العمود الفقري شجيري من الخلايا العصبية الهرمية هي مواقع معظم نقاط الاشتباك العصبي مثير في الثدييات قشرة الدماغ. يصف هذا الأسلوب التحليل الكمي 3D من الأشكال التضاريسية العمود الفقري في القشرية الخلايا العصبية الهرمية glutamatergic الإنسان المستمدة من الخلايا الجذعية المحفزة.
يتطلب اشتراك JoVE لعرض هذا المحتوى. تسجيل الدخول أو ابدأ نسخة تجريبية مجانية
مقالة منهجية
الكمي ثلاثي الأبعاد من شجيري العمود الفقري من الخلايا العصبية الهرمية المستمدة من صنع الإنسان المحفزة الخلايا الجذعية
في هذه المقالة
ملخص
الملخص
العمود الفقري شجيري هي نتوءات صغيرة التي تتوافق مع مقصورات بعد متشابك من نقاط الاشتباك العصبي مثير في الجهاز العصبي المركزي. وهي موزعة على طول التشعبات. مورفولوجيا يعتمد إلى حد كبير على نشاط الخلايا العصبية، وهي ديناميكية. العمود الفقري شجيري تعبر عن مستقبلات glutamatergic (أمبا ومستقبلات NMDA) على سطحها وعلى مستوى كثافة بعد المشبكي. كل العمود الفقري يسمح الخلايا العصبية للسيطرة على نشاط الدولة والمحلي بشكل مستقل. وقد الأشكال التضاريسية العمود الفقري درس على نطاق واسع في الخلايا الهرمية glutamatergic من القشرة الخارجية للدماغ، وذلك باستخدام كلا النهجين في الجسم الحي والثقافات العصبية التي تم الحصول عليها من الأنسجة القوارض. ظروف عصبية مرضية يمكن أن تكون مرتبطة إلى تغير تحريض العمود الفقري والنضج، كما هو مبين في القوارض الخلايا العصبية مثقف والتحليل الكمي ذات بعد واحد 1. توضح هذه الدراسة بروتوكول للتحليل الكمي 3D من الأشكال التضاريسية العمود الفقري باستخدام cortic الإنسانالخلايا العصبية آل المستمدة من الخلايا الجذعية العصبية (الأسلاف القشرية في وقت متأخر). تم الحصول على هذه الخلايا في البداية من الخلايا الجذعية المحفزة. هذا البروتوكول يسمح للتحليل الأشكال التضاريسية العمود الفقري في فترات ثقافة مختلفة، ومع المقارنة الممكنة بين الخلايا الجذعية المحفزة التي تم الحصول عليها من الأفراد التحكم مع تلك التي تم الحصول عليها من المرضى الذين يعانون من الأمراض النفسية.
المقدمة
العمود الفقري شجيري من الخلايا العصبية الهرمية القشرية هي نتوءات صغيرة ورقيقة والتي يتم توزيعها على طول التشعبات القاعدية وقمية من هذه الأنواع الفرعية العصبية في القوارض، الرئيسيات، والدماغ البشري. فهي مواقع لمعظم نقاط الاشتباك العصبي مثير وعرض وظائف أساسية في التعلم والعمليات المعرفية. الهياكل التفصيلية في العمود الفقري شجيري الإنسان تم دراستها فنيا من قبل المجهر الإلكتروني (2). ومع ذلك، فإن هذا النهج هو مضيعة للوقت، ويمثل عبء العمل الثقيل. وفي الآونة الأخيرة، تم الإبلاغ عن ثلاثي الأبعاد (3D) إعادة بناء مورفولوجية شجيري العمود الفقري في قشرة الدماغ البشري باستخدام برامج معينة مجتمعة لدليل كبير تحليل العمود الفقري
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
البروتوكول
1. العصبية الثقافة
ملاحظة: إعادة برمجة الخلايا الليفية في الخلايا الجذعية المحفزة، والالتزام النسب الظهرية الدماغ الانتهائي، الاشتقاق، والتضخيم، والخدمات المصرفية من الأسلاف القشرية في وقت متأخر (نظام الإجراءات الجزائية) وصفت في Boissart وآخرون (4). تم إجراء تمايز الخلايا العصبية من الخلايا مثل نظام الإجراءات الجزائية أيضا وفقا لBoissart آخرون 4 مع تعديلات طفيفة. وقد وضعت إجراءات أخرى لإعادة البرمجة المباشرة من الخلايا الليفية إلى خلايا الجذعية المحفزة تليها التمايز بهم إلى الخلايا العصبية. تم الإبقاء على هذا البروتوكول لأ....
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
النتائج
توضح هذه الدراسة بروتوكول موحد لالعمود الفقري الكمي من التشعبات مثقف الخلايا العصبية الهرمية المستمدة من IPSC. هذا البروتوكول يسمح للتحليل العمود الفقري النضج على الخلايا العصبية البشرية والمقارنة ممكنة مع نضوج العمود الفقري في مستوى الثقافات القوارض العصبية وكذلك في الجسم الحي في النماذج الحيوانية.
يمثل الشكل 1A مخطط للخطوات مختلفة من الثقافة التي تسمح للإنتاج الخلايا العصبية الهر.......
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المناقشة
اعتمد الكمي من الميزات المورفولوجية من الخلايا العصبية الهرمية على البرنامج. تم استخدام واجهة الشعيرة الراسم لتقسيم الخلايا العصبية والعمود الفقري، وكان يستخدم وحدة XT لتحليلها.
لتحليل دقة تقنية لدينا، ونحن أول مقارنة قياس المعلمات الشكلية (الطول والمساحة والحجم الكلي العمود الفقري عند الاقتضاء)، مع تلك التي نشرت باستخدام الفئران الخلايا العصبية الهرمية ناضجة في الثقافة 6 و 7 و أنسجة الدماغ البشري
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
الإفصاحات
ليس لدى المؤلفين ما يكشفون عنه.
شكر وتقدير
تم تمويل هذا العمل من قبل معهد باستور، ومؤسسة بيتنكور-شولر، والمركز الوطني للبحوث العلمية، وجامعة باريس ديدرو، والوكالة الوطنية للبحوث (ANR-13-SAMA-0006; SynDivAutism) ، ومؤسسة Conny-Maeva الخيرية ، ومؤسسة Cognacq Jay ، ومؤسسة Orange ، ومؤسسة Fondamental Foundation. L.G. مدعومة بزمالة جامعية من وزارة الصحة. نحن نقدر مساعدة BitPlane على وجه الخصوص جورجيا جولفيس ، في المرحلة الأولى من هذا العمل.
....الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
المواد
| الاسم | الشركة | رقم فهرسي | التعليقات |
|---|---|---|---|
| D-PBS (1x) ، sans Calcium ، Magnesium et Phenol Red | Gibco / Life Technologies | 14190169 | |
| Poly-L-Ornithine Solution Bioreagent | Sigma Aldrich | P4957 | |
| Mouse Laminin | Dutscher Dominique | 354232 | |
| N2< / sub> Supplement | Gibco / Life Technologies | 17502048 | |
| B-27 Supplement بدون فيتامين أ (50 ضعفا) | جيبكو / لايف تكنولوجيز | 12587010 | |
| DMEM / NUT. MIX F-12 W / GLUT-I | Gibco / Life Technologies | 31331028 | |
| Neurobasal Med SFM | Gibco / Life Technologies | 21103049 | |
| 2-mercaptoethanol | Gibco / Life Technologies | 31350-010 | |
| Penicillin-Steptomycin | Gibco / Life Technologies | 15140-122 | |
| GFP مصل الأرانب متعدد النسيلة الأجسام المضادة | Gibco / Life Technologies | A-6455 | |
| مصل الحصان | Gibco / Life Technologies | 16050130 | |
| Alexa Fluor 488 Goat Anti-Rabbit ؛ | Gibco / Life Technologies | A11034 | |
| الأجسام المضادة للتوبولين متعددة النسيلة المضادة للبيتا III | Millipore | AB9354 | |
| غطاء زجاجي 13 مم | VWR | 631-0150 | |
| إطالة كاشف الذهب المضاد للتلاشي مع DAPI | Gibco / Life Technologies | P36931 | |
| Tween (R) 20 Bioextra ، سائل لزج | سيجما ألدريتش تشيمي | P7949 | |
| تريتون X-100 | Sigma Aldrich Chimie | X100-100ML | |
| الخلايا الليفية البشرية | Coriell Cell Line Biorepository | GM 4603 و GM 1869 | معهد كوريل للبحوث الطبية ، كامدن ، نيوجيرسي ، الولايات المتحدة الأمريكية |
| مجهر المسح الضوئي بالليزر متحد البؤر | Zeiss (ألمانيا) | LSM 700 | |
| Imaris Software | Bitplane AG و Zurich | 6.4.0 إصدار | Filament Tracer و Imaris XT وحدات ضرورية |
| برنامج Huygens | Huygens ، SVI ، إصدار هولندا | Pro | اختياري (لاختبار التفكيك) |
المراجع
- Durand, C., et al. SHANK3 mutations identified in autism led to modification of dendritic spine morphology via an actin-dependent mechanism. Molecular Psychiatry. 17 (1), 71-84 (2013).
- Arenallo, J. I., Espinosa, A., Fairen, A., Yuste, R., Defelipe, J.
الوصول مقيد. يرجى تسجيل الدخول أو بدء فترة تجريبية لعرض هذا المحتوى.
إعادة الطباعة والأذونات
