפים. לדוגמא, אין צורך להשתמש PTFE-צינורות. יישום של צינורות פוליאתילן אפשרי גם עם חיצוני ופונדק זהיםאה ממדי קוטר. חספוס של הצינור יש צורך רק בעת השימוש בPTFE-צינורות. החלפת קרום הדיאליזה היא גם אפשרית. להרכבת הבדיקה הנוכחית, משמש קרום חתך 30 kDa, אבל כל קרום דיאליזה אחר ניתן להשתמש בממדים זהים. לכן, יש ההרכבה הבדיקה המותאמת אישית שלנו את היתרון של גמישות רבה לדיאליזת חומרים עם מגוון משקל מולקולרי רחב; גבוה חתוך משקל המולקולרי, גבוה יותר במשקל המולקולרי של החומר, אשר ניתן דיאליזה. במבחנה החלמה בדרך כלל עולה עם חתוך המשקל המולקולרי של קרום הדיאליזה.
כדי לכסות את הקצה של הקרום, נדרש דבק אפוקסי לסגור את משותף בין קרום הדיאליזה וPTFE-צינורות וכדי לקבוע את אורך החליפין. מריחת דבק cyanoacrylate לא ניתן בשלב זה, כי זה משפיע על קרום הדיאליזה ומוביל לדליפה. דבק cyanoacrylate להדביק plastic צריך להיות מיושם על הקיבעון של סיליקה התמזגה עם צינורות במקום באתר לנקב.
יש לציין כי עיצוב בדיקה זו לא נבדק עם קנולה מדריך. המעבדה שלנו מעדיפה להשתיל בדיקות נמוכה בקוטר לניסויים חריפים שבו יש לנו 48-72 שעות של זמן ניסוי לפני astrogliosis גורם תקלה של החללית. לסוג זה של ניסוי, צינורית מדריך אינה מציעה יתרון כי קנולות מדריך הן גדולות יותר ולגרום ליותר נזק לרקמות. יתר על כן, אפילו עם צינורית מדריך במקום, הבדיקה תמיד יש להיות מוכנסת לתוך רקמת מוח בריאה, וגרם לנזק חמור באזור של דיאליזה. הכנסה וההסרה של החללית באמצעות קנולות מדריך חזר גורמת נזק חוזר ונשנה, מצב אשר נמנע על ידי חד-פעמי, כלומר החדרה חריפה. מחסום דם-המוח הוצג להיות כמה שעות ללא פגע לאחר השתלת 12. קנולות מדריך עדיפות, לעומת זאת, כאשר h מדידות סידורייםAve להיעשות על פני כמה ימים או שבועות. לבסוף, יש להשתמש בחומרי הרדמה נדיפים להשתלת בדיקה כי תרופות הרדמה בזריקות להפריע לניסויים הבאים ל1-2 ימים.
בהחלמת מבחנה לגלוקוז, חומצת החלב, אצטילכולין ו- ATP הם כ -20%, כלומר לכל נבדקו חומרי משקל מולקולריים קטנים, ההתאוששות במבחנה היא כמעט שווה. ככל הנראה, בטווח הנמוך (עד 500 Da), יש לו את המשקל המולקולרי אין השפעה גדולה על במבחנה קצב ההתאוששות. לחתוך את המשקל המולקולרי של 30 kDa גם מאפשר לדיאליזת נוירו. בשל המשקל המולקולרי גבוה יותר של נוירופפטידים, במבחנה ערך ההתאוששות נמוך. החומר P (1,348 Da) וסומטוסטטין (1,638 Da) יכולים להיות dialyzed באותה המידה עם במבחנה ערכי התאוששות של 2-3%. למרות שלשני פפטידים שינוי המוני של כ -300 דא, במבחנה החלמה נשארת אותו הדבר. שני substאהה P וסומטוסטטין מטען חשמלי חיובי בתמיסה מימית ועשויים להפגין מאפייני physicochemical דומים. אנגיוטנסין II עם משקל מולקולרי של 1,046 דה מגלה במבחנה התאוששות עד גבוהה עד 6%, שהוא גדול פי שלושה מאשר עם שני נוירו האחר. לפיכך, משקל מולקולרי מעל 500 Da ברור להשפיע על ההתאוששות במבחנה, גם אם כאשר חומרים נזקפים ניטראליים בתמיסה מימית. במקרה זה, ההתאוששות במבחנה אינה מושפעת מהתשלום של חומרי דיאליזה. עם זאת, עם השימוש בחומרי קרום אחרים, יכולה להיות מושפעת החלמה של תרכובות טעונות 8.
לסיכום, ההרכבה של חללית microdialysis מחוייט היא חלופה מקובלת לבדיקות מסחריות. הבדיקות מתוצרת העצמית שלנו הן יציב, יש לי אמינות גבוהה ושחזור טוב.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Epoxy glue | SunChrom GmbH, Fiedrichsdorf, Germany | ||
| Fused silica ID 40 µm OD 105 µm | Ziemer-Chromatographie, Mannheim, Germany | Art. No: 6.040105 | |
| Polysulfone membrane (haemodialysis filter FX Cor Diax 600) | Fresenius Medical Care AG & Co. KGaA, Bad Homburg, Germany | REF: F00001593 | |
| Cyanacrylate glue (Pattex® superglue plastic) | Henkel AG&Co. KGaA, Düsseldorf, Germany | ||
| TEFLON-tubing 1.6 x 0.35 mm | SunChrom® GmbH, Friedberg, Germany | Art. No: 969-195.219 | |
| Scalpel (Feather® Surgical Blade No. 10) | pfm medical ag, cologne, Germany | Art. No: 07310 | |
| Microscope | MEIJI Techno | EMZ-8TR | |
| 30 G x 11" (0.3 x 25 mm) cannula Sterican® Z | B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | REF: 9324500 | |
| 25 G x 11/2" (0.5 x 40 mm) cannula 100 Sterican® | B.Braun Melsungen AG, Melsungen, Germany | REF: 9186166 | |
| Fine pen (Stabilo point 88 fine 0.4) | Schwan-STABILO Schwanhäußer GmbH & Co. KG | Art. No: 88/36 | |
| Hot glue (Glue sticks ULTRA Power x 11 mm) | Steinel® GmbH, Herzebrock-Clarholz, Germany | Art. No: 4007841046910 | |
| Sandpaper P60 230 x 280 | Robert Bosch GmbH, Gerlingen-Schillerhöhe, Germany | Catalog Number: 2608605397 |
References
- Feldberg, W., Malcom, J. Experiments on the site of action of tubocurarine when applied via the cerebral ventricles. J Physiol. 149, 58-77 (1959).
- Gaddum, J. H.
- Bito, L., Davson, H., Levin, E., Murray, M., Snider, N. The concentrations of free amino acids and other electrolytes in cerebrospinal fluid, in vivo dialysate of brain, and blood plasma of the dog. J Neurochem. 13 (11), 1057-1067 (1966).
- Delgado, J. M., Lerma, J., Martín del Río, R., Solís, J. M. Dialytrode technology and local profiles of amino acids in the awake cat brain. J Neurochem. 42 (5), 1218-1228 (1984).
- Ungerstedt, U., Pycock, C.
- Ungerstedt, U. Microdialysis--principles and applications for studies in animals and man. J Intern Med. 230 (4), 365-373 (1991).
- Bourne, J. A. Intracerebral microdialys: 30 years as a tool for the neuroscientist. Clin Exp Pharmacol Physiol. 30 (1-2), 16-24 (2003).
- Lietsche, J., Gorka, J., Hardt, S., Karas, M., Klein, J. Self-built microdialysis probes with improved recoveries of ATP and neuropeptides. J Neurosci Methods. 237, 1-8 (2014).
- Chefer, V. I., Thompson, A. C., Zapata, A., Shippenberg, T. S.
- Neurochem, J.
- Jolly, D., Vezina, P. In vivo microdialysis in the rat: low cost and low labor construction of a small diameter, removable, concentric-style microdialysis probe system. J Neurosci Methods. 68 (2), 259-267 (1996).
- Sumbria, R., Klein, J., Bickel, U. Acute depression of energy metabolism after microdialysis probe implantation is distinct from ischemia-induced changes in mouse brain. Neurochem Res. 36, 109-116 (2010).
